不同的甲醛杀菌浓度对A群、C群脑膜炎球菌荚膜多糖内毒素含量的影响

目的研究不同的甲醛杀菌浓度对A群、C群脑膜炎球菌荚膜多糖内毒素含量的影响。方法将A群脑膜炎球菌发酵液分成A、B两组,A组采用体积分数为2.5%甲醛杀菌,B组采用体积分数为2.0%甲醛杀菌。将C群脑膜炎球菌发酵液分成C、D两组,C组采用体积分数为2.5%甲醛杀菌,D组采用体积分数为2.0%甲醛杀菌。分别纯化获得荚膜多糖,用动态浊度法测定荚膜多糖中内毒素的含量。结果 A、C两组荚膜多糖中内毒素含量显著低于B、D两组荚膜多糖中的内毒素含量(P<0.05)。结论使用不同浓度的甲醛杀菌,对A群、C群脑膜炎球菌荚膜多糖内毒素的含量有显著影响。较高浓度的甲醛利于菌体细胞的固定,从而防止细菌自溶释放内毒素,因而高浓度的甲醛能够减少其内毒素的含量,提高了产品质量。     

A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫原性研究

采用溴化氰(CNBr)活化多糖,以无水己二酸二肼(ADH)作为连接剂,1乙基13(3二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(EDAC)为偶联剂制备A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)与破伤风类毒素(TT)的结合物,经皮下免疫NIH小鼠,用ELISA检测小鼠血清中抗GAMP及抗载体蛋白的IgG抗体水平。用补体介导的体外杀菌试验检测血清中GAMP抗体的杀菌活性。结果显示,实验中制备的多糖衍生物和多糖蛋白质结合物都具有GAMP抗原特异活性。结合物免疫小鼠后可诱生比多糖单独免疫更高水平的GAMP血清IgG抗体,并能形成免疫记忆,产生再次应答。结合物免疫小鼠所诱生的血清GAMP抗体较之多糖组具有更强的体外杀菌活性。表明此方法制备的结合物可获得优于多糖的、稳定的特异免疫原性。     

A群脑膜炎球菌荚膜多糖纯化工艺的优化

目的对A群脑膜炎球菌荚膜多糖纯化工艺的关键步骤进行分步研究,优化每一步工艺参数。方法优化十六烷基三甲基溴化铵的加入浓度、复合多糖的解离浓度和解离时间、不同厂家的苯酚、超滤和透析等工艺过程对荚膜多糖的影响。结果十六烷基三甲基溴化铵质量体积终浓度0.10%(w/v)沉淀效果更好,纯化获得的荚膜多糖产量更高相对分子质量更大。复合多糖解离浓度越高,纯化获得的荚膜多糖相对分子质量越小。延长复合多糖解离时间有利于提高荚膜多糖产量。不同厂家的苯酚、超滤和透析等工艺对荚膜多糖的产量和分子大小没有影响。结论现行A群脑膜炎球菌荚膜多糖纯化工艺复杂,优化后的工艺提高了荚膜多糖产量,缩短了工艺用时,增加了工艺稳定性。     

超滤法透析Y群脑膜炎球菌荚膜多糖的研究

目的 对超滤法透析Y群脑膜炎奈瑟菌(简称脑膜炎球菌)荚膜多糖的方法进行优化.方法 分别用恒压恒体积和恒泵速恒体积法、以0.5 mol/L氯化钙溶液和注射用水为透析液超滤Y群脑膜炎球菌荚膜多糖苯酚抽提上清液,耗用透析液体积5倍于料液体积时停止超滤,超滤结束后,向氯化钙超滤样品中直接加入乙醇沉淀多糖,向注射用水超滤样品中加...     

不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖产量的影响

目的 探索不同酸水解酪蛋白对W135群与Y群脑膜炎奈瑟菌(脑膜炎球菌)荚膜多糖产量的影响。方法 分别以NaCl质量分数为37%和14%的酸水解酪蛋白作为有机氮源配制改良半综合高盐培养基和低盐培养基,利用全自动细菌发酵罐分别在两种培养基里培养W135群和Y群脑膜炎球菌,比较这两种菌株在两种培养基中的生长时间、收获液菌密度( A 600 nm 值)、收获液去菌体后与去复合多糖后上清中的荚膜多糖含量,以及纯化后的精糖产量;比较高盐培养基收获液及其2倍稀释液中不同终含量的十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide, CTAB)溶液对多糖沉淀效果的影响。结果 W135群与Y群脑膜炎球菌在两种培养基中的培养时间差异无统计学意义( P >0.05),但高盐培养基收获液的菌密度、收获液去菌体后上清液中的多糖含量均高于低盐培养基收获液,差异有统计学意义( P < 0.05),而高盐培养基收获液纯化后的精糖产量低于低盐培养基,差异有统计学意义( P <0.05)。高盐培养液2倍稀释后,在CTAB终体积分数为0.04%时,W135群与Y群脑膜炎球菌多糖全部沉淀,而未稀释高盐培养液即使CTAB终体积分数提高到0.14%,依然也不能完全沉淀 W135群与Y群脑膜炎球菌多糖。结论 不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎球菌的生长密度和荚膜多糖产量有影响,用CTAB溶液沉淀荚膜多糖时需控制收获液盐含量。     

乙醇、丙酮和氯化钙对W135群脑膜炎球菌荚膜多糖唾液酸含量检测的影响

目的研究乙醇、丙酮和氯化钙是否影响间苯二酚法测定W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(group W135 meningococcal capsular polysaccharide)唾液酸(sialic acid)含量。方法用苯酚法制备W135群脑膜炎球菌荚膜多糖;分别定量检测唾液酸和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖添加不同质量浓度乙醇、丙酮和氯化钙,用间苯二酚法测定其唾液酸含量,检测乙醇、丙酮和氯化钙对间苯二酚测定唾液酸含量的影响。结果添加质量浓度≥39.5μg/mL的乙醇和≥9.9μg/mL的丙酮对唾液酸含量测定均有影响,其中乙醇影响不明显,丙酮的影响极为明显,而不同加入量的氯化钙均对唾液酸含量的测定无影响。结论乙醇和丙酮对间苯二酚法测定唾液酸含量有影响,二者可能会对W135群脑膜炎球菌荚膜多糖质量控制产生影响。     

W135群脑膜炎球菌发酵工艺的研究

为研究A、C、Y、W 135群流脑多糖疫苗,针对W 135群脑膜炎球菌的生长特性,采用国产50L发酵罐,针对流脑半综合液体培养基中葡萄糖浓度;培养温度、菌种接种浓度、pH、通氧量及搅拌速度等因素对W 135群脑膜炎球菌生长的影响,选择最适的培养条件。结果表明,选择半综合培养基中补加1%的葡萄糖培养效果良好,菌种接种浓度直接影响多糖复合物产量;最适pH值6.5~7.5的范围可维持W 135群链球菌快速生长;温度控制在36.5±0.2℃可得到较高的培养产物;培养过程中加大通气量及搅拌速度对培养结果有明显改善。确立了W 135群脑膜炎球菌的最适培养条件,在确定培养条件后连续进行3批500L罐放大中试培养,达到规模化生产要求。     

A群脑膜炎球菌多糖菌苗固体总量试验

本试验采用５０℃干烤法在不同实验条件下对Ａ群脑膜炎球菌多糖菌苗的固体总量进行了测定,并对其结果进行了比较。实验结果表明：（１）１ｍ１,２ｍｌ和４ｍ１取样量的固体总量之间无显著性差异。（２）采用２ｍｌ取样量用不同规格称量瓶和不同规格吸管对测定结果无明显影响。（３）采用１ｍ１、２ｍｌ和４ｍｌ取样量试验结果重复性均好。但从标准差及变异系数看,取样２ｍｌ或４ｍｌ者,试验误差更小,结果更为准确。     

细菌内毒素对A群C群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖蛋白质含量测定结果的影响

目的 探究Lowry法测定A群C群脑膜炎奈瑟菌(简称脑膜炎球菌)多糖原液蛋白质含量时,细菌内毒素对Lowry法的干扰情况。方法 根据《中华人民共和国药典》2015版(三部)规定的方法,测定含不同浓度的细菌内毒素的A群C群脑膜炎球菌多糖原液的蛋白质含量,对检测结果进行分析。以细菌内毒素为干扰物质,设计3种方法进行验证,对验证结果进行离散系数,即CV值分析,确定干扰限值。结果 当细菌内毒素含量较高时,A群C群脑膜炎球菌多糖原液的蛋白质含量明显增高,该结果可能为假阳性。验证试验结果显示,当溶液中细菌内毒素浓度达到0.313EU/mL时,会对检测结果产生干扰,浓度越高,干扰程度越高。结论 为获得准确的检测结果,当细菌内毒素浓度达到干扰限值时,应先消除干扰,再测定蛋白质含量。     

薄膜过滤法在A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗无菌检查中的应用

采用薄膜过滤法对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的无菌检查方法进行验证.结果表明,薄膜过滤法具有取样量大,操作简便,污染几率小,能确保检验结果的准确性、有效性和重现性,该方法适用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的无菌检查方法.     

C群脑膜炎球菌多糖纯化方法的改进

将C群脑膜炎球菌粗多糖的纯化改进为用1:1容量冷酚提取的生产工艺。结果表明,改进后的方法去除蛋白质效果同样能够达到《中国药典》2005版(三部)的要求,总体结果优于改进前。同时能扩大处理量而降低了生产成本,适合规模化生产。     

A C群脑脊髓膜炎球菌多糖菌苗生产工艺与内毒素含量研究

A群及C群流脑多糖抗原用 10 0 0 0 0×g离心或不经超速离心处理 ,经用鲎试验法测定内毒素含量 ,2种工艺生产的A群及C群流脑多糖抗原的内毒素含量均很低。用未经超速离心处理的A群及C群流脑多糖抗原制成的A C群流脑多糖菌苗 ,经鲎试验法测定 ,内毒素含量也很低 ;经家兔升温法进行热原质试验 ,家兔体温未明显升高。证明A C群流脑多糖菌苗生产工艺不经 10 0 0 0 0×g离心去除内毒素步骤是可行的。所制备的流脑多糖抗原内毒素含量符合要求。     

A novel capsular polysaccharide from Rhizobium rubi strain DSM 30149

Rhizobium rubi, strain DSM 30149, is a Gram negative phytopathogenic bacterium which produces a linear polysaccharide with the following repeating unit: This new structure was determined by spectroscopical and chemical methods. It presents similar lipophilic features reported for another strain of R. rubi. These contrast with features already known for capsular polysaccharide species from symbiontic members of the Rhizobiaceae family, namely highly anionic polymers.     

冻干伤寒Vi＋A群流脑二联多糖疫苗的研究

将现行伤寒多糖疫苗和A群脑多糖疫苗各1人份,联合后以乳糖为保护剂冻干,制备成1人份二联冻干疫苗。并对该疫苗进行鉴别试验、伤寒Vi多糖含量测定、A群流脑多糖磷含量测定、安全试验、冻干二联苗与单价苗Sepharose CL-4B柱层析图比较以及免疫保护效果、动物血清抗体滴度和稳定性试验。试验初步表明,该二联多糖疫苗是安全的,混合后不会引起各自的主要成份、免疫保护效果和抗体应答水平发生变化。即相互没有干扰。一年后各项指标检测表明稳定性良好。可以作为二联苗接种同时预防伤寒和A群汉脑所引起的传染。     

Structural elucidation of type III group B Streptococcus capsular polysaccharide using molecular dynamics simulations: the role of sialic acid

The conformational properties of the capsular polysaccharide (CPS) from group B Streptococcus serotype III (GBS III) are derived from 50 ns explicitly solvated molecular dynamics simulations of a 25-residue fragment of the CPS. The results from the simulations are shown to be consistent with experimental NMR homo- and heteronuclear J-coupling and NOE data for both the sialylated native CPS and for the chemically desialylated polysaccharide. A helical structure is predicted with a diameter of 29.3 A and a pitch 89.5 A, in which the sialylated side chains are arrayed on the exterior surface of the helix. The results provide an explanation for the observation that CPS antigenicity varies with carbohydrate chain length up to approximately 4 pentasaccharide repeat units. The conformation of the immunodominant region is established and shown to be independent of the presence of sialic acid. The data provide an explanation for the observation that the specificity of the determinant, associated with the major population of antibodies raised upon immunization of rabbits with GBS III, is dependent on the presence of sialic acid. In the sialylated native CPS, the antibody response is largely directed against the immunodominant core of the helix. From simulations of the desialylated CPS, a model emerges which suggests that the minor population of antibodies, whose determinant is not sialic acid dependent, recognizes the same immunodominant region, but that in the disordered CPS this region is not presented in a regular repeating motif.     

Structural elucidation of the capsular polysaccharide isolated from Kaistella flava

The Gram-negative bacterium under study belongs to the genus Kaistella. It was isolated from a soil sample of the Haian Island in China, and it produces a lipophilic polysaccharide characterised by a branched hexasaccharide repeating unit, counting four 6-deoxy-alpha-l-mannose (Rha) residues, one 2-acetamido-2-deoxy-beta-d-glucose (GlcNAc) and a 2-acetamido-2,6-dideoxy-beta-d-galactose (FucNAc) unit. The structure of the repeating unit, assigned through 2D-NMR spectroscopy, is herein reported for the first time: [carbohydrate structure: see text]