人乳头瘤病毒与细胞凋亡

近来研究表明病毒感染与细胞凋亡有着密切的关系。在研究中发现,许多病毒参与细胞凋亡的诱导和抑制,在这些过程中相关病毒的基因的表达起着关键作用,而细胞凋亡相关因子直接或间接参与这一过程,对于这些问题有助于阐明病毒感染后病毒和细胞相互作用的分子机理。本文对人乳头瘤病毒的E6、E7、E2、和E5等基因及表达蛋白与细胞凋亡相关因子p53、pRB等相互作用,以阐述HPV的致癌机理。     

小RNA病毒蛋白与细胞凋亡的关系

很多小RNA病毒科病毒感染宿主细胞后可引发宿主细胞凋亡,这种现象被认为是宿主细胞对抗小RNA病毒侵染的防御机制。凋亡机制可由某些病毒蛋白对细胞产生信号干扰来实现多种凋亡通路。虽然这些凋亡通路的上游事件是不同的,但最后的效应却很一致。此外,一些病毒蛋白具有抑制细胞凋亡的功能,它们能够令感染病毒后的细胞不死亡,形成病毒与宿主细胞共存的持续性感染状态。     

miRNA378*表达对柯萨奇B3病毒感染乳鼠心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激伴侣蛋白表达的影响

目的：研究沉默miRNA378^*表达对柯萨奇B3病毒（CVB3）感染心肌细胞凋亡、内质网应激、网腔钙结合蛋白（calumenin）影响。方法：原代培养乳鼠心肌细胞分为：对照组（正常细胞）、柯萨奇病毒感染组（正常细胞+柯萨奇B3病毒）、miRNA378^*沉默对照组（正常细胞+柯萨奇B3病毒+转染miRNA378^*空质粒）、miRNA378^*沉默组（正常细胞+柯萨奇B3病毒+转染miRNA378^*沉默质粒）,各组细胞分别转染和感染处理后置37℃、CO₂培养箱中培养3 d。检测细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、细胞凋亡率、网腔钙结合蛋白、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）及内质网应激信号通路因子激活转录因子6（ATF6）、转录因子C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达。结果：通过检测ɑ-SMA蛋白,证实分离乳鼠细胞为心室肌细胞。TUNEL法检测不同组心室细胞凋亡情况发现,柯萨奇病毒感染组心室肌细胞凋亡明显,与柯萨奇病毒感染组心肌细胞相比较,miRNA378^*沉默组心肌细胞凋亡细胞量明显减少。与柯萨奇病毒感染组比较,Calumenin表达减少（P<0.01）,而GRP78、ATF6、CHOP表达增加（P<0.01）。结论：CVB3病毒感染心肌细胞作用与miRNA378^*,引发内质网应激并激活信号通路因子,心肌细胞凋亡增加。     

口蹄疫病毒诱导宿主细胞凋亡的研究

本文报道了口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）在体外诱导PK-15细胞凋亡的研究结果。采用Hoechst33258荧光探针、DNA凝胶电泳、脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）技术均检测到了典型的细胞凋亡。结果显示使用感染性滴度为4.8lgTCID50/mL的口蹄疫病毒感染PK-15细胞,在培养32?h后荧光探针检测呈现典型的凋亡细胞核固缩和梅花状碎裂核,并伴随有凋亡小体出现,凋亡率约为20%;DNA凝胶电泳显示ladder梯带;末端标记检测到强绿色荧光标记物结合于凋亡细胞核上。研究结果提示口蹄疫病毒可以在体外诱导宿主细胞凋亡,细胞凋亡是其致细胞病变死亡的重要途径之一。     

昆虫杆状病毒细胞凋亡抑制基因

杆状病毒感染过程中,可能会诱导产生一条导致细胞凋亡的路径,细胞凋亡是一种程序性细胞死亡。宿主细胞的凋亡可以导致细胞的提前死亡或感染的终止,因此细胞凋亡可以限制病毒在被感染机体中的扩散或限制感染机体的发病。家蚕的杆状病毒拥有两种对抗细胞凋亡死亡的基因,p35和iap(inhibitorofapoptosis),它们可能通过阻止病毒感染引起的细胞凋亡或存在于大量生物体内的各种诱导信号引起的细胞凋亡。     

风疹病毒诱导细胞凋亡分子机制的研究进展

风疹病毒是披膜病毒科风疹病毒属的唯一成员,能够诱导细胞发生细胞凋亡。Ras-Raf-MEK-ERK和PI3KAkt信号通路是病毒增殖与细胞生存的必要通路,在细胞凋亡过程中起着必不可少的作用。p53蛋白和TAp63蛋白能够进入细胞核与DNA特异结合,抑制Bcl-2的表达,促进Bax的表达,导致线粒体内外膜间的物质(细胞色素C等)释放,进而引起caspase级联反应,最终导致细胞凋亡。本文从风疹病毒感染的细胞系,病毒感染导致的细胞病理改变和病毒诱导的细胞凋亡信号通路及其相关因子等方面对风疹病毒诱导细胞凋亡的分子机制进行了综述。     

冠状病毒感染调控细胞凋亡机制研究进展

冠状病毒是常见的感染人类和动物并造成健康危害的主要病原性微生物之一,冠状病毒感染细胞后,细胞产生免疫应答,病毒为了在细胞内转录翻译和装配下一代,应对细胞免疫应答的同时,还参与到许多细胞活动中,当细胞特定受体与病毒蛋白结合后,细胞即启动凋亡程序。冠状病毒的许多蛋白在细胞凋亡程序中起促进或抑制凋亡的不同作用,如病毒S蛋白与细胞膜死亡受体作用诱导细胞启动外在凋亡途径,病毒感染细胞后产生的M、S蛋白引起细胞内质网应激、Ca2+失衡,诱导细胞启动内在凋亡途径,而E蛋白则抑制细胞凋亡的发生。本文综述了冠状病毒对侵染细胞的促凋亡或抑制凋亡作用及其作用机制,通过了解病毒不同蛋白在各种凋亡途径中的不同作用,希望为人工干预调控细胞研究提供思路,为冠状病毒感染防控提供理论支持。     

促凋亡蛋白BAK的功能及在病毒感染中作用的研究进展

BAK蛋白从属于BCL-2家族,是细胞凋亡途径中的关键蛋白。BAK蛋白在凋亡信号的刺激下被激活,并在线粒体上集聚成簇后诱导细胞色素c等促凋亡物质释放,通过caspase级联反应放大凋亡信号,最终诱导细胞死亡。目前的BAK研究普遍用于针对癌细胞凋亡逃逸及病毒对机体细胞免疫的逃逸过程,而病毒等病原体与BAK之间的作用机制、影响胞内凋亡和炎症通路的激活以及炎性因子活化的研究较少。因此对BAK蛋白结构、功能和BAK可能介导的相关通路进行介绍,并对其在病毒感染研究中的作用进展进行了分析,以期为促凋亡蛋白BAK在病毒感染中作用的深入研究提供一些理论基础。     

口蹄疫病毒诱导宿主细胞凋亡的研究

本文报道了口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）在体外诱导PK－15细胞凋亡的研究结果,采用Hoechst33258荧光探针、DNA凝胶电泳、脱氧核糖核酸转移酶介导的制品末端标记（TUNEL）技术均检测到了典型的细胞凋亡,结果显示：使用感染性滴度为4.8lgTCID50/mL的口蹄疫病毒感染PK－15细胞,在培养32h后,荧光探针检测呈现典型的凋亡细胞核固缩和梅花状碎裂核,并伴随有凋亡小体出现,调亡率约为20％;DNA凝胶电泳显示ladder梯带;末端标记检测到强绿色荧光标记物结合于凋亡细胞核上。研究结果提示：口蹄疫病毒可以在体外诱导宿主细胞凋亡,细胞凋亡是其致细胞病变死亡的重要途径之一。     

早幼粒白血病蛋白核体与病毒感染

早幼粒白血病蛋白核体（promyelocytic leukaemia nuclear bodies,PML-NBs）是哺乳动物细胞中普遍存在的一种动态的细胞核亚结构,参与DNA损伤与修复、细胞衰老与凋亡、基因表达调控以及肿瘤发生与抑制等多种重要的细胞活动。研究表明,PML-NBs也是多种病毒入侵细胞的作用靶点。PML-NBs通过介导细胞固有免疫反应或者作为细胞干扰素信号通路元件参与宿主细胞的抗病毒防御活动。该文以几种DNA和RNA病毒为例,综述了在病毒感染过程中PML-NBs与病毒的相互作用以及这些相互作用的功能意义,从而揭示PML-NBs在抵御病毒感染和免疫反应中的重要作用,并提出运用病毒单分子实时示踪（Single-virus Tracking）这一新技术深入研究PML-NBs在病毒感染中作用的可行性。     

逆转录病毒载体介导表达伪狂犬病病毒PK基因MDBK细胞系的建立

细胞凋亡 (apoptosis)是机体在生理条件下受刺激后 ,经过多种途径的信号传导导致细胞产生一系列形态和生物化学方面的改变而引起的细胞自我消亡的过程 ,是程序性细胞死亡 (programmedcelldeath ,PCD)的主要机制 ,它对于机体的发育 ,内外环境的平衡等都具有重要的作用[1,2 ] .研究表明 ,许多病毒具有诱导或抑制细胞凋亡的功能 ,但其发生的机理仍然不清 .随着分子生物学研究的深入 ,人们发现病毒的某些基因与细胞凋亡相关 ,其编码的基因产物或因病毒感染诱导细胞表达的蛋白抑制或诱导细胞发生凋亡 .最近研究表明 ,伪狂犬病病毒 (psedorabies…     

病毒感染与宿主细胞线粒体动力学及线粒体自噬

线粒体是细胞的重要功能性细胞器.线粒体动力学与线粒体自噬二者之间可互相调控,共同构成线粒体质量控制的重要环节.线粒体动力学平衡和线粒体自噬极易受到细胞外界环境变化,诸如病毒感染的影响.病毒与宿主细胞线粒体相互作用,可引起宿主细胞线粒体动力学和线粒体自噬发生变化,相关变化在促进病毒感染、抵御细胞凋亡、建立持续感染等重要事...     

流感病毒感染诱导MDCK细胞凋亡的研究

用荧光染色、DNA凝胶电泳等方法检测了A型流感病毒株A1／京防86－1和B型流感病毒株B/沪防93－1诱导狗肾体代细胞(MDCKcells)的凋亡情况,并采用MTT法和流式细胞仪比较了这2株病毒对MMCK细胞的毒力和凋亡诱导能力水平。结果显示：病毒感染6h后,细胞DNA发生断裂,病毒感染12h后,可见明显的染色质凝聚;在一定范围内,细胞凋亡强度表现出明显的时间和剂量依赖关系;并且,A型流感病毒株的毒力和调亡诱导能力均强于B型流感病毒株。实验结果表明：流感病毒感染引起的细胞死亡主要是通过调亡实现的,毒力不同的流感病毒株诱导细胞调亡的能力不同。     

猪流行性腹泻病毒经其附属蛋白抑制细胞凋亡

【背景】orf3位于猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) s基因与e基因之间,是目前发现的PEDV唯一一个附属基因,编码附属蛋白(ORF3蛋白)。我们前期研究初步发现ORF3蛋白对PEDV诱导的细胞凋亡有影响。【目的】研究ORF3蛋白在PEDV侵染复制过程中的毒力作用机制。【方法】实验用3种PEDV:rDR13att-?ORF3 (orf3基因全部敲除)、DR13-ORF3att (携带有C端截短orf3)、rDR13att-ORF3wt(携带全长orf3基因)感染Vero细胞,观察病变情况,再用活细胞成像仪、流式细胞仪、 DNA断裂的原位末端标记法[terminaldeoxynucleotidyltransferase(TDT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL]等方法检测不同感染时间点的细胞凋亡情况,然后用蛋白质印迹方法分析PEDV感染宿主细胞中主要凋亡相关蛋白(如Caspase-3)的活化或裂解,最后进行转录组测序研究病毒感染细胞中差异基因的表达情况,再用荧光定量PCR验证转录组结果。【结果】rDR13att-?ORF3引起较多的细胞病变,活细胞成像仪的动态观察结果显示,3种病毒侵染的细胞凋亡水平随着时间的延长均高于正常阴性细胞,但敲除orf3的病毒感染细胞后细胞凋亡率比其他两种病毒更高;敲除orf3病毒感染细胞凋亡率显著高于其他两种病毒;病毒rDR13att-?ORF3感染细胞后TUNEL阳性细胞数比DR13-ORF3att和rDR13att-ORF3wt更多;表达ORF3蛋白的重组PEDV可以抑制Caspase-3的活化;ORF3蛋白对受感染细胞Heat shock 70 kD protein 1B (HSP70)基因转录有促进作用,荧光定量PCR结果表明rDR13att-ORF3wt感染细胞的HSP70表达量高于rDR13att-?ORF3感染细胞。【结论】PEDV通过ORF3蛋白抑制细胞凋亡,而且这种作用可能是通过抑制Caspase-3的活化或增加HSP70的产生来完成的。     

Sindbis病毒的繁殖与宿主细胞BHK—21的凋亡

详细报道了Sindbis病毒诱导BHK-21细胞凋亡的过程,病毒感染6h后即可观测到核染色质的断裂,病毒感染12h后染色质可见明显的凝集,感染后24h DNA电泳出现明显的DNA“阶梯”(DNA ladder)。电镜观察更清楚地显示了凋亡小体形成的某些细节:在染色质凝集处核外膜突起,最后与细胞核分离形成凋亡小体。在此基础上将一段病毒非结构蛋白nsP2基因克隆到真核表达载体pMAMneo中,并得到瞬间表达,在其中一些细胞中出现DNA断裂这一细胞凋亡的基本特征,通过对nsP2氨基酸序列的分析,结合以前的实验结果推测nsP2可能与诱导细胞凋亡直接相关。     

哺乳仔猪中伪狂犬病病毒鄂A株对细胞凋亡的诱导或抑制

通过人工感染伪狂犬病病毒阴性的健康仔猪 ,取实验组和阴性对照组仔猪的咽部扁桃体、胸腺、颈部淋巴结、腹股沟淋巴结、大脑、小脑、嗅球、三叉神经节等组织作样本。通过电子显微镜观察、DNA梯谱和原位末端脱氧核苷酸标记等试验进行细胞凋亡分析 ,结果发现实验组仔猪的淋巴组织细胞呈现典型的细胞凋亡的特征 ,而神经组织中无。这一结果表明 :伪狂犬病病毒感染诱导大量淋巴细胞凋亡 ,造成仔猪免疫功能低下 ,导致大量死亡 ,这可能是伪狂犬病病毒急性感染致病机制之一 ;同时也证实伪狂犬病病毒通过抑制神经细胞的凋亡 ,在神经组织中建立潜伏感染并终生带毒。     

斜纹夜蛾核多角体病毒抑制苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒诱导的斜纹夜蛾细胞凋亡

野生型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)感染斜纹夜蛾(Spodoptera litura)细胞系Sl-zsu-1,可引起典型的细胞凋亡;但可以在草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞Sf-9中复制并形成多角体.比较了AcMNPV p35基因在病毒感染两种细胞的复制和转录情况,认为p35在非受纳细胞中及时有效的表达能阻止细胞发生凋亡;共感染实验结果表明,斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus, SpltMNPV)可以抑制AcMNPV诱导的细胞凋亡并可帮助病毒进行复制,推测SpltMNPV基因组中与p35同源的p49基因挽救了细胞的自杀行为.     

过表达SGK3肝癌细胞BEL-7402在去甾体激素血清中的抗凋亡研究

目的:构建过表达血清与糖皮质激素调节激酶3(SGK3)的质粒以及稳定表达SGK3的肝癌细胞系BEL-7402,研究其在去甾体激素胎牛血清(FBS)中的抗凋亡能力。方法:PCR扩增SGK3基因,将扩增产物连接到p CDH载体,构建出p CDH-SGK3的慢病毒载体质粒,将其同空白对照p CDH-NC分别与慢病毒包装载体共转入293T细胞,包装成慢病毒p CHD-SGK3和p CDH-NC;将构建的慢病毒感染肝癌细胞BEL-7402并用嘌呤霉素筛选,Western印迹检测SGK3的表达;观察细胞在FBS及去甾体激素FBS中的生长情况。结果:包装出p CDH-SGK3重组慢病毒,此慢病毒感染肝癌细胞系BEL-7402后获得表达;CCK8实验表明过表达SGK3可促进肝癌细胞的生长,BEL-7042细胞中有雄激素的表达,去甾体激素FBS中细胞生长受到抑制,过表达SGK3可增强肝癌细胞在去甾体激素血清中的抗凋亡能力。结论:在肝癌细胞BEL-7402中过表达SGK3可促进细胞生长,可增强细胞在去甾体激素FBS中的抗凋亡能力。     

猪丁型冠状病毒诱导的细胞线粒体凋亡

猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新型的猪肠道致病性冠状病毒,可引起猪群剧烈腹泻及呕吐,但致病机制尚不清楚。本研究检测了PDCoV感染诱导的细胞凋亡。Caspase酶活性检测显示,在PDCoV感染的细胞中,caspase 3、caspase 8和caspase 9的活性随病毒感染量的增多而显著提高,类似的现象未能在紫外灭活病毒感染的细胞中观察到,表明PDCoV感染可同时激活内源性与外源性细胞凋亡通路,并暗示细胞凋亡的诱导依赖于病毒复制。为深入探究PDCoV诱导的内源性细胞凋亡,分别检测胞浆和线粒体中细胞色素C与凋亡诱导因子。结果显示,与正常细胞相比,PDCoV感染细胞从线粒体释放到胞浆的细胞色素C显著增多,且其释放量随着感染时间的延长而增多,而凋亡诱导因子始终定位于线粒体,提示PDCoV感染通过促使线粒体膜间隙的细胞色素C进入胞浆而启动caspase依赖的线粒体凋亡通路。本研究初步揭示了PDCoV诱导细胞凋亡的机制。     

呼吸道合胞病毒诱导细胞凋亡与自噬

呼吸道合胞病毒感染与细胞凋亡、自噬的关系错综复杂。研究发现呼吸道合胞病毒感染细胞后,既能产生促细胞凋亡作用,也能产生抗细胞凋亡作用,还能诱导细胞发生自噬。研究这些过程机理,能帮助我们更好地认识呼吸道合胞病毒感染发病机制,为预防和治疗呼吸道合胞病毒感染提供一些新的方向。