新生BALB/c小鼠大脑皮质神经元细胞培养方法的建立

目的:经改良和优化,建立高纯度BALB/c小鼠大脑皮质神经元培养的方法.方法:采用L-多聚赖氨酸包被细胞培养板,取新生BALB/c小鼠(出生24 h内)大脑皮质组织,经0.25%胰酶消化后吹打成单个细胞,按1×106/孔接种于35 mm的六孔板中,用神经元细胞培养种植液培养6 h后换神经元细胞培养饲养液,培养40 h时...     

pH和CO2对大鼠肺微血管和主动脉内皮细胞NOS活性及mRNA表达的影响

为从蛋白水平和基因表达水平探讨ＮＯ在高碳酸血症引起肺血管收缩而导致肺动脉高压中的作用环节 ,本实验采用体外培养大鼠肺微血管内皮细胞 (ＰＭＥＣｓ) ,分别研究单纯改变 ｐＨ与单纯改变ＣＯ2 浓度对其一氧化氮合酶 (ＮＯＳ)活性及其ｍＲ ＮＡ表达的影响 ,并比较ＰＭＥＣｓ和大血管主动脉内皮细胞 (ＡＥＣｓ)的异同。1　材料和方法用ＳＤ大鼠按Ｃｈｅｎ方法在ｐＨ 7.4、5 %ＣＯ2 、37℃ＤＭＥＭ液中分离和培养ＰＭＥＣｓ和ＡＥＣｓ。取ＥＣｓ(1～ 2代 )以 1×1 0 5Ｃｅｌｌ/ｍｌ传代于预先放有盖玻片的培养瓶内 ,1 2ｈ后吸弃ＤＭＥＭ液 ,…     

新生鼠大脑皮质和中脑多巴胺神经元原代培养中NGF诱导c-jun mRNA表达的研究

用神经生长因子（nervegrowthfactor,NGF）分别处理原代培养的新生大鼠大脑皮质和中脑腹侧部神经元,应用免疫组织化学和原位杂交双重标记方法,观察不同时间NGF处理的神经元表达原癌基因c－junmRNA的情况。结果发现,神经特异性烯醇化酶（neuronspecificenolase,NSE）阳性的大脑皮层神经细胞在NGF处理15分钟即可表达c－junmRNA,2小时达高峰,4小时后开始下降,到8小时后基本消失．未经NGF处理的大鼠大脑皮层神经细胞不表达c－junmRNA;酪氨酸羟化酶（tyrosinehydroxylase,TH）阳性的中脑多巴胺能（Dopaminergic,DA）神经元经NGF处理也不表达c－jun基因。提示NGF与其受体结合可以激活神经细胞快速,短暂的一过性表达c-jun基因,作为第三信使,调节从细胞质膜到核的信号传递,同时也间接证明了新生大鼠大脑皮层神经细胞膜上存在神经生长因子受体（nervegrowthfactorreceptor,NGFR）,而中脑DA神经细胞对NGF无应答反应。     

热损伤对大鼠纹状体神经元凋亡的影响

目的:探讨热损伤对原代培养的大鼠纹状体神经元凋亡的影响.方法:对原代培养的大鼠纹状体神经元进行43℃热损伤40 min后,用共聚焦激光扫描显微镜(LSCM)观察神经元细胞内Ca2 浓度的变化、神经元线粒体膜电位的变化,TUNEL法检测热损伤前后纹状体神经元凋亡的变化.结果:热损伤使纹状体神经元内Ca2 浓度明显升高,线粒体膜电位明显降低(P＜0.01);热损伤后纹状体神经元凋亡增多.结论:热损伤可能通过增加细胞内钙离子浓度、降低细胞线粒体膜电位而诱发大鼠纹状体原代培养神经元凋亡.     

低浓度万古霉素复合PMMA骨水泥的细胞毒性研究

目的:研究低浓度万古霉素(1%)复合聚甲基丙烯酸甲酯PMMA骨水泥对SD仔鼠原代成骨细胞的增殖以及凋亡的影响。方法:采用分离SD仔鼠颅骨与胰酶消化法获取SD仔鼠原代成骨细胞,通过细胞爬片碱性磷酸酶染色对原代成骨细胞进行鉴定;利用CCK-8法检测低浓度万古霉素复合PMMA及纯PMMA骨水泥浸提液对SD大鼠原代成骨细胞的增殖影响、流式细胞仪检测万古霉素复合PMMA及纯PMMA骨水泥浸提液对对SD大鼠原代成骨细胞的凋亡影响。结果:SD大鼠原代成骨细胞在低浓度万古霉素复合PMMA骨水泥浸提液中第1、2、3天的增殖更明显(P0.05),在纯PMMA骨水泥浸提液中第1、5天凋亡显著增加(P0.05)。结论:低浓度万古霉素复合PMMA骨水泥相比PMMA骨水泥具有较低的细胞毒性,在临床应用于骨缺损伴局部骨感染的治疗方面具有一定的优势。     

低氧预适应大鼠脑脊液减轻氧糖剥夺对培养新生鼠海马神经元的损伤及可能的机制

本文旨在观察低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC) Wistar大鼠脑脊液对新生鼠海马神经元氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)损伤的影响及机制.原代培养大鼠新生鼠(出生12 h)海马神经元,随机分为正常对照组、OGD组(OGD培养1.5 h)、正常脑脊...     

视黄酸对海马神经元细胞内钙离子浓度的影响

探讨全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,atRA)对原代培养的海马神经元胞内钙离子浓度的影响,以进一步了解atRA参与学习记忆可能机制。分离新生Wistar大鼠海马,采用添加B27的无血清培养液进行海马神经元原代培养,免疫荧光鉴定培养的神经细胞;以fura-2/AM温育海马神经元,采用钙离子测定系统动态观察视黄酸对海马细胞内钙离子浓度的影响。结果显示:(1)培养的神经元纯度达90%;(2)atRA作用于海马神经元,能引起海马神经元胞内钙离子浓度的升高;(3)这种升高与atRA浓度及神经元的发育时间相关;(4)钙离子升高的具体方式是通过细胞外钙离子内流;(5)视黄酸核受体alpha(RARα)的拮抗剂Ro41-5253(Ro)对atRA升高的神经元胞内钙离子浓度有抑制作用。atRA与RARα结合,促使海马神经元胞外钙离子的内流,这可能是atRA参与学习记忆的机制之一。     

电磁脉冲辐照大鼠海马区细胞凋亡与形态学变化

以体外原代培养的大鼠海马神经元和Wistar大鼠为研究对象,探讨电磁脉冲(场强为6× 104 V/m)辐照后早期海马区细胞凋亡和病理形态学的变化.在照射后1h、6h、12h、24h和48h分别采用MTT法和流式细胞仪测定死亡细胞和凋亡细胞的比例,用光镜和电镜分别进行形态学观察.结果显示在电磁脉冲辐照后,海马神经细胞不仅发生快速的坏死,而且还发生凋亡,同时在早期即可见到血管、胶质细胞和神经元等组织的形态学异常.表明大鼠大脑受电磁脉冲辐照后早期海马区可发生神经细胞坏死和凋亡,以及各组织成分的病理形态学改变,上述变化可能与电磁脉冲致细胞DNA损伤有关.     

促红细胞生成素介导的脑缺血保护

促红细胞生成素 (ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ,ＥＰＯ)是肾调节造血的一种细胞因子 ,它会在脑氧化应激之后产生。缺氧诱导的转录因子 1(ＨＩＦ 1)能在缺氧刺激后上调ＥＰＯ。ＭｕｒａｔＤｉｇｉｃｕｙｌｉｏｇｌｕ报道 ,ＥＰＯ预处理能保护神经元的缺血性损伤 ,神经元ＥＰＯ受体 (ＥＰＯＲｓ)的激活阻止ＮＭＤＡ(Ｎ ｍｅｔｈｙｌ Ｄ ａｓｐａｒｔａｔｅ)或ＮＯ诱导的细胞凋亡。其保护机制是通过激发Ｊａｎｕｓｋｉｎａｓｅ 2 (Ｊａｋ2 )和ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ ｋＢ(ＮＦ κＢ)两种信号途径的对话实现的。具体地说 ,ＥＰＯ受体激活…     

SD大鼠乳鼠皮层神经元细胞原代培养模型的建立及鉴定

摘要 目的：探讨SD大鼠乳鼠皮层神经元细胞原代培养方法,并鉴定其培养效果,以期建立一种生物学功能良好的体外细胞实验模型。方法：取出生24 h的SD大鼠乳鼠,分离出大脑皮层,在胰酶消化之前先进行离心,然后将胰酶消化后多次离心得到的细胞悬液接种于L-多聚赖氨酸包被的培养皿和共聚焦皿中,以加B27的Neurobasal-A培养基进行神经元细胞的原代培养,倒置显微镜下观察培养细胞的生长状态;通过免疫荧光组化的方法采用神经元标记物MAP-2进行神经元纯度的鉴定;在导入Fluo4-AM的原代神经元细胞,观察电刺激后胞内钙离子信号的变化,以验证神经元细胞的生理状态。结果：采用此方法培养的神经元细胞紧密贴壁、分散均匀、状态良好,神经元细胞周围突起相互连接形成网络;经MAP-2免疫荧光组化技术鉴定神经元的纯度达到95%以上;胞内钙离子信号的变化提示所培养的神经元具有良好的生物学功能。结论：该方法能获得纯度较高并且生物学功能良好的原代培养的SD大鼠乳鼠皮层神经元细胞。