Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白5通过抑制ERK1/2磷酸化抑制C3H10T1/2细胞成脂分化

旨在探究Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白5（typeⅢ domain-containing protein5,FNDC5）对C3H10T1/2细胞成脂分化的调控作用。利用qRT-PCR和Western 印迹检测FNDC5在C3H10T1/2细胞成脂分化过程中的时序性表达规律;构建慢病毒包被的过表达/干扰FNDC5载体,转染C3H10T1/2细胞,采用qRT-PCR检测成脂分化关键基因的表达情况,油红O染色检测脂滴含量,利用Western 印迹检测细胞外信号调节激酶（extracellularregulatedkinase1/2,ERK1/2）及磷酸化ERK1/2（P-ERK1/2）的表达水平。C3H10T1/2细胞成脂诱导分化8d,Fndc5的表达量明显升高（P＜0.05）;C3H10T1/2细胞中过表达FNDC5,成脂分化关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（peroxisome proliferator--activated receptor-γ,PPARγ）、脂肪酸结合蛋白4（fatty acid binding protein 4,FABP4）和CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT enhancer binding protein alpha,C/EBPα）的表达量显著降低（P＜0.01）,CCAAT增强子结合蛋白β（CCAAT enhancer binding protein beta,C/EBPβ）表达量明显降低（P＜0.05）,脂滴含量明显减少,P-ERK1/2的含量明显降低（P＜0.05）。C3H10T1/2细胞中干扰FNDC5,成脂分化关键基因PPARγ、C/EBPβ、FABP4和C/EBPα的表达量显著升高（P＜0.01）,脂滴含量明显增加,P-ERK1/2的含量明显升高（P＜0.05）。本研究发现,FNDC5可以通过抑制ERK1/2的磷酸化水平,抑制C3H10T1/2细胞的成脂分化,为FNDC5调控脂肪沉积的机制研究提供参考数据。     

KLF转录因子家族与脂肪细胞分化

Kruppel样转录因子（Kruppel-like factors, KLF）是一类具有锌指结构的转录因子,其典型结构特征是在其羧基端具有3个C2H2锌指结构. KLF广泛参与细胞增殖、凋亡、分化以及胚胎发育等多个生命活动的调控. 近年来脂肪细胞分化研究的结果显示,KLF家族的多个成员参与脂肪细胞分化过程的调控,既有促进脂肪细胞分化的,也有抑制脂肪细胞分化的. 其中KLF4通过与Krox20协同作用,激活C/EBPβ（CCAAT-enhancer-binding protein β）基因表达,促进脂肪细胞分化;KLF5和 KLF15都通过直接结合到氧化物酶增殖体激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ, PPARγ）基因的启动子,激活PPARγ基因表达,促进脂肪细胞分化;而KLF6则通过抑制前脂肪细胞因子（pre-adipocyte factor 1, PREF1）基因表达,促进脂肪细胞分化. 抑制脂肪细胞分化的KLF2通过结合于PPARγ的启动子,抑制PPARγ基因表达,从而抑制脂肪细胞的分化;KLF3通过募集辅助抑制因子C-末端结合蛋白（c-terminal binding protein, CtBP）形成KLF3 CtBP抑制复合体,结合于C/EBPα（CCAAT-enhancer-binding protein α）基因的启动子,抑制C/EBPα表达,进而抑制脂肪细胞的分化;KLF7通过抑制葡萄糖转运蛋白2（glucose transporter2,GLUT2）基因的表达抑制脂肪细胞的成熟. 本文综述这些KLF转录因子在脂肪细胞分化过程的作用及其作用的机制.     

原代培养大鼠脂肪前体细胞分化过程中PPARγ和C/EBPαmRNA的表达(简报)

脂肪前体细胞是一类具有增殖分化能力的单能干细胞,在体内多种因素的影响下,脂肪前体细胞聚脂分化为成熟脂肪细胞。研究表明,脂肪前体细胞的聚脂分化过程受到一系列基因的调控,其中.过氧化物酶体增殖体激活受体(peroxisome prolifera- tors-activated receptor gamma,PPARγ)与CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein al-     

转录因子CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)的研究进展

CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding protein,C/EBPβ)是CCAAT增强子结合蛋白家族的一员。该家族是碱性亮氨酸拉链大家族的一个亚家族,在细胞分化、能量代谢、生长发育等多个进程中发挥作用。文章就C/EBPβ的结构、表达调控和生物学功能做一综述,并对研究应用进行了展望。     

Gαq介导的信号通路增强RGS4蛋白表达

RGS(regulators of G protein signaling)是G蛋白偶联信号通路中一类重要的调节蛋白,通过加速Gα结合的GTP水解,即GAP(GTPase activating protein)活性,来中止G蛋白信号通路。RGS4是RGS蛋白家族中的重要成员之一,它能有效中止Gαq介导的信号通路。作者研究了Gαq蛋白对RGS4蛋白的表达调控。当在HEK293细胞中共转染这两个蛋白时,持续性激活的Gαq能特异性地显著增加RGS4蛋白的表达。蛋白降解实验结果证明这种增强作用与RGS4的降解被抑制无关,而与RGS4 mRNA表达增强有关。进一步克隆RGS4蛋白的启动子区域并研究其与RGS4表达相互关系的实验结果又表明,持续性激活的Gαq能够显著增强RGS4启动子区的转录活性,且具有时间和浓度效应。同时,转录因子结合区突变体实验证明,ICE(inverted CCAAT box element)转录因子结合区的突变显著影响RGS4基因的转录活性。以上结果表明Gαq可能通过RGS4的启动子区调控其基因的表达,促进RGS4蛋白表达。     

脂肪酸影响草鱼肝细胞脂质蓄积状态及诱导其凋亡的离体研究

为探究外源脂肪酸对草鱼肝细胞脂质代谢及健康状况的影响及其机理,体外培养草鱼肝细胞,并采用不同浓度（0-1 mmol/L）油酸（Oleic acid）进行细胞孵育,噻唑兰比色法（Methyl thiazolte trazoliu,MTT）和油红O染色提取法检测肝细胞活力及脂质蓄积状况,BODIBY和DAPI染色法观察肝细胞脂滴及细胞核情况,流式细胞术检测肝细胞凋亡率变化,Real-time qPCR检测脂质合成标志基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxidase proliferation activated receptor,PPARγ）和CCAAT/增强子结合蛋白α（CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα）、凋亡相关基因Caspase家族等的表达情况。结果显示,随着油酸处理浓度的增加,肝细胞活力和细胞内脂质积累呈现先上升后下降的趋势,分别在0.4和0.6 mmol/L时达到最大值（P < 0.05）;肝细胞凋亡率则先下降后上升,在0.4 mmol/L油酸处理时最低,1 mmol/L油酸处理时最高（P < 0.05）;此外,0.4 mmol/L油酸处理抑制了肝细胞Caspase-3b和Caspase-9基因的表达,上调Bcl-2/Bax mRNA比值（P < 0.05）,而0.8 mmol/L油酸处理显著促进Caspase-3b、Caspase-8、Caspase-9及凋亡诱导因子（Apoptosis inducing factor,AIF）基因的表达,下调Bcl-2/Bax的mRNA比值（P < 0.05）。研究表明,一定浓度的脂肪酸可增强草鱼肝细胞活力,促进胞内脂质积累,抑制细胞凋亡,而脂肪酸浓度过高则抑制肝细胞活力并诱导肝细胞凋亡,其作用与脂肪酸影响脂质代谢及凋亡基因的表达有关。     

植物AREB／ABF转录因子及其参与的ABA信号转导

AREB（ABA responsive element binding protein）／ABF（ABRE binding factors）转录因子即ABA（脱落酸）应答元件结合蛋白,参与调控ABA相关基因的表达,提高植物对环境胁迫的适应能力。本文从AREBs的克隆与表达、在抗非生物胁迫中的作用以及参与的ABA信号转导等方面阐述现有的研究进展。     

PURA基因的结构与功能研究进展

富含嘌呤元件结合蛋白α(purine-rich element binding protein alpha,PURα)基因编码富含嘌呤的DNA和RNA结合蛋白。PURα在进化过程中高度保守。PURα蛋白既能直接或间接与DNA结合发挥转录因子的作用,促进或抑制下游基因的转录,也能通过与m RNA结合并影响其转运和翻译。PURα的结构变异与神经系统发育和HIV感染等多种疾病相关。近年发现PURα的结构和功能变异也与肿瘤发生发展相关。PURα通过影响DNA损伤修复而影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。作为转录因子,PURα影响肿瘤相关基因的表达。PURA基因突变和PURα蛋白结构变异与肿瘤发生及肿瘤耐药性相关。     

心肌细胞核钙调素Ⅰ介导的bcl-2转录调节在大鼠心肌肥厚中的作用

为探讨心肌细胞核钙调素Ⅰ（calmodulinⅠ,CaMⅠ）介导的bcl-2转录调节存人鼠心肌肥脬中的作用及其可能机制,实验随机分为对照组和心肌肥厚组,采用腹卡动脉缩窄法制备人鼠心肌肥厚模犁。模型复制成功后4周,以改良差速离心和密度梯度离心提取并纯化细胞核;蛋白印迹法测定心肌细胞核cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response-element binding protein,CREB）及磷酸化CREB（phosphorylated cAMP response-element binding protein,pCREB）表达;免瘦组化法观察左审心肌组织CaMI蛋白表达及分布;延续转录分析法观察阻断CaMⅠ后心肌细胞核bcl-2 mRNA的变化。结果表明,心肌肥厚组pCREB蛋白表达较对照组明显增加（P〈0．05）,CREB蛋门表达无明显变化（P〉0．05）;CaMⅠ分布于细胞核及细胞浆,心肌肥厚组CaMⅠ蛋白表达较对照组明显增加（P〈0．05）;使用CaM抑制刺后心肌细胞核bcl-2 mRNA表达明显上调（P〈0．05）。结果提示,压力超负荷时心肌细胞核内CaMⅠ激活,抗凋亡基因bcl-2表达下调,核转录因子CREB磷酸化增加,但CREB在调节bcl-2基因转录过程中可能发挥次要作用。     

GLUT4 in murine bone growth: from uptake and translocation to proliferation and differentiation

Skeletal growth, taking place in the cartilaginous growth plates of long bones, consumes high levels of glucose for both metabolic and anabolic purposes. We previously showed that Glut4 is present in growing bone and is decreased in diabetes. In the present study, we examined the hypothesis that in bone, GLUT4 gene expression and function are regulated via the IGF-I receptor (IGF-IR) and that Glut4 plays an important role in bone growth. Insulin and IGF-I actions on skeletal growth and glucose uptake were determined using mandibular condyle (MC) organ cultures and MC-derived primary cell cultures (MCDC). Chondrogenesis was determined by following proliferation and differentiation activities using immunohistochemical (IHC) analysis of proliferating cell nuclear antigen and type II collagen expression, respectively. Overall condylar growth was assessed morphometrically. GLUT4 mRNA and protein levels were determined using in situ hybridization and IHC, respectively. Glut4 translocation to the cell membrane was assessed using confocal microscopy analysis of GFP-Glut4 fusion-transfected cells and immunogold and electron microscopy on MC sections; glucose uptake was assayed by 2-deoxyglucose (2-DOG) uptake. Both IGF-I and insulin-stimulated glucose uptake in MCDC, with IGF-I being tenfold more potent than insulin. Blockage of IGF-IR abrogated both IGF-I- and insulin-induced chondrogenesis and glucose metabolism. IGF-I, but not insulin, induced Glut4 translocation to the plasma membrane. Additionally, insulin induced both GLUT4 and IGF-IR gene expression and improved condylar growth in insulin receptor knockout mice-derived MC. Moreover, silencing of GLUT4 gene in MCDC culture abolished both IGF-I-induced glucose uptake and chondrocytic proliferation and differentiation. In growing bone, the IGF-IR pathway stimulates Glut4 translocation and enhances glucose uptake. Moreover, intact Glut4 cellular levels and translocation machinery are essential for early skeletal growth.