中国棉铃虫核型多角体病毒VHA273原毒株及其克隆株的比较研究

本文从形态结构、生物活性、核酸限制性内切酶图谱、结构多肽等方面对中国棉铃虫核型多角体病毒(HaNPV)VHA273多粒包埋型原毒株及其单粒包埋型克隆株H9进行了比较研究.它们对中国棉铃虫三龄初幼虫的LC5o值分别为2.987×104PIBs/mL和1.647×104PIBs/mL当感染剂量为2×107PIBs/mL时,其LT5o值分别是4.866d和4.797d.两个毒株的生物活性差别不大.经SDS-PAGE分析,两毒株结构多肽图谱带型相差较大.两毒株基因组经EcoR Ⅰ,BamH Ⅰ,Hind Ⅲ和Xba Ⅰ消化后,得到的内切酶图谱表现为两毒株间有差别.这些差异的发现将有助于从分子水平揭示多粒包埋病毒和单粒包埋病毒形成原因.     

中国棉铃虫核型多角体病毒VHA273原毒株及其克隆株的比较研究

本文从形态结构、生物活性、核酸限制性内切酶图谱、结构多肽等方面对中国棉铃虫核型多角体病毒(HaNPV)VHA_(273)多粒包埋型原毒株及其单粒包埋型克隆株H_9进行了比较研究。它们对中国棉铃虫三龄初幼虫的LC_(50)值分别为2.987×10~4 PIBs/mL和1.647×10~4 PIBs/mL;当感染剂量为2×10~7 PIBs/mL时,其LT_(50)值分别是4.866d和4.797d。两个毒株的生物活性差别不大。经SDS-PAGE分析,两毒株结构多肽图谱带型相差较大。两毒株基因组经EcoR Ⅰ,BamH Ⅰ,Hind Ⅲ和Xba Ⅰ消化后,得到的内切酶图谱表现为两毒株间有差别。这些差异的发现将有助于从分子水平揭示多粒包埋病毒和单粒包埋病毒形成原因。     

棉铃虫核型多角体病毒朝鲜分离株的初步研究

为了充分利用棉铃虫核型多角体病毒(Helicoverpa armigera,HaSNPV)资源,为开展害虫生物防治提供依据,对首次在朝鲜分离到的棉铃虫核型多角体病毒进行了研究。本文从形态结构,结构多肽。核酸限制性内切酶图谱等方面进行了研究。多角体直径0.36-1.3μm,平均1.02μm,病毒粒子大小为326 nm×69nm。经SDS-PAGE分析,棉铃虫核型多角体朝鲜株多角体蛋白为一条带。多角体蛋白分子量为28.7kDa。棉铃虫核型多角体朝鲜株基因组经BamH Ⅰ,EcoR Ⅰ,HindⅢ和Pst Ⅰ消化后,得到的内切酶图谱表现,与已报道的几个分离株比较类似。分子大小均为130.18kb。     

棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒复制的研究：Ⅰ.细胞病理学和病毒…

本文报道了棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒在棉铃虫及棉铃虫蛹卵巢细胞系ＳＦＥ－ＨＡ－８２１２中的复制。ＨａＳＮＰＶ的复制和其他的核型多角体病毒大体相符,复制过程也可分为形成出芽型病毒与形成包埋型病毒这两个时相。研究了影响病毒在细胞中复制的诸因素,包括毒感染复数、细胞生长阶段等。在适宜的条件下平均每细胞可生产出芽型病毒１４ＰＦＵ,多角体２４个,生成的病毒具有感染力。这些表明ＳＦＥ－ＨＡ－８２１２细胞可     

三种核型多角体病毒核酸同源性的研究

用分子杂交技术研究了黑点银纹夜蛾(Arqyrogramma agnata Stgr,)单粒包埋型核型多角体病毒(简称A,A,SNPV),斜纹夜蛾(Prodenia litura)多粒包埋型核型多角体病毒(简称PL MNPV)以及用A,A,SNPV感染斜纹夜蛾幼虫所获得的多粒包埋型核型多角体病毒(暂称PoI MNPV)三种病毒核酸的同源性,用SDS-Tris酚法分别提取病毒核酸,用内切酶Eco RⅠ酶解,比较了病毒核酸的酶解图谱及分子量,用〔α-~(32)P〕dATP标记的三种病毒核酸Eco RⅠ酶解片段作探针,分别与各病毒核酸的Eco RI酶解片段杂交,结果表明PoI MNPV与PL MNPV的病毒核酸同源,而A,A,SNPV DNA不与PoI MNPV DNA、PL MNPV DNA杂交,无同源序列。     

混合感染后杆状病毒间的增效作用——病毒蛋白及核酸的初步分析

AsNPV+HasNPV、AsNPV+HaNPV、AsNPV+PsNPV分别感染烟青虫、棉铃虫和粘虫幼虫,对分离到的核型多角体病毒(AsNPV+HasNPV)-Helicoverpa assulta、(AsNPV+HaNPV)- H.Armigera和(AsNPV+PsNPV)-Pseudaletia separata,经电镜观察,多角体蛋白及病毒粒子蛋白SDS-PAGE电泳,病毒核酸的限制性内切酶酶解分析等研究,证明各病毒的多角体形态不规则,大小差异极大,病毒粒子为杆状,(AsNPV+HasNPV)-H.Assulta 和(AsNPV+HaNPV)-H.Armigcra病毒粒子有单粒和多粒包埋类型, (AsNPV+PsNPV)-P.Separata为多粒包埋型。各病毒的多角体蛋白基本上只有一种多肽,分子量为25 000道尔顿左右。(AsNPV+HasNPV)-H.Assulta、(AsNPV+HaNPV)-H.armigera和(AsNPV+PsNPV)-P.Separata的病毒粒子分别有10、14、5条多肽,分子量大小在13 500～98 000,13 000～88 000,18 500～52 000道尔顿之间。病毒核酸经EcoRI,HindIII,HindIII+BamHI酶解,其DNA的酶切位点,大小及DNA的总分子量与AsNPV和原寄主的Has-NPV,HaNPV和PsNPVDNA的酶切图谱存在一定差异,混合病毒侵染昆虫后新复制的病毒核酸发生一定的变化,从而导致病毒蛋白和病毒形态的变化。混合感染后AsNPV对Has-NPV、HaNPV和PsNPV的侵染有明显的增效作用,其机理有待深入研究。     

棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒极早期基因(ie-1)分析(英文)

克隆了棉铃虫Helicoverpaarmigera单粒包埋型核型多角体病毒 (HaSNPV)C1株基因组DNA ,并通过随机测序的方法测定了经XbaI酶切后的H片段的核苷酸全序列。序列比较和分析发现该片段中ORF1 3与苜蓿丫纹夜蛾Autographacalifornica多粒包埋型核型多角体病毒 (AcMNPV)基因组ORF1 47(ie 1 )同源。ie 1基因编码区全长 1 986bp ,根据推测的氨基酸序列 ,可编码 6 6 1个氨基酸残基组成的多肽 ,预计分子量为 76 .5kD。将所推导的HaSNPVIE 1氨基酸序列与其它已知的杆状病毒IE 1氨基酸序列进行比较 ,结果表明 ,HaSNPV和谷实夜蛾H .zea单粒包埋型核型多角体病毒IE 1氨基酸序列最为相似 ,同源性高达 98%。与AcMNPV、家蚕Bombyxmori核型多角体病毒 (BmNPV)、云杉卷叶蛾Choristoneurafu miferana多粒包埋型核型多角体病毒 (CfMNPV)、舞毒蛾Lymantriadispar多粒包埋型核型多角体病毒(LdMNPV)、黄杉毒蛾Orgyiapseudotsugata多粒包埋型核型多角体病毒 (OpMNPV)、甜菜夜蛾Spodopteraex igua多粒包埋型核型多角体病毒 (SeMNPV)、小菜蛾Plutellaxylostella颗粒体病毒 (PxGV)和Xestiac ni grum颗粒体病毒 (XcGV)的IE 1氨基酸序列同源性较低 ,分别为 2 3 %、2 3 %、2 3 %、2 5 %、2 3 %、1 4%、2 7%和 7%。根据氨基酸序列由GENETYX     

黄地老虎核型多角体病毒的一些特性

黄地老虎核型多角体病毒(Agrotis segetum Nulear Polyhedrosis Virus简称AsNPV)的国内分离株(AsNPV^C),多角体呈六边形,大小1.7—2.6μm,为多粒包埋类型.每个病毒束内有2—7个核衣壳,大小约52nm×308nm.感染烟青虫(Heliothis assttlta)后分离到的多角体(As-HaNPV)其形状不规则,大小0.7—2.6μm,亦为多粒包埋类型.核衣壳2—6个不等,大小约40nm×300nm.EcoR1和HindⅢ限制性内切酶电泳图谱分析表明,AsNPV^CDNA和As-HaNPV DNA的EcoRI、HindIII酶切图谱一致,两者与HaNPV DNA的EcoRI,HindⅢ酶切图谱存在明显差异,AsNPV^C DNA的EcoRI酶切图谱共有15个片段,分子量在12.74×10⁶—1.18×10⁶道尔顿之间,总分子量约88.6×10⁶道尔顿,相当于134.25kbp.HaNPV DNA的EcoRI酶切图谱共有19个片段,分子量在13.89×10⁶—1.10×10⁶道尔顿之间,总分子量约93.86×10⁶道尔顿,相当于142.25kbp.AsNPV对黄地老虎2龄和4龄幼虫以及对烟青虫4龄幼虫的LD_{50分别为:1.4×10⁵pIB、7.4×10⁴PIB和2.61×10⁴PIB.}     

木毒蛾核型多角体病毒形态结构及理化性质的研究

木毒蛾核型多角体病毒属昆虫杆状病毒科,核型多角体病毒属,多粒包埋型。在扫描电镜下,多角体呈不规则多面体,大小下一,平均直径为１．４μｍ,病毒粒子杆状,大小约为３９４×５６ｎｍ,经ＳＤＭ－ＰＡＧＥ分析,病毒多角体蛋白分子量为３０．５ｋＤ,病毒粒子结构蛋白由１９条多肽组成,分子量范围在８８－１７ｋＤ之间。多角体富含Ｇｌｕ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、而Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、和Ｈｉｓ含量较少。其酸碱氨基酸之比为１．２６。病毒核酸为一环状ＤＮＡ,长度约为３８μｍ,经ＨｉｎｄⅢ、ＰｓｔⅠ、ＥｃｏＲⅠ和ＢｇｌⅠ单酶切以及ＢａｍＨⅠ＋ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ＋ＰｓｔⅠ、ＢａｍＨⅠ＋ＢｇＩⅠ和Ｘｈｏｌ＋ＥｃｏＲⅠ双酶切分析,ＤＮＡ总分子量约为７１．６×１０￣６Ｄａｌｔｏｎｓ。     

一株雀纹天蛾核型多角体病毒的鉴定及其基因组序列分析

从自然死亡的雀纹天蛾幼虫分离到一株雀纹天蛾核型多角体病毒。通过扫描及切片透射电镜发现,该病毒为单粒包埋型核型多角体病毒,命名为ThjaSNPV(Theretra japonica single nucleopolyhedrovirus)。病毒全基因组重测序后拼接显示,该病毒基因组全长134 899 bp,GC含量37.28%,与豆天蛾单粒包埋型核型多角体病毒株DZ1基因组序列相似性高达96.24%。ThjaSNPV含有131个开放阅读框（ORF）其中55个为正链基因,76个为负链基因,与宿主同为天蛾科的豆天蛾单粒包埋型核型多角体基因组相比,雀纹天蛾单粒包埋型核型多角体病毒新注释到7个基因：chitin-binding protein(ORF9),ODV-E18(ORF11),lef-11(ORF27),hypothetical protein(ORF41),lef-10(ORF42),pif-6(ORF66),P6.9(ORF88)。ThjaSNPV的DNA光裂酶基因（DNA photolyase,ORF53）中不具有豆天蛾NPV中的1bp碱基的缺失,只编码一个大的完整DNA裂合酶。3...     

胸部疾病FDGPET、PET／CT显像的假阳性和假阴性陷阱

^18F-FDGPET显像正在被越来越多用于临床鉴别良、恶性疾病,特别在胸部疾病的诊断中较传统影像发挥着更大的作用。然而,氟脱氧葡萄糖（FDG）不是肿瘤特异性显像示踪剂,由于存在设备显像精确度的局限,造成了它在一些脏器、组织和细胞中的生理性和病理性,特异性和非特异性的代谢摄取,也造成了假阳性和假阴性的产生。因此,熟悉这些假阳性和假阴性的结果,能帮助临床医生更加正确地解读PET影像的真实含义,避免误诊和漏诊。本文阐述了^18F-FDGPETPET／CT显像在多种胸部疾病中出现的假阳性和假阴性结果。     

大鼠IgA肾病模型的建立及血清中IL-6、FN、NO的检测

目的建立大鼠IgA肾病（IgAN）模型,测定大鼠血清中的白介素-6（IL-6）、纤维结合蛋白（FN）、一氧化氮（NO）,探讨这些指标水平的变化与IgAN免疫损伤的相关性,为临床治疗提供动物实验研究依据。方法24只大鼠被随机分成3组,每组8只。模型组和治疗组用免疫复合物法复制;正常对照组用生理盐水。10周后,治疗组大鼠被给予雷公藤多甙片3周。留取所有大鼠血清测定IL-6、FN、NO;留取所有大鼠尿液测定红细胞（RBC）、总蛋白量（TPR）;留取所有大鼠肾组织作病理学检查。结果模型组中大鼠尿液中RBC、TPR含量较治疗组及正常对照组显著增高（P〈0．01）;血清中的IL-6、FN的水平较治疗组及正常对照组显著增高（P〈0．01）;血清中的NO水平较治疗组及正常对照组显著降低（P〈0．01）。治疗组的大鼠肾组织病理损伤程度较模型组明显减轻（P〈0．01）。结论血清中的IL-6、FN及NO的水平与RBC数、TPR及肾组织病理损伤程度相关,它们可作为观察IgAN治疗效果的重要指标,也可作为IgAN严重性的预测指标。下调血中的IL-6、FN及上调NO的水平,可减少IgA与FN免疫复合物的形成,从而改善肾组织的免疫损伤。     

FHL蛋白与肺动脉高压研究进展

FHL（four-and-a-half-LIM domain）是含4（1/2）个LIM结构域富含半胱氨酸的细胞骨架蛋白,LIM是一种在C.elegans线虫的Lin-1和Mec-3基因及大鼠Isl-1基因编码的DNA结合蛋白中分离鉴定出来的基因序列,LIM取三个基因的首字母而成。FHL家族含FHL-1-5五个成员,而FHL-1-3最早发现在心脏的发育过程中起重要作用,后面发现在肺动脉高压中有促进增殖、迁移等作用。本文就FHL家族和肺动脉高压关系作一综述,阐明FHL蛋白在PH进程中的重要作用。     

PTSD样大鼠蓝斑核盐皮质激素受体表达变化的研究

目的探讨PTSD样大鼠蓝斑（locus ceruleus,LC）神经元盐皮质激素受体（mineralocorticoid receptors,MR）表达的变化。方法使用连续单一应激（SPS）方法建立PTSD大鼠模型,随机分为SPS处理后24h、4d、7d、14d和28d组,非SPS刺激大鼠作为对照,应用免疫组化、免疫印迹方法分别进行各组蓝斑神经元MR表达变化的观察及检测,进行图像分析和统计学处理。结果蓝斑神经元MR的表达呈现24h急剧下调,4d、7d,14d和28d恢复性上调。结论PTSD样大鼠蓝斑神经元MR的表达变化可能直接参与了PTSD持续性精神行为障碍的发生发展过程。     

HCMV基因在人和小鼠胚胎成纤维细胞中表达的差异性研究

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）种属特异性机制尚不清楚。研究通过检测HCMVADl69体外感染人胚胎成纤维细胞（Human embryo fibroblast, HEF）和小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryo fibroblast, MEF）后病毒基因的表达情况,探讨HCMV种属特异性的可能分子机制。首先用HCMV AD169（MOI=5）分别感染HEF和MEF,相差显微镜逐日观察细胞的形态学变化;RT—PCR检测HCMV即刻早期（IE1、IE2）、早期（uL84）和晚期基因（UL83）的表达情况;Western—blot和免疫荧光检测病毒基因编码蛋白表达的情况。形态学观察发现HEF感染HCMV后逐渐变大变圆并相互融合,第4天可见典型的HCMV特征性病变效应,而MEF则未出现上述的变化;RT-PCR和Western—blot表明HEF组表达即刻早期基因IE1和IE2、早期基因uL84和晚期基因UL83 mRNA以及各基因所编码的蛋白,且相对表达量显著高于模拟感染组（P〈0．01）;而MEF组仅IEl和IE2mRNA和蛋白相对表达量显著低于HEF组（P〈0．05）,而高于模拟感染组（P〈0．01）。免疫荧光检测发现HEF感染72h表达IE和UL83蛋白,而MEF则无明显表达。以上结果表明,HC—MV不能在MEF中复制并产生完整子代病毒颗粒,且病毒基因表达阻止在IE2基因表达之后和UL84基因表达之前,其种属特异性可能与即刻早期蛋白低水平的表达量有关。     

实时荧光定量PCR技术在SPF鸡四种垂直传播疾病监测中的应用

目的探讨荧光定量PCR检测技术对SPF鸡四种垂直传播病毒的检测应用。方法采集60份SPF鸡及70份普通鸡群蛋清、泄殖腔试子样品,提取样品核酸,分别进行ARV、REV、CAV、ALV四种病毒实时荧光定量PCR检测,根据标准曲线及溶解曲线分析判读样品病毒拷贝数。结果 SPF鸡ALV 2份阳性,检出率3.3%,其余病毒检测均为阴性;普通鸡样品REV检测2份阳性,检出率2.9%,ALV 10份阳性,检出率14.3%。结论荧光定量PCR检测方法最低可检测到100个拷贝核酸,检测灵敏度较高,有望应用于SPF鸡临床样品的病原检测。     

小鼠脑组织中溶血卵磷脂和卵磷脂含量的简便分析方法

目的建立快速准确测定小鼠脑组织中卵磷脂（PC）和溶血卵磷脂（LPC）含量的简便方法。方法小鼠脑组织经氯仿和甲醇抽提总脂后,以氯仿/甲醇/乙酸/丙酮/水（40/25/7/4/2,v/v）为展层剂,采用单相薄层层析（TLC）并结合钼蓝定磷法测定两种磷脂的含量。结果该法测定PC和LPC的回收率分别为94.91%±6.74%和104.00%±5.38%,相对标准偏差分别为5.05%和7.10%,最低检测限为4.80nmol。用此法测得小鼠脑组织中PC和LPC的含量分别为20257.14±1022.88nmol/g脑重、420.91±29.87nmol/g脑重。结论TLC法用于小鼠脑组织中LPC等磷脂的测定,简便易操作、重现性好,不仅能够分离测定PC和LPC,而且能够分离测定小鼠脑组织中的另外其它5种磷脂。     

失血性休克大鼠淋巴管及血管压力对去甲肾上腺素反应的相关性研究

目的:观察失血性休克(HS)大鼠淋巴管与血管对去甲肾上腺素(NE)反应性的变化,探讨淋巴管与血管反应性的关系。方法:大鼠行左侧腹部手术,分离胸导管,测量淋巴管压力(LP);股部手术,经股动脉测量平均动脉血压(MAP)。休克组经股动脉放血复制HS模型(维持MAP40mmHg左右,3h),假手术(sham)组仅手术。在休克不同时间点(或相当),股静脉注射NE(5μg/kg.bw),观察给予NE前后两组大鼠LP以及MAP的变化。结果:休克即刻淋巴管对NE的反应性与sham组无明显差异,到休克0.5h时淋巴管对NE的升压反应开始减弱,至休克3h依然维持低反应性;与sham组相比,休克组血管对NE反应性呈双相表现,休克即刻血管高反应性,休克1h后对NE的升压作用开始减弱,表现为血管低反应性;休克后二者的反应性相关。结论:大鼠HS后淋巴管出现低反应性,且出现在血管低反应性之前;休克发展进程中淋巴管与血管对NE的低反应性呈正相关。     

CBL结合PBL及LBL教学方法在胸外科临床实习中的应用

摘要目的：探讨CBL结合PBL及LBL的教学方法在胸外科临床实习中的应用效果。方法：选取我院胸外科临床实习学生共60人为研究对象,随机将其分为实验组及对照组,每组各30人。实验组采用CBL＋PBL-4-LBL教学方法;对照组采用LBL教学方法。在学习结束时,采用闭卷考试的形式进行成绩考核;同时采用不记名问卷调查,进行两种教学效果和教学模式的评价。结果：两组学生在理论知识考试部分成绩水平持平,无统计学差异。但是实验组学生在病例分析、基本技能及总成绩等部分成绩明显高于对照组。PBL＋CBL＋LBL教学方法在激发学习兴趣、提高学习积极性、自学能力、建立独立思维模式等方面显著高于LBL组。结论：CBL＋PBL＋LBL教学方法优于传统教学,可以提高学习的积极性,有助于医学生临床思维和实践能力的培养。