垂直平板凝胶真空干燥的简易方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳已被广泛应用于生物化学的各个领域。因垂直平板凝胶电泳和圆盘凝胶电泳相比,具有实验误差小、效率高、操作方便等优点,近年来发展较快。对于平板凝胶图谱,一般保存在7%的乙酸溶     

凝胶干板的简易制备法

聚丙烯酰胺凝胶干板的制备方法,国内外已有许多介绍,但由于条件限制和操作复杂,总不尽如意。本文介绍三种较为简易的凝胶平板干燥制板方法,以供大家参考。     

一种无桥的水平板型凝胶电泳

凝胶电泳是研究核酸、蛋白质等生物大分子的一项重要技术,也是DNA的限制性核酸内切酶切割片段的分析、分离、纯化的一种不可缺少的方法。虽然垂直(管柱型及板型)凝胶电泳早已被广泛应用,但它不能用低浓度琼脂糖凝胶分离大分子DNA。水平板型凝胶     

介绍一种制备管状梯度凝胶的装置

梯度凝胶电泳分离生物大分子具有分辨力高、区带清晰的特点,特别适于分离γ-谷氨酰转肽酶一类膜结合蛋白。此外还可利用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量。目前这种方法多是用垂直平板凝胶。本文介绍一套自制管状梯度凝胶的装置和制备凝胶的方法。用这种方法,既节省试剂     

供平板凝胶干燥用的一个简易装置

聚丙烯酰胺凝胶电泳作为高分辨率的分析工具,已广泛应用于生物学及医学研究的各个领域。经固定、染色、漂洗之后显示的凝胶图谱,通常采用光密度计扫描记录或摄影留底。而平板型凝胶图谱可用以下方法     

凝胶干板的制作保存与拍摄

凝胶干板的制作保存与拍摄聚丙烯酰胺凝胶干板的制作是电泳中常遇到的一个难题,许多学者曾对此进行过研究,其方法各具特色,但效果不甚理想．通常使用ＧＢ２１°全色胶卷直接拍摄凝胶板,其区带与背景之间反差小．笔者在实验中将聚丙烯酰胺凝胶板微缩后制成干板,方法较...     

琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测小麦基因组DNA RAPD扩增产物的方法学比较

通过20%(wv)的琼脂糖凝胶和5%(wv)的聚丙烯酰胺凝胶电泳对小麦白粉病抗、感特性品种基因组DNA的RAPD检测结果表明:5%聚丙烯酰胺凝胶对线性DNA分子(01～20kb)和长度相差100bp以下的DNA分子的分离较20%的琼脂糖凝胶电泳效果好。因此,我们研究出了一项利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测小麦白粉病抗、感特性的新技术,在工作中建立了一种适合于检测小麦基因组DNA结构差异的电泳方法。该方法主要包括:(1)丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺的新配比;(2)分离DNA片段的最佳凝胶浓度;(3)电泳条件;(4)脱色、漂洗、银染、显色过程。实验发现,该技术对于小麦白粉病抗、感特性检测中的小片段和长度相差100bp以下的线性DNAPCR扩增结果的分辨效果较好。应用该技术在抗感品种间已经发现了DNA水平上的差异。     

一种适用于质谱分析的简化胶内酶解方法

在常规方法的基础上,设计了一种适于质谱分析的简化胶内酶解方法。改进的步骤包括:(1)通过加大洗涤所用超纯水量、延长涡混时间来强化凝胶洗涤的环节;(2)加入酸化处理来提高胰蛋白酶的活性;(3)在预酶解时不加CaCl_2,减少了酶的自切作用;(4)省略了蛋白质样品脱盐、脱SDS的步骤;(5)直接吸取酶解液进行质谱分析。系统比较该简化酶解法和最新报道的一种酶解方法的质谱鉴定效果,简化法能有效减少酶解后肽段的损失,增加质谱数据库搜索的信息量,得到更可靠的蛋白质鉴定结果。     

一个简易的垂直平板凝胶电泳装置

聚丙烯酰胺凝胶电泳已经广泛地应用于分离复杂的蛋白质或核酸混合物。但柱型圆盘凝胶电泳技术,对一系列不同样品的比较仍存在问题。垂直的平板凝胶电泳装置,具有下列优点:1.平板表面大,有利于凝胶的冷却;2.一系列样品能在相同的制板、电泳、显色条件     

一种简便经济的薄层凝胶电泳保存方法——滤纸转移自干法

在分析性聚丙烯酰胺凝胶电泳特别是平板等电聚焦电泳中,薄层凝胶越来越被广泛采用,它有节省试剂、加样量少、电泳时间短、分辨率高及冷却效果好等优点。分析者都希望能将电泳染色后的凝胶理想地保存下来,目前所采用的方法均是直接将凝胶干燥在玻璃板或凝胶支持膜上(由于凝胶太薄不能转移),或者使用专用的透明保存膜,有时还要用真空干燥器干燥。     

甘蔗过氧化物酶同工酶分析

以３０个甘蔗品种为材料,用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳,分析甘蔗不同生长时期过氧化物酶同工酶。个别品种还进行同一品种在不同种植地区、同一植株不同叶位的同工酶酶谱比较,结果表明,不同品种的酶谱其酶带分布有明显的区别,但同一品种在不同种植地区、不同生长时期、不同植株、同一植株不同叶位其酶带分布无差异,体现了同工酶作为品种标记具有多态性及稳定性。用单一酶系即可准确、方便地鉴定甘蔗品种。     

甘蔗过氧化物酶同工酶分析

以30个甘蔗品种为材料,用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳,分析甘蔗不同生长时期过氧化物酶同工酶。个别品种还进行同一品种在不同种植地区、同一植株不同叶位的同工酶酶谱比较,结果表明,不同品种的酶谱其酶带分布有明显的区别,但同一品种在不同种植地区、不同生长时期、不同植抹、同一植株不同叶位其酶带分布无差异,体现了同工酶作为品种标记具有多态性及稳定性。用单一酶系即可准确、方便地鉴定甘蔗品种。     

黄姑鱼(Nibe albiflora)肌肉乙酰胆碱酯酶的多分子形式和亚基组成

用Sepharosc 6B凝胶过滤和聚丙烯酰胺凝胶电泳方法观察了表面活性剂和NaCl对黄姑鱼(Nibea albiflora)肌肉乙酰胆碱酯酶分子形式的影响。在有2毫克/毫升TritonX-100存在时,酶以单体形式(Ⅰ)存在。去除TritonX-100即发生聚合,形成两种不同聚合度的多聚体(Ⅱ和Ⅲ)。NaCl的存在可以减缓而不能阻止酶的聚合作用。这时除单体形式外,还有酶的另一低聚形式(Ⅳ)、以及酶的高聚体(Ⅲ)存在。聚合的酶再经1%TritonX-100处理重新解离成单体形式。用Sepharose6B凝胶过滤方法测得酶的单体形式(Ⅰ)的分子半径为64(?)、低聚形式(Ⅳ)的分子半径为81(?)。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测得单体酶分子是由相同的亚基组成,每个亚基的分子量为74,000。     

超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳方法--介绍一种高效、快速的生物同工酶分析方法

介绍了一种简易、高效、快速的生物同工酶分析方法——超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳方法。该方法与目前国内外市场销售的同种用途等电聚焦的产品 (如BIO- RAD公司的 model1 1 1 Mini IEF Cell)相比 ,具有以下优点 :实验操作灵活 ,用途更广 ;谱带清晰 ;每次可实验的样本量大 ;电泳所需时间短 ;实验费用低 ;适用于多种酶系统的同工酶和等位酶分析 ;凝胶干燥不需任何设备且能长期保存 ;样本用量少。     

一种α－半乳糖苷酶的凝胶电泳活性染色方法

介绍一种快速、简便鉴定α－半乳糖苷酶凝胶电泳带的坚固蓝Ｂ活性染色方法。采用此方法,可直接将粗酶制品上样进行凝胶电泳。电泳完成后,只需将凝胶放在反应液中浸泡５ｍｉｎ,然后再在ｐＨ为７．８,温度为４℃的条件下染色１ｍｉｎ,即可将凝胶中的酶分子定位带显示出来。这种坚固蓝Ｂ的活性染色方法与考马斯亮蓝染色相比,节省了大量时间。     

海枣曲霉β-半乳糖苷酶的提纯与性质

 通过过聚乙二醇6000-磷酸钾缓冲液双相分离、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、羟基磷灰石层析及SephadexG-100凝胶过滤等提纯步骤,从海枣曲霉(Aspergillus phoenicis)麦麸培养物抽提液中提纯得到凝胶电泳均一的β-半乳糖苷酶。该酶的最适pH为3.5—4.0,最适温度为60℃(反应15分钟),在pH5.0—8.5之间及60℃以下稳定。在65℃和70℃保温时失活50％的时间分别为27和2分钟。用SDS凝胶电泳法和梯度凝胶电泳法分别测得该酶的分子量为115,000和118,000。薄层凝胶等电聚焦法测得其等电点为pH4.6。     

BamHI DNA甲基化酶的提纯及物理化学性质

 通过硫酸铵盐析,DEAE-纤维素柱层析,磷酸纤维素亲和层析及SephadexG-100凝胶过滤法,从噬淀粉芽孢杆菌HI(Bacillus amyloliguefaciens HI)提纯了DNA甲基化酶。用聚丙烯酰胺凝胶电泳检查,已达电泳均一,比活力提高了326倍。并用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和Sephadex G-100凝胶过滤法测得其天然酶的分子量为273000,又用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得它的亚基分子量为34500,故该酶有8个分子量相同的亚基。用凝胶电聚焦法测得其pI_(22 c)=9.0。     

简易平板聚丙烯酰胺凝胶干燥及保存装置

平板(Slab)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)与含有十二烷基磺酸钠的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种重要的生化技术,在蛋白质与多肽的分析鉴定上,应用十分普遍。但电泳后的凝胶脆弱易碎,难长期保存。近年来,国外已有凝胶干燥保存装置的商品,但价格较贵,效果也不很理想。在干燥过程中有时胶片会干裂,尤其是对一些含聚丙烯酰胺浓度较高(20％以上)的胶或较厚的胶片(1.5—2mm)。在工作中,我     

简易平板聚丙烯酰胺凝胶干燥及保存装置

平板(Slab)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)与含有十二烷基磺酸钠的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种重要的生化技术,在蛋白质与多肽的分析鉴定上,应用十分普遍。但电泳后的凝胶脆弱易碎,难长期保存。近年来,国外已有凝胶干燥保存装置的商品,但价格较贵,效果也不很理想。在干燥过程中有时胶片会干裂,尤其是对一些含聚丙烯酰胺浓度较高(20％以上)的胶或较厚的胶片(1.5—2㎜)。在工作中,我     

一种α—半乳糖苷酶的凝胶电泳活性染色方法

介绍一种快速、简便鉴定α－半乳糖苷酶凝胶电泳带的坚固蓝Ｂ活性染色方法。采用此方法可直接将粗酶制品上样进行凝胶电泳。电泳完成人需将凝胶放在反应液中浸泡５ｍｉｎ,然后再在ｐＨ为７．８,温度为４℃的条件下染色１ｍｉｎ,即可将凝胶中的酶分子定位带显示出来。这种坚固蓝Ｂ的活性染色方法与孝马斯亮蓝染色相比,节省了大量时间。