细胞培养中癌变原理的研究——Ⅰ.用 N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍在体外诱发金仓鼠乳鼠肺细胞的恶性转化

用甲基硝基亚硝基胍(MNNG)在体外处理金仓鼠乳鼠肺细胞,可使之发生形态转化和恶性转化。实验室中所采用的MNNG 的浓度分别为4微克/毫升、2微     

正丁酸诱导转化细胞表面纤维粘连蛋白的研究

恶性转化的金仓鼠乳鼠肺成纤维细胞BHLB_4,在2 mmol/L丁酸长期处理下部分表型发生逆转,明显地趋于正常。用间接免疫荧光标记法发现BHLB_4细胞表面纤维粘连蛋白丧失,而丁酸处理可使其在细胞膜表面重新附着,成为纤维索状分布。进一步分离测定金仓鼠细胞表面Fn分子量为250 kDa,在正常对照和丁酸逆转的细胞表面含量相对较高。实验揭示了细胞表面Fn在分布和数量上的变化,同金仓鼠细胞的转化或逆转形态有较密切的关系,可以方便地作为我们初步衡量细胞是否转化的一个较为客观的指标。     

MNNG转化赤麂细胞株（KIZ—8401）的生长特性和核型观察

本文用MNNG(N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine)(甲基硝基亚硝基胍)转化赤麂肺成纤维细胞株(KIZ-7901)。转化的赤麂细胞株(KIZ-8401)具有新的核型,2n=8♂,细胞形态,细胞周期以及生物学特性都与未转化的细胞株(2n=7♂)不一样。转化细胞中还常见多倍体出现,细胞具有克隆生长能力。     

岱衢洋大黄鱼染色体核型分析

为补充岱衢洋海域产大黄鱼(Pseudosciaena crocea)的细胞遗传学数据,采用植物血球凝集素(8~10μg/g)及秋水仙素(1~2μg/g)活体腹腔注射培养,头肾细胞制片、空气干燥法制作染色体标本,显微观察象山港网箱养殖的岱衢洋产大黄鱼的染色体核型,用Micromeasure3.3软件测量染色体相对长度与臂比。结果显示,岱衢洋大黄鱼二倍体染色体数目为48,核型公式为2n=24st+24t,NF=48,染色体相对长度最长为5.53,最短为2.60,未发现异型染色体和随体。本研究的岱衢洋产大黄鱼染色体核型与以往报道的大黄鱼核型存在差异。     

鲤鱼染色体组人工调控的核型证明

以囊胚细胞制备鲤鱼单倍体染色体永久片并分析了单倍体染色体的核型。用囊胚细胞及白细胞培养法制取雌核二倍体及人工三倍体的永久片。以单倍体的核型为根据对人工二倍体及三倍体的染色体配对证明,人工诱发雌核二倍体的染色体是来自两个完整的染色体组,而人工三倍体的染色体则依不同个体而有差异。有部分个体的染色体来自三套完整的染色体组,但大部分个体是非整倍体,前者的雌性个体性腺发育正常,后者是不育的。     

小鼠L833细胞系及亚系标记染色体分析

粒细胞白血病细胞系L_(833)是由小鼠粒细胞白血病L_(801)的骨髓细胞经体外液体培养建立起来的体外细胞系,L_(833)-A和L_(833)-B是从L_(833)分离出的亚系。L_(833)、L_(833)-A和L_(833)-B细胞系及亚系核型分析采用胰蛋白酶消化、姬姆萨染色分带技术。结果显示L_(833)细胞系核型与L_(801)瘤株核型相同,染色体数量为亚二倍体,众数为39条,Y染色体丢失和存在一个大的标记染色体(Mr).L_(833)-A和L_(833)-B亚系各存在另一条标记染色体Mra和Mrb,同时标记染色体Mr仍然存在在L_(833)-A和L_(833)-B两个亚系内。     

人体淋巴细胞和中国仓鼠杂种细胞FD1的建立和鉴定

本文以中国仓鼠肺细胞Wg3-h(HGPRT~-)和正常人的淋巴细胞作为亲本,借助仙台病毒促融,HAT培养液选择得到FD1杂种细胞。通过观察细胞形态、Giemsa-11分化染色,G-分带、G-6-PD和LDH同工酶的电泳等一系列鉴定指标,以及细胞周期的研究,证实FD1细胞是包含全套中国仓鼠染色体组和少数几条人的染色体(5、11、12、21、22、xq~-、Y等)的杂种,其中还存在中国仓鼠和人体染色体的易位。FD1等杂种细胞的建立将有助于进行人类基因制图以及人体基因的结构功能和表达调控的研究。     

草原革蟀的染色体核型分析

我们前已报道过缺角血蟀和森林革蟀的染 色体［1,27。有关蟀类细胞遗传研究的概况和现 状,Olive：已作了全面综述［C3,41。目前已记载 了104种蟀类的染色体资料,二倍体染色体的 数目自12至34条。长期以来,前人沿用压片 法制片,地衣红染色,未能进行分带研究。我们 从1978年起,逐步改进方法,由压片法改为气 干法制片,由地衣红改为Giemsa染色,低渗处 理及分带技术取得成功。本文首次报告草原革 蟀早期胚细胞的核型、B染色体、C和G分带 以及核型分析的初步结果。     

大仓鼠的核型与B染色体研究

采用骨髓细胞染色体制片法,对分布于山东济南、泰山、东北长白山和陕西西安的大仓鼠的染色体组型、Ｇ－带、Ｃ－带和银染核型进行了分析研究。济南、西安和长白山的标本的二倍体数目和核型相似,２ｎ＝２８,２２ｔ＋４ｍ＋ＸＹ（ｓｔ,ｍ）。泰山标本的二倍体数目为２ｎ＝２８～２９,即在６７５％的中期相中多出了一条形态最小的端着丝粒染色体,这条染色体为Ｂ染色体,可能起源于Ｘ染色体。泰山标本的Ａ染色体组与上述３地标本相同。４地标本的Ｇ－带、Ｃ－带和银染核型相似。除Ｂ染色体外,每个端着丝粒染色体都具有着丝粒异染色质,ＡｇＮＯＲｓ较恒定地出现在Ｎｏｓ２,４,８,９,１３染色体上。也就是说大仓鼠的Ｂ染色体为Ｃ－带阴性,不携带核仁组织者。这种Ｂ染色体Ｃ－带阴性的特征在赤狐、黑家鼠和大林姬鼠朝鲜亚种中亦有报道。     

单纯疱疹病毒转化的细胞系生物学特性的研究

本文对我室用单纯疱疹病毒Ⅱ型转化的人胚肺细胞进行了某些生物学特性的研究。结果证明三系转化细胞均显示染色体数目增加,核型大多数为亚三倍体;对血清要求降低,能在1％血清培养液中生长,生长速度快;能被刀豆A(12.5—100μg/ml)凝集;软琼脂中能形成集落;能在裸鼠体内成瘤(两个系成瘤率100％,一个系成瘤率66％)。以上特性说明转化细胞具有恶性细胞的特徵。     

小鼠L833细胞系及亚系标记染色体分析

粒细胞白血病细胞系L₈₃₃是由小鼠垃细胞白血病L₈₀₁的骨髓细胞经体外液体培养建立起来的体外细胞系,L₈₃₃-A和L₈₃₃-B是从L₈₃₃分离出的亚系。L₈₃₃、 L₈₃₃-A和L₈₃₃-B细胞系及亚系核型分析采用胰蛋白酶消化、姬姆萨染色分带技术。结果显示L₈₃₃细胞系核型与L₈₀₁瘤株核型相同,染色体数量为亚二倍体,众数为39条,Y染色体丢失和存在一个大的标记染色体（Mr). L₈₃₃-A和L₈₃₃-B亚系各存在另一条标记染色体Mra和Mrb,同时标记染色体Mr仍然存在在L₈₃₃-A和L₈₃₃-B两个亚系内。     

茅舍血厉螨核型及染色体的C带、G带的研究

本文首次报道了一种革螨——茅舍血厉螨核型及染色体C带、G带的研究。用剖腹取卵法、玻璃纸压片、Giemsa染色,经分析茅舍血厉螨的核型,单倍体n=7,二倍体2n=14。 用氢氧化钡—吉姆萨技术显示茅舍血厉螨染色体C带。在第1、2、4、5染色体上出现恒定的C带部分,第3、6、7染色体上出现不恒定的C带部分。根据C带带型,茅舍血厉螨着丝点的位置可分为近中区域(sm),近端区域(St),末端区域(t)和末端点(T)四类。 G带分析用胰蛋白酶—吉姆萨技术显示。 本文对茅舍血厉螨的核型、革螨染色体研究中螨卵的收集方法和染液的改进、C带带型与着丝粒位置的确定和G带显带问题进行了讨论。     

仓鼠属三个种的核型分析

本文分析了仓鼠属三个种的常规核型及G带核型,即大搬仓鼠(Cricetulus triton)2n=28,长尾仓鼠(C.longicaudatus)2n=24,花背仓鼠(C.barabensis)2n=22。讨论时结合文献报道的短尾仓鼠(C.eversmanni),无斑短尾仓鼠(C.curtatus),灰仓鼠(C.migratorius)的有关核型资料作了比较,结果证明:(1)染色体是鉴别这6个种类的有效方法之一。(2)大搬仓鼠具有较原始的核型,可能是祖先进化中的一个早期分枝。(3)这6个种类的染色体进化机制主要是罗伯逊融合,但也有染色体的断裂、易位和倒转。     

美国阿巴拉契亚山地区五种有尾类核型的比较研究(无肺螈科Plethodonidae,有尾目Caudata)

采用体内注射秋水仙素溶液,肠管、脾脏及精巢作实验材料,制成细胞悬浮液,摘片、空气干燥法或直接压片法制作染色体玻片标本。分析比较了美国东南部南阿巴拉契亚山(Southern AppalchianMountain)地区无肺螈科两属五种Desmognathus monticola, D. quadramaculatus, D. ochrophaeus,Eurycea junaluska E. bislinea?a的核型,它们的二倍体数均为28,没有发现与性别有关的异形染色体。分析表明这些有尾类核型演化途径可能是臂间倒位(periceatric inversioa)和相互易位(reciprocal translocation)。 Desmognathus quadramaculatus, D. och(?)phaeus, Eurycea junaluska三个种的核型是首次报道。     

用人DNA介导的基因转移修复中国仓鼠细胞的HPRT缺陷

 中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)经N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱变和6-巯基鸟嘌呤(6-TG)选择,得到稳定的次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)缺陷细胞株,酶活性仅为野生型的6.5％。用磷酸钙共沉淀法和电脉冲法向HPRT-细胞转移人宫颈癌细胞(HeLaS_3)基因组DNA,纠正了CHO细胞的HPRT缺陷。酶活性提高了6.9倍,达到野生型的45％。用Alu序列探针进行分子杂交,证实经过基因转移并连续传代15次以上的受体细胞中含人DNA序列。表明人的有关基因已稳定地整合到CHO细胞的染色体中。     

从核酸免疫看染色体分带的机理

染色体分带技术是用某些细胞化学和免疫化学显色方法,在染色体臂、着丝点上显示出着色深浅相间的带谱的技术。一、染色体分带技术简述 Caspersson等(1968)首先发现动植物细胞的中期染色体用喹吖咽氮芥染色后,在荧光显微镜下染色体呈现明、暗相间的荧光带谱,简称Q-带。此后Arrighi和徐道觉(1971)报道了一种对着丝点异染色质区有特殊     

大绒鼠的分带核型研究

本文采用G带、C带和银染核仁组织者(Ag-NORs)等技术,对大绒鼠(Eothe nomys miletus miletus)的核型进行观察分析。结果表明:2n=56,常染色体和性染色体皆为单臂染色体。X染色体的长度接近于No.1染色体,Y染色体的长度相当于14号染色体。G分带可鉴别每对染色体的特征,C-带核型中全部着丝点C带均显示不同程度的阳性。Y染色体整条呈阳性。Ag-NORs有5对,分别分布于1、2、6、14和27号染色体的着丝粒附近。通过核型分析,对大绒鼠的分类地位进行了初步探讨。     

小鼠腹水型肝癌的核型分析

本文以几种分带Giemsa染色技术和Ag—As染色,分析小鼠腹水肝癌的核型。结果表明,小鼠腹水肝癌是一种近二倍体肿瘤,染色体众数为42—43,有标记染色体4—5条。2—3条染色体带有银染色阳性的核仁组织者,后者常出现在M1和M3两条标记染色体的次缢痕部位。     

泉水鱼的细胞遗传学分析

以泉水鱼(Pseudogyrinocheilus prochilus)的肾为材料,采用体内注射植物血球凝集素(PHA)和秋水仙素、肾组织细胞短期培养、常规空气干燥法制备泉水鱼染色体标本,对其核型进行分析。以泉水鱼外周血细胞为样本,鸡(Gallus gallus)血细胞DNA含量(2.50 pg/2c,2c指二倍体)为标准,用流式细胞仪测定了泉水鱼的DNA含量。结果表明:(1)泉水鱼的染色体数量为2n=50,核型公式为12m+14sm+14st+10t,总臂数NF=76,未发现性别相关的异型染色体;(2)泉水鱼的DNA含量为鸡血对照的(1.05±0.04)倍,其绝对DNA含量为(2.62±0.10)pg/2c。泉水鱼的染色体数目和DNA含量显示出二倍体的特征。     

猪耳皮肤成纤维细胞的培养

本研究以猪耳皮组织为材料,采用胰蛋白酶冷热处理结合法成功地分离和培养了猪耳皮肤成纤维细胞。此方法的细胞存活率相对于胰蛋白酶热处理法较高。传代细胞与原代细胞的形态和生长速度均相似。传代细胞未检测到凋亡现象。细胞已传至15代以上,染色体倍性正常,说明我们所建立的胰蛋白酶冷热处理结合法可以快速有效的分离和培养猪耳皮肤成纤维细胞,并且能稳定的进行传代培养。