我国水稻条纹叶枯病病原性质的研究

病样经提纯后,在电镜下获得3nm丝状和8nm分枝丝状结构,病毒样在蔗糖密度梯度离心后产生三条沉降带。经过电泳分析表明:病毒外壳蛋白为单一组分,分子量约为3.69×10~4dalton;病毒核酸有三种大小不同的组分,分子量为0.9,1.0,1.4×100dalton(混合样)。用提纯的抗原制备抗血清。提纯病毒抗原与所制备抗血清、与我国过去研究制备的抗血清及与日本制备的条纹叶枯病单克隆抗体都有血清学反应。     

棉铃虫核型多角体病毒的血清学研究

用提纯的棉铃虫核型多角体病毒(NPV)的多角体蛋白和病毒粒子免疫家兔制备抗血清,用免疫扩散和对流免疫电泳对四林棉铃虫NPV的多角体蛋白和病毒粒于进行了血清学比较研究。四株棉铃虫NPV分为两个包埋类型：单粒包埋型和多粒包埋型。soI．{3株和H．M株属前者,VHA 273株和XIA 10株属后者。同一株NPV的多角体蛋白或病毒粒子只与它们同源抗血清有反应。它们之间无交叉反应,表明同一株NPV的多角体蛋白和病毒粒子各具有特异的抗原。四株NPV的多角体蛋白不仅与同源的多角体蛋白抗血清有反应,而且也与异 源的多角体蛋白抗血清有交叉反应,说明四株NPV多角体蛋白具有共同的抗原。而四株病毒粒子与同源的病毒粒子抗血清有反应,在它们之间无交叉反应,表明四株NPv病毒粒子各具有自己特异的抗原。     

应用亲和层析法提纯鸡马立克氏病病毒pp38基因重组产物

利用鸡马立克氏病病毒(MDV)Ⅰ型特异单克隆抗体H_(19)致敏Sepharose 4B-CNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒pp38基因重组产物,获得良好效果。提纯的蛋白质在SDS-PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在免疫印迹试验中该蛋白质条带也能被单克隆抗体H_(19)识别。利用该提纯的重组pp38免疫小鼠,所制备的小鼠抗血清在免疫荧光染色试验中不仅能与感染重组病毒的昆虫细胞Sf9反应,也能和Ⅰ型MDV型感染的鸡胚成纤维细胞反应。     

应用亲和层析法提纯 鸡马立克氏病病毒pp38基因重组产物

利用鸡马立克氏病病毒(MDV)1型特异单克隆抗体H19致敏Sepharose 4B—cNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒pp38基因重组产物,获得良好效果。提纯的蛋白质在SDS—PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在免疫印迹试验中该蛋白质条带也能被单克隆抗体H19识别。利用该提纯的重组pp38免疫小鼠,所制备的小鼠抗血清在免疫荧光染色试验中不仅能与感染重组病毒的昆虫细胞Sf9反应,也能和Ⅰ型MDV型感染的鸡胚成纤维细胞反应。     

齿兰环斑病毒的鉴定及其抗血清的制备与应用

根据病毒生物学特性、粒体形态和血清学性质等初步确定从在厦门地区种植的表现为褪绿、褐色坏死斑症状的卡特兰(Cattleya)病株上分离的一个病毒分离物为齿兰环斑病毒(Odontoglossumringspotvirus,ORSV)。通过摩擦接种6科27种(或品种)指示植物,结果其中4科8种(或品种)表现症状,与烟草花叶病毒不同;理化性质试验表明稀释限点为5×10-5,致死温度为92℃～94℃,体外存活期超过3个月。提纯病毒为长约300nm,宽约18nm杆状粒体。SDS-PAGE电泳分析表明其外壳蛋白分子量约为17kDa。该分离物与ORSV抗血清具有强阳性反应、而与TMV抗血清反应微弱,认为该病毒为ORSV分离物。用纯化病毒免疫家兔,成功地制备出特异性抗血清,并通过Dot-ELISA法对厦门地区种植的兰花病株进行了检测研究。     

苹果茎沟病毒的提纯和检测

用生物学和血清学方法从苹果分离鉴定出苹果茎沟病毒G-2和TC-3分离物,采用皂土澄清、15％蔗糖垫超离心、10％～40％蔗糖梯度离心等步骤,获得提纯的病毒样品,紫外吸收比值A_(260/280)为1.15。13％SDS-PAGE法测定的病毒外壳蛋白分子量为31000。用提纯的苹果茎沟病毒G-2分离物制备的兔抗血清,PTA-ELISA测定的效价为1/64000,特异性强。用PAS-ELISA可成功地检测出苹果茎沟病毒,此外还试验了DAS-ELISA,并证明其检测苹果茎沟病毒的效果与PAS-ELISA一致。     

齿兰环斑病毒的鉴定及其抗血清的制备与应用

根据病毒生物学特性、粒体形态和血清学性质等初步确定从在厦门地区种植的表现为褪绿、褐色坏死斑症状的卡特兰(Cattleya)病株上分离的一个病毒分离物为齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV).通过摩擦接种6科27种(或品种)指示植物,结果其中4科8种(或品种)表现症状,与烟草花叶病毒不同;理化性质试验表明稀释限点为5×10-5,致死温度为92℃～94℃,体外存活期超过3个月.提纯病毒为长约300nm,宽约18nm杆状粒体.SDS-PAGE电泳分析表明其外壳蛋白分子量约为17kDa.该分离物与ORSV抗血清具有强阳性反应、而与TMV抗血清反应微弱,认为该病毒为ORSV分离物.用纯化病毒免疫家兔,成功地制备出特异性抗血清,并通过Dot-ELISA法对厦门地区种植的兰花病株进行了检测研究.     

水稻条纹病毒病害特异蛋白的提纯及血清学特性

应用差别ｐ Ｈ 值沉淀蛋白质的原理,建立了水稻条纹病毒病特异蛋白（ Ｓ Ｐ） 的两种提纯方法。这两种方法都可以从病叶中提纯到大量的 Ｓ Ｐ,其粗提纯量分别为０ ．８ 和２ ．０ ｍｇ／ｇ 病叶。通过 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 分离后得到了精提纯的蛋白,其分子量为２０ ．１ ｋ Ｄａ 。将粗提纯和精提纯的 Ｓ Ｐ 分别免疫兔子,制备出效价为５１ ２００ 和６ ４００ 的抗血清。将效价为６ ４００ 的高度特异性的抗血清用于研究 Ｒ Ｓ Ｖ Ｓ Ｐ 与 Ｒ Ｓ Ｖ Ｃ Ｐ 及同属的水稻草状矮化病毒（ Ｒ Ｇ Ｓ Ｖ） Ｓ Ｐ、 Ｃ Ｐ 之间的血清学关系,结果表明, Ｒ Ｓ Ｖ Ｓ Ｐ 的抗血清与 Ｒ Ｇ Ｓ Ｖ Ｃ Ｐ、 Ｒ Ｓ Ｖ Ｃ Ｐ 之间无反应,但可与 Ｒ Ｇ Ｓ Ｖ Ｓ Ｐ 微弱反应;而 Ｒ Ｇ Ｓ Ｖ Ｓ Ｐ、 Ｃ Ｐ 及 Ｒ Ｓ Ｖ Ｃ Ｐ 的抗血清与 Ｒ Ｓ Ｖ Ｓ Ｐ 之间都无血清学反应。结果证实了 Ｒ Ｓ Ｖ 和 Ｒ Ｇ Ｓ Ｖ 之间存在着进化上的亲缘关系     

间接酶联免疫吸附试验快速检测无毒唐菖蒲试管苗

本文利用间接酶联免疫吸附试验检测了从北京地区栽种的唐菖蒲上分离到的一株病毒的提纯制品和唐菖蒲试管苗的病叶粗提液。用提纯的病毒免疫家兔,抗血清的滴度为1：62500。提纯病毒的最适包被浓度为2．5μg/ml。能检测提纯病毒的最低浓度为4ng／ml。侵染性试验检测提纯病毒的最低浓度为30Ⅱg／mI。在间接酶联免疫吸附试验中,该病毒与烟草花叶病毒普通株有血清学相关性。     

I型马立克氏病毒38kD磷蛋白与Ⅱ和Ⅲ型病毒间的交叉免疫反应

由致病性Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV)特异性的单克隆抗体H_(19)制备亲和层析柱,从感染重组杆状病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞系Sf9细胞中提纯MDV的pp38基因表达产物,以此免疫小鼠制备抗血清,测定其与不同型MDV毒株感染的鸡胚成纤维细胞免疫反应性,同时也用不同型MDV毒株(HVT,Z4)制备的抗血清和自然感染发病鸡血清分别与感染重组病毒的Sf9细胞进行免疫交叉反应.试验结果表明,完整的Ⅰ型MDV来源的pp38基因产物与所试Ⅱ型Z4株和Ⅲ型HVT Fc126毒株在抗原性上有显著交叉反应.这一结果表明,在Ⅱ型和Ⅲ型MDV毒株中可能存在着pp38的类似物.     

水仙病毒血清学研究I.水仙花叶病毒抗血清的制备及其应用

经人工接种分离纯化的水仙花叶病毒（NMV）,以表现局斑的苋色藜叶片提纯材料,经聚乙二醇（PEG6000）沉淀、差速离心和蔗糖密度离心提纯后,进行6次家兔免疫注射制备抗血清。结果表明注射后3周左右效价最高,经毛细管沉淀方法测定了可达1：5,000。用琼脂扩散方法将此NMV抗血清与来自荷兰的NMV抗血清进行比较,结果发现二者的抗体性相同。应用此法制成的NMV抗血清,以琼脂双扩散、ELISA方法分别对30份水仙组培脱毒试管苗样本进行带毒率检测。结果表明所测得的平均带毒率分别为33．3×和80．0％,并用IEM测定方法验证了ELISA结果的可靠性和准确性。     

水仙病毒血清学研究Ⅰ．水仙花叶病毒抗血清的制备及其应用

经人工接种分离纯化的水仙花叶病毒（NMV）,以表现局斑的苋色藜叶片为提纯材料,经聚乙二醇（PEG600）沉淀、差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯后,进行6次家兔免疫注射制备抗血清。结果表明注射后3周左右效价最高,经毛细管沉淀方法测定可达1：5,000。用琼脂双扩散方法将此NMV抗血清与来自荷兰的NMV抗血清进行比较,结果发现二者的抗体性相同。应用此法制成的NMV抗血清,以琼脂双扩散、ELISA方法分别对30份水仙组培脱毒试管苗样本进行带毒率检测。结果表明所测得的平均带毒率分别为33．3％和80．0％,并用IEM测定方法验证了ELISA结果的可靠性和准确性。     

葡萄卷叶病毒的纯化、血清学研究及其在脱毒组培苗检测中的应用

将具有典型葡萄卷叶病(Grapevine leafroll diseas,GLRD)症状的葡萄组织,经差速和硫酸铯—蔗糖密度梯度离心,提纯了GLRV,并制备了兔抗血清。电镜下可观察到长度从600～2000nm的线形病毒颗粒,其中以1400nm左右为主。免疫电镜结果表明线形病毒颗粒能被美国的NY-1分离株抗血清(Ⅲ型)所修饰。在间接ELISA中提纯制品与GLRV的Ⅲ、Ⅳ、Ⅱ型抗血清均能产生免疫反应。与Ⅲ型抗血清产生较强的免疫反应,Ⅳ型次之,Ⅱ型最弱。在SDS-免疫双扩散实验中病组织韧皮部粗提液与GLRV的Ⅲ,Ⅳ、Ⅱ型抗血清均产生免疫沉淀线。从而推测我国葡萄园内的葡萄卷叶病很可能由2种或3种卷叶病毒感染所致.采用A蛋白夹心酶联免疫吸附试验(PAS-ELISA)检测葡萄试管苗,Ⅲ型抗血清和自制抗血清的平行测试结果基本相符,共获得11个生食葡萄和10个山葡萄品种的脱葡萄卷叶病毒和扇叶病毒的组培苗,扩繁后田间试种表现出良好的农艺性状。     

葡萄卷叶病毒的纯化,血清学研究及其在脱毒组培苗检测中的应用

将具有典型葡萄卷叶病(Grapevine leafroll diseas,GLRD)症状的葡萄组织,经差速和硫酸铯—蔗糖密度梯度离心,提纯了GLRV,并制备了兔抗血清。电镜下可观察到长度从600～2000nm的线形病毒颗粒,其中以1400nm左右为主。免疫电镜结果表明线形病毒颗粒能被美国的NY-1分离株抗血清(Ⅲ型)所修饰。在间接ELISA中提纯制品与GLRV的Ⅲ、Ⅳ、Ⅱ型抗血清均能产生免疫反应。与Ⅲ型抗血清产生较强的免疫反应,Ⅳ型次之,Ⅱ型最弱。在SDS-免疫双扩散实验中病组织韧皮部粗提液与GLRV的Ⅲ,Ⅳ、Ⅱ型抗血清均产生免疫沉淀线。从而推测我国葡萄园内的葡萄卷叶病很可能由2种或3种卷叶病毒感染所致.采用A蛋白夹心酶联免疫吸附试验(PAS-ELISA)检测葡萄试管苗,Ⅲ型抗血清和自制抗血清的平行测试结果基本相符,共获得11个生食葡萄和10个山葡萄品种的脱葡萄卷叶病毒和扇叶病毒的组培苗,扩繁后田间试种表现出良好的农艺性状。     

水稻条纹病毒蛋白与核酸的特性

提纯的水稻条纹病毒(云南宜良分离物)在电镜下的形态为多型性,但主要是宽8-10 nm,长80-250的分枝丝状体,有些为直径3 nm或8 nm的开环环状体,有些为13 nm宽,130-190 nm长的丝状体,但其基本结构应是直径3 nm、长度不等的丝状体.经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,vRNA4编码的病害特异蛋白(SP)分子量为19.9 kDa,而vcRNA3编码的外壳蛋白(CP)约为33.6 kDa.在非变性条件下,RSV的4条ssRNAs大小分别为3.0×106(ssRNA1)、1.2×106(ssRNA2)、0.9×106(ssRNA3)和0.8×106 Da(ssRNA4),有时出现一条大小为0.58×106 Da的单链RNA(ssRNA5);而4条dsRNAs的分子量分别为4.9×106(dsRNA1)、2.8×106(dsRNA2)、2.0×106(dsRNA3)和1.7×106 Da(dsRNA4).利用制备电泳分离提纯的外壳蛋白免疫家兔,得到了高特异性的抗血清.A蛋白夹心ELISA检测结果表明,RSV-CP与水稻草状矮化病毒(RGSV)CP抗血清有微弱的反应,但与RSV、RGSV的SP抗血清没有反应,而RSV-CP抗血清与RSV-SP及RGSV的SP、CP都无血清学关系,这个结果表明RGSV与RSV之间在进化上具有一定的亲缘关系.     

马铃薯Y病毒外壳蛋白基因表达效率影响因素的研究

马铃薯Y病毒(PVY)属病毒大多以经济作物为寄主,是农作物、牧草、园艺和香料作物的主要病害,危害极大。通常,对该属病毒的鉴定和检测使用ELISA法。但由于病毒制备工作繁琐,不易得到很好的抗血清,至使该法不能广泛使用一目前,已有研究表明PVY外壳蛋白具有种属专一性,是该病毒属鉴定和检测的极为有用的指标。通过基因工程生产的PVY外壳蛋白,可以作为制备该病毒属抗血清的最有效抗体。     

马铃薯种薯生产的研究III．马铃薯Y病毒抗血清制备和诊断方法

用0.1 M Tris-Hcl(内含0.05M EDTA)或0．5M PB作提取液,以含0．5M,尿素的0.01 M PB回溶病毒沉淀,以防止病毒凝聚。通过PEG沉淀和反复两次差速离心,提取了由马铃薯“男爵”分离的阿Y分离物。电镜照片表明为形态均一的弯曲眭线状粒体。产量约为2毫克／100克鲜鼋叶片。以PVY—I抗原免疫家兔,用Frd全佐剂进行肌肉注射的方法,制备出PvY-I抗血清,其妓价在2560—5l 20。抗血清和PVx、rMV分离物,以及正常烟草叶片汁液无明显反应。应用PVY_I抗血清冻干剂,用微量凝聚和微量沉淀的方法鉴定马铃薯幼芽和感Y痫毒叶片汁液中的Y病毒,表明具有一定可靠性。由制备的抗血清提取免疫球蛋白致敏乳胶,可测出提纯的PvY抗原最低含量为L．52—2．2微克／毫升,可测出感染烟草叶片汁液的最高稀释度为I：100。制备的抗血清冻干粉和微量凝聚的血清学方法已用于1978和l 979年内蒙古自冶区乌盟后旗无病毒原种场的种薯田间鉴定。     

玉米矮花叶病毒提纯及特性的研究

改进病毒纯化方法,获得了较高纯度、较强侵染活性的提纯病毒制品。提纯病毒的产量为0.7—1.2mg/100g病叶,病毒粒体大小为720—750×14nm,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得的外壳蛋白分子量为36000道尔顿,用提纯病毒免疫家兔得到较高特异性的抗血清,微量沉淀反应的效价为1/2048,间接ELISA法测出的感病叶汁液的最高稀释倍数为3200—6400倍。     

斜纹夜蛾多角体病毒包埋型病毒受体的鉴定

蔗糖密度梯度离心法提纯斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multinucleocapsid nucleopolyhdrovirus,SpltMNPV)包埋型病毒粒子(polyhedra-denved virus,PDV),以此病毒粒子作抗原,免疫家兔获得抗血清;用SDS裂解缓冲液提取斜纹夜蛾幼虫中肠组织细胞总蛋白.采用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA),利用抗PVD抗血清对病毒受体进行检测,结果表明斜纹夜蛾中肠细胞总蛋白中40kD、73kD、85kD的三种蛋白能够结合PDV.     

一个侵染山东大葱的胡葱黄条病毒分离物的鉴定

在山东章丘大葱上发现了一种引起畸形黄条症状的线状病毒。该病毒容易摩擦接种侵染大葱和胡葱,但不侵染其它22种测试植物,能经由豌豆蚜传播。病毒粒子形态和细胞病理特征具有马铃薯Y病毒科成员的典型特征。Western blot分析表明,提纯病毒制备的抗血清能与病毒自身外壳蛋白起特异性的强反应,与薤花叶病毒、晚香玉轻斑驳病毒、小西葫芦黄花叶病毒和芋花叶病毒外壳蛋白有较弱的反应。采用马铃薯Y病毒科简并引物PCR技术扩增了该病毒的基因组3′-末端部分序列,序列比较表明它为胡葱黄条病毒(SYSV),系统进化树分析表明世界范围内的SYSV分离物可以区分为4个主要群体,在一定程度上与寄主植物种类及地理分布相关。