唾液蛋白质的分离及其主要成分的生物活性鉴定

1.应用聚丙烯酰胺凝胶电泳可将浓缩10倍的正常人全唾液分成至少13种以上蛋白质成分。2.为了便于鉴定,将电泳后的蛋白质各区带自阴极向阳极分为A,B,C,D,E五个区带组。3.经免疫双扩散法证实,最靠近阴极的A区带组为11S IgA,IgG在本实验中未能检出。4.淀粉酶是唾液中的主要蛋白质,活力很高,经Phadebas淀粉酶试验片定位鉴定,发现它主要存在于B区带。5.唾液中含有溶菌酶,对M.lysodeikticus有明显溶菌效应,其电泳冰动位置与C区带相当,A区带组也有溶菌作用,但活性较C区带组为低。     

唾液蛋白质的分离及其主要成分的生物活性鉴定

1.应用聚丙烯酰胺凝胶电泳可将浓缩10倍的正常人全唾液分成至少13种以上蛋白质成分。2.为了便于鉴定,将电泳后的蛋白质各区带自阴极向阳极分为A,B,C,D,E五个区带组。3.经免疫双扩散法证实,最靠近阴极的A区带组为11S IgA,IgG在本实验中未能检出。4.淀粉酶是唾液中的主要蛋白质,活力很高,经Phadebas淀粉酶试验片定位鉴定,发现它主要存在于B区带。5.唾液中含有溶菌酶,对M.lysodeikticus有明显溶菌效应,其电泳泳动位置与C区带相当,A区带组也有溶菌作用,但活性较C区带组为低。     

北京鸭乳酸脱氢酶同工酶的研究——Ⅱ.薄层等电聚焦电泳鉴定北京鸭LDH同工酶

对薄层等电聚焦电泳所分离的北京鸭乳酸脱氢酶(LDH)同工酶11条电泳区带,经热稳定性实验和低浓度尿素抑制实验鉴定发现,LDH 1是由5条亚带组成的,LDH 2和LDH 3也各由两条亚带组成。对这种LDH同工酶亚带的产生原因,进行了初步探讨,认为可能是蛋白质亚基在翻译后受到某种化学修饰所造成的。     

猪血纤维蛋白溶酶原的纯化及性质研究

 用偶联有L-赖氨酸的Sepharose 4B亲和柱对猪血纤维蛋白溶酶原进行分离纯化,所得酶原在酸性及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中显示单一蛋白质区带,在碱性条件下电泳及等电聚焦电泳表现出较明显的不均一性。还原及非还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得酶原分子量为88kD,经尿激酶激活后,进行还原SDS-凝胶电泳,出现两条新的蛋白质区带,分子量分别为63kD和26kD。酶原含中性糖1.35％,N-末端为异亮氨酸。尿激酶激活后产生的血纤维蛋白溶酶以对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯为底物,测得Km为4.2m mol/L,V_(max)为13.5 IU。6-氨基已酸对酶活性有双重影响。此外,还观察了胰蛋白酶对猪血纤维蛋白溶酶原的激活。     

三种革螨的蛋白质,糖蛋白,脂蛋白的比较研究

应用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳(PAGE)对3种革螨的蛋白质、糖蛋白和脂蛋白进行了检测。其中蛋白质尚首次采用SDS-PAGE进行分析。PAGE检测结果显示:格氏血厉螨可见15条蛋白带,4条糖蛋白带,4条脂蛋白带;溜下盾螨呈现15条蛋白带,5条糖蛋白带,5条脂蛋白带;鼠颚毛厉螨出现11条蛋白带,2条糖蛋白带和2条脂蛋白带。SDS-PAGE分析上述3种革螨分别显示出25、23、23条蛋白带。3种革螨的蛋白区带及Rf值均有明显的差别,糖蛋白、脂蛋白的电泳谱带也各异。     

蟾蜍红细胞与网织红细胞染色质蛋白的比较研究Ⅲ·HMG蛋白质

从亚洲蟾蜍(Bufo bufo asiaticus)与鸡红细胞核内分离纯化了HMG蛋白(Highmobility group proteins),经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,证明两者的电泳图谱不完全相同,在蟾蜍的红细胞内也能观察到与鸡HMG_(17)相对应位置上的蛋白质区带,但在鸡HMG_(14)相对应的位置上,却能观察到两条显著的蛋白质区带(A及B带)。此外,我们已把蟾蜍成熟红细胞与苯肼诱发后的网织红细胞内的HMG蛋白进行比较,证明两者有显著的差异。网织红细胞内HMG_A和HMG_B蛋白在含量上起了变化,却与成熟的红细胞相反。另外还出现了二条新的蛋白区带(C与D带)。初步的结果暗示了,HMG蛋白类似于非组蛋白、染色质蛋白,在量上的变化将会引起功能上的变化。     

意蜂与中蜂血淋巴蛋白质成份的研究

本实验用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了两个蜂种的血淋巴蛋白质成分。意蜂和中蜂都是Apis属,血淋巴蛋白质电泳谱相似。但是,两蜂种以及同一蜂种不同级别、不同发育阶段的电泳谱又各有特点。根据实验,我们把成年蜂血淋巴电泳谱分为11条带,雌蜂电泳谱上的带5是卵黄原蛋白;雄蜂卵黄原蛋白含量很少或测不出。 用Thorun方法,在聚丙烯酰胺凝胶平板电泳上测得意蜂卵黄原蛋白的分子量为185,000。     

两种纤毛虫营养细胞和休眠细胞蛋白组成的比较分析

应用生化抽提和SDS-PAGE方法显示,膜状急纤虫(Tachysoma pellionella)的营养细胞含38条蛋白谱带,休眠细胞含29条蛋白谱带,两者共有谱带为26条,特有谱带各为12条和3条,相似度为77.6%;休眠细胞的包囊壁含22条蛋白谱带,细胞脱包囊后残留的包囊壁含15条蛋白谱带,两者共有谱带为14条,特有谱带各为8条和1条,相似度为76%。包囊游仆虫(Euplotes encysticus)的营养细胞和休眠细胞均含23条蛋白谱带,两者共有谱带为19条,特有谱带各为4条,相似度为82.6%;休眠细胞的包囊壁和细胞脱包囊后残留的包囊壁均含20条蛋白谱带,两者共有谱带为19条,特有谱带均为1条,相似度为95%。结果表明,两种纤毛虫的营养细胞向休眠细胞转化过程中,细胞结构的主要蛋白质成分发生了明显变化,这些变化与细胞在不同生理状态下结构的分化及其生命活动特征相关。形成“毛基体吸收型包囊”的急纤虫与形成“毛基体非吸收型包囊”的游仆虫相比较,前者营养期和休眠期细胞蛋白组成有更明显的差异,这可能与其细胞结构更大程度的脱分化有关;根据纤毛虫休眠细胞的包囊壁和细胞脱包囊后残留的包囊壁两者蛋白组成的差异推测,前者包囊壁可能含有与休眠细胞生命活动相联系的“活性”成分。     

一步柱层析纯化螺旋藻藻蓝蛋白

采用硫酸铵盐析结合疏水层析技术分离纯化螺旋藻中的藻蓝蛋白.试验结果表明,在磷酸盐缓冲体系下藻蓝蛋白粗提液经1.25 mol/L硫酸铵盐析处理后离心脱气,只需采用一步Macro-Prep Methyl 疏水层析,藻蓝蛋白的纯度（A620/A280）可提高到4.017,回收率为19.38%.特征吸收峰和荧光光谱证实纯化后的产物符合藻蓝蛋白的性质,Native-PAGE电泳只出现单一染色带,表明纯化得到的藻蓝蛋白是均一的;SDS-PAGE电泳出现分子量为15.4 kDa、17.3 kDa的2条染色带,分别为藻蓝蛋白的α亚基与β亚基.     

高粱热激蛋白(HSPs)的电泳分析与雄性不育性

本文以高粱雄性不育系为材料进行了热激蛋白的研究。苗期单向电泳表明,保持系在热激(40℃)过程中可溶性蛋白有24条带,对照(28℃)22条,出现2条带差异,不育系在热激后有33条带,比对照28条多5条,且有4条加强带,共9条带产生差异。苗期双向电泳,不育系在热激后比对照有19点产生差异,保持系热激后与对照比较有6点产生差异。表明双向电泳揭示了热激后蛋白质在分子量和电性方面有差异。花粉母细胞期幼穗的热激蛋白,不育系对照可溶性蛋白仅有3条带,热激后有11条,8条带有差异。保持系对照有10条带,热激后有15条,1条加强,共6条带有差异。幼穗期不育系蛋白质突出的缺少19kd以上的大分子量的带。从个体发育看,不育系由苗期可溶性蛋白比保持系带数多,发育到花粉母细胞期比保持系突出地减少,尤其是大分子量的蛋白带消失,热激后明显地增加了与可育的保持系相同的蛋白成份,表明不育系有其特殊的基因调控。     

草菇病毒——一种新的食用菌ds-RNA病毒

自草菇(Folvariella~olvacea)子实体中分离到一种等轴对称直径为35rim左右的病毒颗粒。病毒样品经琼脂糖电泳显示一条区带,并具有典型核蛋白的紫外吸收光谱。最大吸收为E257,最低吸收为E230,A260／280=1．96。经SDS-不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳解离病毒,出现一条主要衣壳多肽的电泳带,分子量为60,000道尔顿。病毒核酸的最大吸收在258nm,最低吸收在232nn,A260/280=2．0,琼脂糖电泳为一个组分。     

16份石榴RAPD扩增产物的两种电泳方法检测及其序列特征

本实验以16个石榴品种为实验材料,筛选出10个重复性及多态性均较好的引物进行RAPD分析。分别采用琼脂糖凝胶以及聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳检测方法对PCR扩增结果进行检测并对其结果进行比较,结果显示,两种电泳方式均能得到较为清晰的扩增条带,且两种电泳方式获得的条带总数及多态性条带数均有所不同,琼脂糖凝胶电泳方法共检测出76条带,其中有43条为多态性谱带,多态性比率为56.4%;而在PAGE电泳方法共检测出123条谱带,多态性谱带数为87条,多态性比率为70.95%。PAGE电泳方法检测出的条带数约为琼脂糖凝胶电泳方法检测出条带数的1.5倍。基于两种电泳方法所得RAPD标记的多态性位点,利用NYSYS软件计算遗传相似系数,并构建遗传关系聚类图,分析结果显示,石榴遗传多样性丰富,两种电泳方法所得聚类结果大致相同,可以利用RAPD分子标记及两种电泳检测方法对不同数量的石榴进行分子水平的品种鉴定和遗传多样性的分析。同时通过对来自几个引物随机挑选的17个片段进行克隆,测序结果显示17个片段都是对应引物的RAPD扩增产物,其中有3条是编码蛋白的基因片段,表明了RAPD不仅扩增基因组上的非编码蛋白序列,同时也可以扩增编码蛋白的基因片段,这为更好地认识RAPD技术的实质以及促进石榴产业的发展提供了理论依据。     

花粉中的收缩蛋白与细胞质流动

从植物的花粉中提取得到了肌球蛋白和肌动蛋白,用4－30％SDS梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳测定丝瓜花粉肌球蛋白重链的分子量为165kD.花粉肌球蛋白的ATP酶活性与兔肌肌球蛋白ATP酶活性具有一致的特征,即在0．5mol/l KCl的条件下,其K＋－EDTA ATP酶活性最高,Ca^2+-ATP酶活性次之,Mg^2+-ATP酶活性最低,用SDS制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,制备得到了电泳纯的玉米花粉肌动蛋白,用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了肌动蛋白的分子量,结果表明,花粉肌动蛋白与兔肌肌动蛋白具有相同的分子量（43kD)。药物处理表明,细胞松弛素B,氯丙嗪和氯四环素对花粉管细胞质流动均有抑制作用。而秋水仙碱对细胞质流动没有抑制作用,对肌球蛋白和肌动蛋白在花粉管细胞质流动中所起的作用进行了讨论。     

花粉中的收缩蛋白与细胞质流动

从植物的花粉中提取得到了肌球蛋白和肌动蛋白,用4－30％SDS梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳测定丝瓜花粉肌球蛋白重链的分子量为165kD.花粉肌球蛋白的ATP酶活性与兔肌肌球蛋白ATP酶活性具有一致的特征,即在0．5mol/l KCl的条件下,其K＋－EDTA ATP酶活性最高,Ca^2 -ATP酶活性次之,Mg^2 -ATP酶活性最低,用SDS制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,制备得到了电泳纯的玉米花粉肌动蛋白,用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了肌动蛋白的分子量,结果表明,花粉肌动蛋白与兔肌肌动蛋白具有相同的分子量（43kD)。药物处理表明,细胞松弛素B,氯丙嗪和氯四环素对花粉管细胞质流动均有抑制作用。而秋水仙碱对细胞质流动没有抑制作用,对肌球蛋白和肌动蛋白在花粉管细胞质流动中所起的作用进行了讨论。     

一种具有抑制糜蛋白酶活性的血清DNA结合蛋白质的纯化和理化特性

 本文采用离子交换层析,DNA亲和层析和硫酸铵盐析三步从人血清中分离纯化了一种肿瘤相关DNA结合蛋白质(64DP)。本方法较简便,产率提高。经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳鉴定纯度符合要求。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量为64,000。等电聚焦电泳测得等电点在4.2左右。醋酸纤维膜电泳和转移电泳表明其为一种α_1球蛋白。过碘酸西夫氏糖蛋白染色呈阳性反应。氨基酸分析和酶抑制试验证实64DP与α_1抗縻蛋白酶很相似。     

甘蓝型油菜(Eru CMS)与甘蓝种间杂种的同工酶和蛋白质分析

经胚抢救获得甘蓝型油菜(Brassica napus L.)(Eru CMS)与甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)种间杂种,前期经过流式细胞仪、柱头染色体数目、花粉活力等分析获得一些真杂种。利用电泳法,对真杂种植株的3种同工酶(SOD、EST、COD)和蛋白质进行详细分析,了解了杂种与亲本的同工酶和蛋白质的特性差异。结果表明,杂种与亲本之间的同工酶和蛋白质存在较明显的差异:杂种的SOD、COD的酶带表现为偏父本甘蓝型;杂种的EST的酶带表现为偏母本油菜型;杂种的蛋白质电泳表现为不仅具有双亲的特征蛋白带,也有其自身特征蛋白带。     

5种樱桃属植物的POD、CAT和SOD同工酶分析

采用聚丙烯酰胺垂直平板凝胶电泳技术对5种樱桃属植物的过氧化物酶(POD)同工酶、过氧化氢酶(CAT)同工酶和超氧化物歧化酶(SOD)同工酶的酶谱特征进行分析,结果表明:5种樱桃属植物共电泳出12条POD同工酶酶带、4条CAT同工酶酶带和8条SOD同工酶酶带;其中,POD同工酶酶谱具有5条共同谱带,CAT同工酶4条,SOD同工酶5条。冬季休眠期的樱桃属植物,POD与SOD同工酶谱带的多样性比较丰富,不同植物之间的谱带差异较大;而CAT同工酶谱带差异不明显。     

江豚血液学的初步研究

本文对从长江中获得的江豚进行了血液学、血液化学特征的测定和血红蛋白、血浆蛋白电泳图谱的研究。发现江豚的嗜中性粒细胞所占百分比较高,淋巴细胞的百分比较低,具有嗜碱性粒细胞。江豚血红蛋白的电泳类型为Ⅰ-Ⅱ,即电泳相对迁移率在人类Hb S和Hb F之间,并有4条非血红素蛋白带(NHP)。用醋酸纤维薄膜作支持物进行电泳,血浆的总蛋白(TP)带可分成8条主要的区带,从阳极到阴极依次是:前白蛋白(ζ)、白蛋白(A)和6条后白蛋白带(PA);然而用聚丙烯酰胺凝胶作支持物共可分成16条区带,其中14条后白蛋白带。脂蛋白(Lp)在聚丙烯酰胺凝胶上可分成4条区带:α_1-脂蛋白、α_2-脂蛋白和β-脂蛋白,分别相当于聚丙烯酰胺凝胶上总蛋白带电泳图谱中的PA9、PA10和PA11,而前-β-脂蛋白和乳糜微粒在起点处。运铁蛋白(Tf)的电泳图为一条区带,相当于PA6。     

霍乱弧菌EL—Tor35A3菌株外膜蛋白主区带的纯化

选用霍乱弧菌ＥＬ－Ｔｏｒ生物型３５Ａ３菌株（血清稻叶型）以ＥＤＴＡ－溶菌酶法与超速离心法提取其外膜蛋白,并将聚丙烯酰胺凝胶电泳后一条蛋白主区带分离。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该蛋白主区带的分子量为２５ｋＤ,免疫电泳显示一条线,免疫双扩试验表明,不同的霍乱弧菌菌株均有该蛋白朱存在。     

霍乱弧菌EL－Tor35A3菌株外膜蛋白主区带的纯化

选用霍乱弧菌ＥＬ－Ｔｏｒ生物型３５Ａ３菌株（血清稻叶型）以ＥＤＴＡ－溶菌酶法与超速离心法提取其外膜蛋白,并将聚丙烯酰胺凝胶电泳后一条蛋白主区带分离。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该蛋白主区带的分子量为２５ｋＤ,免疫电泳显示一条线,免疫双扩试验表明,不同的霍乱弧菌菌株均有该蛋白抗原存在。