生物素-亲和素系统及其应用(续一)

<正> 三、用生物素标记的的凝集素和 ABC定位组织切片中的糖基 用异常敏感、特异和简单的生物素标记的外凝集素和ABC技术可以定位组织中的糖基。发现在良性和恶性组织中花生受体的     

生物素-亲和素系统及其应用(续二)

<正> 八、生物素衍生物 (一)生物素化大分子 用于生物素化的生物大分子物质最常见的是抗体。由于抗体分子上的氨基基团极易被活化生物素即生物素酸-N-羟基丁二酰亚胺(BNHS)所酰化,从而可使一个抗体分子接上多个抗生物素蛋白分子起反应。通常选用抗抗体(第二抗体)接上生物素,以便使用于不同的抗原-抗体反应体系。     

生物素——亲和素系统及其应用

<正>一、概述 当数十前首次报道使用荧光素标记的抗体进行免疫细胞化学染色时,人们曾认为它是一个灵敏的方法。在产生抗体的细胞中观察到免疫球蛋白的存在标志着细胞免疫学的开始,而在肾基底膜中获得抗原——抗体复合物的定位则成为研究自身免疫性疾病的一个里程牌。     

生物素-亲和素偶联探针蛋白芯片检测技术

自行制备一种新型生物素-亲和素偶联探针分子并用于反相蛋白芯片的检测。首先, 将生物素-羊抗鼠IgG与亲和素按照不同比例混合后与鼠IgG蛋白芯片反应, 观察荧光信号的放大情况; 然后以鼠IgG-羊抗鼠IgG体系为研究模式, 对反相蛋白芯片的制备条件进行了考察和优化, 包括荧光分子的非特异性吸附、点样缓冲液的选择以及蛋白的活性等。最后, 采用此偶联探针对反相蛋白芯片进行了检测。结果表明, BSA缓冲液制备的反相蛋白芯片可以防止非特异性吸附, 并有利于保持固定蛋白活性和提高检测限; 另外, 与传统的与生物素-亲和素检测技术相比, 采用生物素-亲和素偶联探针对反相芯片的检测限可以提高4倍左右。表明亲和素-生物素偶联探针成本低、易于合成、并可以与其它的信号放大技术联用进一步提高检测的灵敏度, 有望用于蛋白质芯片的检测。     

生物素-亲和素偶联探针蛋白芯片检测技术

自行制备一种新型生物素-亲和素偶联探针分子并用于反相蛋白芯片的检测。首先, 将生物素-羊抗鼠IgG与亲和素按照不同比例混合后与鼠IgG蛋白芯片反应, 观察荧光信号的放大情况; 然后以鼠IgG-羊抗鼠IgG体系为研究模式, 对反相蛋白芯片的制备条件进行了考察和优化, 包括荧光分子的非特异性吸附、点样缓冲液的选择以及蛋白的活性等。最后, 采用此偶联探针对反相蛋白芯片进行了检测。结果表明, BSA缓冲液制备的反相蛋白芯片可以防止非特异性吸附, 并有利于保持固定蛋白活性和提高检测限; 另外, 与传统的与生物素-亲和素检测技术相比, 采用生物素-亲和素偶联探针对反相芯片的检测限可以提高4倍左右。表明亲和素-生物素偶联探针成本低、易于合成、并可以与其它的信号放大技术联用进一步提高检测的灵敏度, 有望用于蛋白质芯片的检测。     

亲和素-生物素ELISA测定培养物中de novo人IgE的合成

<正> 测定人IgE,现已发展了一种非常敏感的固相酶联免疫试验(100pg/ml)这一试验协同亲和素-生物素系统增加其敏感性,能检测100pg/ml(10pg/试验)的人IgE。试验具有高度特异性,既可以定量测定周围血液淋巴培养液中的人IgE,也可以测定血清中的人IgE。用下列试剂的最适浓度进行这种试验具有很高的敏感性:(1)亲和层析兔扰人IgE被复抗体;(2)生物素结合羊抗人IgE;(3)亲和素辣根过氧化物酶(HRp)结合物。 该试验快速(6小时),重现性好,特异性强,灵敏度同放射免疫试验,故可利用这种试验测定周围血液淋巴细胞在体外培养中所合成的IgE的浓度。     

用生物素-亲和素ELISA法检测人胚肺二倍体细胞培养的甲型肝炎病毒抗原

利用生物素-亲和素生物放大系统的原理,建立了新的检测细胞培养的甲型肝炎病毒抗原的方法。用生物素标记的抗甲肝IgG,与免疫偶联于固相的甲肝抗原作用,然后用亲和素-生物素辣根酶复合物(ABPC)与生物素化的IgG偶合,邻苯二胺(OPD)显色。该法在检测甲肝抗原中获得满意结果,灵敏度比普通ELISA法提高约10倍,非特异性显著降低。该法可进一步发展成为一种高特异性的,灵敏的甲肝临床诊断和流行病学调查的技术。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠抗天花粉蛋白的IgE类抗体的研究

检测小鼠IgE类抗体的经典方法是被动皮肤过敏试验(PCA),这是一种生物测定,因而在应用上受到一定限制,并且也受动物本身变化的影响。1973年Hoffman首次报道了用ELISA检测血清IgE。此后有不少工作者相继报道了应用ELISA检测IgE或抗原特异的IgE类抗体。为研究对天花粉蛋白的免疫     

应用快速敏感的非竞争性亲和素——生物素免疫酶试验检测血清溶菌酶

本文介绍一种测定血清溶菌酶的非竞争性亲和素-生物素免疫酶试验(NABA)。实验表明这种试验比生物素标记的竞争性试验更敏感,其最低测定界限为0.1ng/ml,而竞争性试验是1ng/ml。NABA法经内外分析变异系数分别为5.9％和9.1％。NABA法测定的总时间可以明显缩短(少于1小时)而不影响检测限度或分析范围。32例样本经NABA法和酶试验测定的血清溶菌酶水平其相关系数r=0.97。     

抗生物素蛋白-生物素免疫荧光技术检测细胞培养中增殖的甲型肝炎病毒抗原

检测细胞培养增殖甲型肝炎病毒抗原(HAAg)的敏感方法主要有直接免疫荧光(DIF),间接免疫荧光(IDIF),固相放射免疫(RIA)及放射免疫斑分析(RIFA)等。本文第一次报告用抗生物素蛋白-生物素(Avidin-Biotin)放大作用提高免疫荧光技术的敏感性应用在细胞培养中检测HAAg,生物素化抗甲肝IgG与抗生物素蛋白联结的荧光素偶合检测(BA-FA)与DIF比较,BA-FA不仅可获得背景清晰的荧光。而且快速、节省特异抗体,BA-FA特异性亦好。     

标记抗生物素-生物素酶联免疫吸附试验(LABELISA)检测血清抗-HBc/IgM的研究

本文将BAS用于固相免疫吸附试验,建立LAB-ELISA抗-HBc/IgM试验方法,并与普通ELISA法进行了比较。实验表明:本法敏感性较普通ELISA高2—4倍,检出率高出后者6.8％,且具有较好的重复性。为血清抗-HBc/IgM检测提供了一种新的、切实可行的方法。本试验采用改良过碘酸盐法制备酶标记抗生物素,以含A蛋白葡萄球菌菌体亲和吸附试验制备抗-μ抗体,在稀释液中加入凝聚正常兔IgG以克服类风湿因子的干扰、考核方法的特异性采用了含A蛋白葡萄球菌菌体吸附试验及抗HBc-抑制试验。     

链霉亲和素-藻胆蛋白的融合表达及其在液相芯片检测中应用

[目的]重组表达制备链霉亲和素-藻胆蛋白融合蛋白,并应用于致病性弧菌液相芯片的检测体系中.[方法]在大肠杆菌中构建链霉亲和素-藻胆蛋白融合蛋白的生物合成途径,通过发酵和亲和层析纯化,制备融合蛋白;设计副溶血弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌和溶藻弧菌等四种致病性弧菌特异性检测引物和核苷酸探针,以融合蛋白为荧光标志物,建立四种致病...     

用生物素-中性抗生物素蛋白结合导致的位阻来控制连接生物素的缓激肽生物活性(英)

缓激肽是一含有9个氨基酸残基的多肽,其残基序列为Arg¹-Pro²-Pro³-Gly⁴-Phe⁵-Ser⁶-Pro⁷-Phe⁸-Arg⁹-OH,在激肽释放酶的作用下, 从其大的前体多肽——激肽原而形成的.许多发病机理,如发炎、疼痛、哮喘等都与缓激肽有关. 它能与PC12细胞表面的受体作用,引起细胞器内的钙离子释放,在共焦显微镜下,通过观察钙指示剂Fluo-3荧光增加来监测缓激肽的生物活性.在这项研究中,利用固相肽合成方法合成了连接生物素的缓激肽,Biotin-Arg¹-Pro²-Pro³-Gly⁴-Phe⁵-Ser⁶-Pro⁷-Phe⁸-Arg⁹-OH,通过对其生物活性的研究发现：a.它能保持象天然的缓激肽那样的生物活性;b.由于中性抗生物素蛋白与连接的生物素的结合引起的空间位阻阻碍它与细胞表面受体的相互作用,从而抑制了它的生物活性;c.在有自由的生物素存在的条件下,自由生物素与连接生物素与中性抗生物素蛋白的竞争结合,能够使得与中性抗生物素蛋白结合的连接生物素的缓激肽从抗生物素蛋白上脱离,因而恢复其生物活性.因此,可利用生物素和抗生物素蛋白来控制连接生物素的缓激肽的生物活性.这对于研究生物体系中生物活性的结构相关性具有重要的意义.     

基于亲和素-生物素双夹心体系测定外源性蛋白血清动态浓度的非抗体依赖新方法

建立一种非抗体依赖的检测外源性蛋白多肽分子代谢动力学血清浓度及动态变化的新方法．链亲和素为捕获分子,加入待测生物素标记蛋白或合成肽,辣根过氧化物酶标记链亲和素为检测分子,构成链亲和素-生物素标记大分子-酶链亲和素的双夹心体系,并进行特异性、敏感性、准确性及稳定性评价．本检测体系灵敏度高,可达0.3125 μg/L,且可通过改变亲和素包被浓度调整检出敏感度与检测范围．准确性回收率为97.82%～107.92%,批内、批间变异系数分别< 5.76% 和< 8.42%,并成功应用在生物素标记人血清白蛋白(biotin-HSA)与生物素标记鸡卵黏蛋白(biotin-OVM)的小鼠血清浓度动态检测．本方法不依赖抗体与放射性核素,可望在外源性蛋白多肽大分子及其药物的体内定量检测和代谢动力学研究中广泛应用．     

生物素-氨基丁基乙基异鲁米诺与亲和素的结合特性及其在发光免疫中的应用

本文合成了生物素—氨基丁基乙基异鲁米诺偶联物,此物与亲和素结合后,降低了发光强度,亲和素含量与发光强度的变化有定量关系。因此,利用此特性于C—反应蛋白(CRP)发光免疫测定中。CRP标准曲线范围为1.25到160ng/mL。批内和批间变异系数分别为4.8％及14.8％。60名献血员血清CRP平均值为1.3μg/mL。此法与火箭电泳法测定同一血清CRP,相关性很好,r=0.96(n=20)。     

用生物素标记的葡萄球菌蛋白A(SPA)检测日本脑炎抗体

<正>自从亲和素和生物素特异性相互反应由Guesdon(1979)引入ELISA以来,此方法已被广泛采用为一种有用的技术,以检测和定量免疫球蛋白或抗原。用生物素标记的抗猪免疫球蛋白(Ig)抗体,结合酶标记亲和素结合物的ELISA,也已成功用到作者     

人巨细胞病毒IgG抗体(ELISA)检测试剂盒稳定性观察

目的观察人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)IgG抗体(ELISA)检测试剂盒的稳定性。方法将HCMV IgG抗体(ELISA)检测试剂盒分别以不同时间放置于2~8℃和37℃,检测试剂盒的外观、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、重复性和检测限,并对其进行稳定性(实时稳定性、加速破坏稳定性、开瓶稳定性、运输稳定性)的观察及初步应用。结果 3批实验用试剂盒实时稳定性和3批试生产试剂盒加速破坏稳定性、开瓶稳定性、运输稳定性试验中,外观均合格,阴性参考品符合率及阳性参考品符合率均为100%,最低检出限参考品均能检出。3批实验用试剂盒实时稳定性检测重复性良好,CV值均≤15.00%。3批试生产试剂盒在37℃条件下放置6 d后,CV值分别为7.94%、7.16%、4.66%;开瓶后分别置于2~8℃冰箱0w、1w、2w、3w、4w,CV值均≤1 5.00%;运输至上海,CV值分别为2.59%、3.12%、2.37%;运输至海南,CV值分别为4.89%、2.65%、2.33%。样品反复冻融5次后,试剂盒检测稳定性良好。结论 HCMV IgG抗体(ELISA)检测试剂盒具有良好的稳定性,在2~8℃条件下至少可保存15个月。     

小鼠抗天花粉蛋白IgE单克隆抗体的制备、分离和鉴定(英文)

天花粉蛋白是中药天花粉的有效引产成份,在应用中它偶尔也引起过敏反应。我们用杂交瘤技术建立了一株分泌抗天花粉蛋白特异性IgE单克隆抗体的杂交瘤细胞系。在实验中,二次免疫的C57 BL/6 J小鼠的肠系膜淋巴结细胞和脾细胞分别被用来同NSI骨髓瘤细胞进行融合。虽然在融合前动物血清IgE抗体效价仅为40～160 PCA滴度,但用肠系膜淋巴结细胞进行的4次融合都产生了IgE杂交瘤。阳性率为1.0-6.7%。对比之下,用脾细胞进行的另外两次融合却没有观察到IgE杂交瘤产生,统计结果说明差异显著(P<0.05)。该IgE单克隆抗体可以在体内和体外诱发大鼠肥大细胞脱颗粒。56℃热处理2小时能使该抗体诱导PCA反应的能力完全丧失,然而却不影响其结合抗原的能力。对该单克隆抗体的特异性的鉴定表明,它可以特异性地识别精制天花粉蛋白和结晶天花粉蛋白上的抗原决定簇。     

酶朕免疫吸附试验(ELISA)检测抗dsDNA抗体药盒研制

系统性红斑狼疮(SLE)是一种常见的结缔组织病,也是危及生命的重病。这种自身免疫病如累及肾病,在血中常有高水平的抗dsDNA抗体出现。这种抗体的升高或降低与疾病的恶化或好转密切相关。因而抗dsDNA抗体测定有鉴别诊断及判断预后的作用。也有人在观察衰老过程中自身抗体的变化。     

应用捕获ELISA法检测人巨细胞病素特异性IgM抗体的研究

应用捕获ELISA法检测人巨细胞病毒感染者血清特异性IgM抗体。通过与间接ELISA法对 4 7例临床标体的检测比较 ,该法灵敏度及特异性均高于间接法 ,且不受RF的影响。试验表明 ,CMVIgM捕获法特异敏感、简便、快速、重复性好。CMVIgM捕获法试剂的研制成功 ,将为血清学的检测、流行病学的调查及临床诊断等提供可靠的科学诊断依据 ,有助于优生及优育