一株新型抗46 ku-细胞角蛋白的单特异性单克隆抗体

利用杂交瘤技术制备了一株单克隆抗体 T2-2,对其生化性质的研究及其与抗细胞角蛋白多克隆抗体完全重合的定位表明,该抗体特异性识别一种分子质量为 46 ku 的角蛋白. 对 68 例正常组织和 65 例肿瘤组织的免疫组化结果显示,单克隆抗体 T2-2 具有上皮细胞特异性. 与其他多数抗细胞角蛋白抗体常与一种以上细胞角蛋白多肽表现出交叉反应不同的是,该抗体只识别 46 ku 细胞角蛋白多肽上的某一单特异性表位. 另外,单克隆抗体 T2-2 适用于多种免疫实验技术,包括 ELISA、免疫组化、细胞免疫荧光及蛋白质印迹等,而且适用于多种固定剂. 以上结果表明,单克隆抗体 T2-2 将成为细胞角蛋白功能研究和肿瘤诊断的有力工具.     

抗人肺腺癌细胞株SPC-A-1的单克隆抗体的制备和鉴定

人肺腺癌细胞株SPC-A-1,经抗人正常肺抗血清复被后免疫小鼠,脾细胞和同系NS-1或SP 2/0融合,获得17株单克隆抗体。本文报道其建株过程及其中7株单克隆抗体的一些特征。LAC-122、LAC-163与LAC-210对人体肺腺癌和肺鳞癌的阳性反应率分别为75%、78.3%和75%,除LAC-122对一例胃癌细胞株有微弱交叉反应外,三株单抗对肺小细胞癌, 其它肿瘤组织及正常、胚胎组织均呈阴性。对利用抗体复被瘤细胞及肺癌相关抗原问题作了较详细的讨论.     

单克隆卵黄抗体技术研究进展

单克隆抗体具有特异性强、表达较稳定等优势,而鸡IgY抗体因其种属距离等特点而具备一系列特殊优势,诸如交叉反应小、产生IgY的鸡免疫系统对哺乳动物保守的生物分子反应明显等,如能将这两种抗体的优势结合起来,开发单克隆卵黄抗体则有望大大拓展抗体的研究模式和应用领域.针对这一新兴领域,从单克隆卵黄抗体的理论背景、研发与技术现状和可能的应用前景三个角度综述了国外的研究现状.     

抗幼畜腹泻病原菌E. coli表面抗原(K99)单克隆抗体细胞株的建立与抗体特性分析

本文概述了抗幼畜腹泻病原菌细胞表面抗原K 99蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与抗体特性的鉴定。经过近半年的体外培养,大多细胞株仍能持续分泌较高滴度的单克隆抗体。腹水中抗体的ELIS．~反应滴度可达2 x 10’。通过EL[SA、免疫荧光、斑点试验、免疫扩散和玻板凝集等多种免疫学方法证明了该抗体是抗K 99蛋白的单克隆抗体。该抗体的特异性与稳定性分析,为使单克隆抗K 99抗体成为幼畜细菌性腹泻病的大规模诊断与防冶的标准免疫学试剂提供了基础。     

小鼠抗食蟹猴IgG单克隆抗体的制备

目的制备抗食蟹猴、恒河猴等非人灵长类实验动物免疫球蛋白二级抗体,开展对其传染病血清学快速诊断方法的建立。方法采用饱和硫酸铵盐析、Agarose-Protein G亲和层析技术,从食蟹猴血清中提纯IgG。经SDS-PAGE电泳鉴定,采用常规法免疫C57BL/6小鼠,三次免疫后取脾细胞与Sp2/0-Ag14骨髓瘤细胞通过PEG4000融合制备杂交瘤细胞,利用间接ELISA、Western blot等方法进行筛选、鉴定。结果得到5株阳性杂交瘤,分别命名为2B6、2B7、2D9、3B2、5E4,并且5株杂交瘤分泌的抗体均与恒河猴的IgG或血清发生交叉反应,而与其他物种如东北虎、犬等动物的IgG或血清无交叉反应。结论 5株杂交瘤产生的单克隆抗体（McAb）具有较好免疫活性,且能长期、稳定地分泌抗体。此项研究工作为后续研究食蟹猴、恒河猴传染病血清学诊断方法奠定基础。     

人β-actin蛋白原核表达及其单克隆抗体制备

为获得分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞,通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin蛋白,以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得1株能稳定分泌抗人β-actin蛋白McAb的杂交瘤细胞,命名为2B4。采用间接ELISA和Western blot方法对McAb的特异性、稳定性和适用范围进行鉴定。结果显示：蛋白的相对分子质量为43 kDa,可溶于8 mol/L尿素;杂交瘤细胞上清的抗体效价为1×10^5,腹水的抗体效价为1×10^7;间接ELISA结果表明,杂交瘤细胞在体外传20代或液氮冻存3个月后,分泌的抗体效价不变;37℃保存24 h后,抗体的效价开始下降。Western blot结果显示,单克隆抗体识别人、鼠、兔和鱼的β-actin蛋白,与其发生特异性反应。2B4分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验,具有良好的应用价值。     

马IgM、IgG单克隆抗体的研制与鉴定

以马IgM、luG作为免疫抗原,以此免疫BALB/c小鼠,并取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2.0)融合,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法筛选,结果获得了4株分泌抗马IgM和2株分泌抗IgG的单克隆抗体的杂交瘤细胞,特异性试验证明,4株IgM单抗有很好的特异性,仅与马的IgM特异反应,而不与IgG反应;这4株单抗分别命名为IgM4H、IgM6B、IgM8A和IgM12F.经鉴定,IgM4H、IgM6B、IgM12F株为IgG1亚类,IgM8A株为IgG2a亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数目为99条.杂交瘤细胞培养上清液及小鼠腹水McAb的ELISA都具有较高的效价,该杂交瘤细胞连续培养20代后仍能稳定分泌抗体.2株IgG的单克隆抗体有很好的特异性,只与IgG反应,而不与IgM发生交叉反应.     

单克隆抗体及其抗感染作用的研究进展

骨髓瘤细胞和单个B细胞可融合形成杂交瘤细胞,这种细胞分离并克隆后可产生针对单一表位,且结构和功能相同的抗体,即单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)。单克隆抗体发展历程经历了四个阶段。其制备技术也在不断革新与发展。目前单克隆抗体技术发展日益成熟,在疾病治疗与诊断中发挥着关键的作用。单克隆抗体与天然抗体不同,具有效价高、特异性强、交叉反应少、可大量制备,靶向性高等特点。mAb可用于诊断及治疗感染性疾病、自身免疫病以及癌症等。对mAb的发展历程及mAb在抗感染性疾病中的应用进行简要阐述。     

人用鼠源单克隆抗体的生产和质量控制的指南——药品专门委员会、生物工程学/药学特别工作组

<正>1.引言 免疫动物的B-淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合结果形成杂交细胞,即杂交瘤细胞,该细胞不断生长并产生抗体。这种细胞可经克隆化后筛选,使其稳定分泌特定的专一性抗体。这些克隆细胞系的连续培养可以大量制备单克隆抗体。这种方式生产的单克隆抗体可用于各种治疗目的,如抗肿瘤治疗,免疫调节,被动免疫以及体内诊断和生物制品的制备方法。下述要求是对得自鼠源杂交瘤细胞的单克隆抗体拟在人体治疗和体内诊断应用时的要求。拟用于纯化其它制品的单抗应经本文所述方法证明为纯品不含杂质。本文不涉及用于体外诊断目的的单抗。 鼠源单克隆抗体在临床应用方面的一个重要考虑是该抗体可能与人体组织抗原(除已有描述者外)有非特异的免疫交叉反应以及可能有病毒和/或潜在致癌大分子物质。 鼠单抗用于人体治疗的基本问题可能是受者对鼠免疫球旦白或产品中的其它旦白产生抗体。这些可引起有害反应并且会限制有效抗体治疗的持续。对患者采用不能自己合成免疫球旦白链的亲代骨髓     

电融合产生黄瓜花叶病毒的单克隆抗体

用提纯的黄瓜花叶病毒(CMV)种传SS-30株和豇豆株(P株)混合免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0,用BAEKON 2000基因转移仪使其融合。通过2—3次简易、快速的有限稀释,获得6个能持续分泌抗体的杂交瘤细胞株,所获抗体分属IgG．和IgG∽井能诱导高滴度腹水抗体。间接ELISA试验证明这些单克隆抗体对种传CMvss一30株、P株和非种传CMV的黄化、日本、山东、香蕉。向日葵和Q等分离物有特异性反应,与c,·分离物的反应性较弱,而对花生矮化病毒(PSV)无交叉反应。利用间接ELISA测定了几个单克隆抗体的亲和力常数。单克降抗体C7H3、A6H4与G4G4、G4H5所抗的抗原决定簇相距较远,而C2H3 与A6H4 G+G8与G4H4为抗同一抗原决定簇的草克隆抗体。     

加拿大发现心肌细胞再生法

加拿大麦基尔大学的科学家发现了一种可使心肌细胞再生的方法。研究人员从老鼠骨髓内取出干细胞 ,再将其注射到老鼠心脏内 ,就可促进老鼠心脏细胞的再生 ,此法如能在人体实验成功 ,则会大大提高对心脏病的治愈率。研究人员从 2 2只老鼠骨髓中取出了一种被称为骨髓基质细胞的干细胞 ,然后将其注射到老鼠心脏内。在 2 2只老鼠中 ,有 2 0只体内的成熟干细胞变成有效的心脏肌肉 ,而且与心脏内其它细胞完好结合在一起。在美国心脏协会年会上 ,加麦基尔大学保健中心的赵雷医生说 ,这种新方法将能避免因心脏病发作或遭病毒感染使心脏遭到破坏 ,患者…     

长叶车前花叶病毒上海分离株单克隆抗体的制备及其免疫学特性——Ⅱ单克隆抗体免疫反应方法及在株系鉴别上的应用

采用两种不同的ELISA方法比较了长叶车前花叶病毒上海分离株(RMVsh)7种单克隆抗体对完整病毒及其外壳蛋白的反应。结果表明不同的单克隆抗体在两种ELISA方法中的反应特性各异。这可能由于ELISA方法对抗原结构的影响而导致抗原抗体结合的不同。比较烟草花叶病毒群的7个分离株对RMVsh单克隆抗体和兔多克隆抗体的反应。结果表明单克隆抗体能与属于RMV的3个分离株起反应,并能将它们区分开来,与属于TMV的4个分离株均无反应。而兔多克隆抗体与这7个分离株均有较强的反应,但难以区分各株系。表明单克隆抗体在株系鉴别上具有高度的特异性。     

Pichia pastoris酵母中表达人源中和性抗甲型肝炎病毒scFv-Fc融合抗体的研究

为了探讨人源抗甲型肝炎（甲肝）病毒scFv—Fc融合抗体在酵母中的表达特性,将获得的人源抗甲肝病毒中和性单链可变区抗体（scFv抗体）基因克隆入含信号肽及人IgG1Fc抗体基因的酵母细胞表达载体中,获得了一株中和性人源抗甲肝病毒pPiscFv—FcHA16融合抗体的分泌表达,并对表达产物进行了纯化。同时对表达产物的生物学特性进行了一系列鉴定。表达的pPiscFv—FcHA16融合抗体为具有不同糖基化形式的同源二聚体,与相应的CHO细胞表达的IgG抗体相比,pPiscFv—FcHA16融合抗体仍保持很好的抗原结合活性,以及与中和性鼠抗甲肝病毒单克隆抗体的竞争抑制能力。同时也保持了对甲肝病毒的体外中和活性。这些结果表明,在酵母中表达的单链可变区（scFv）与IgG1Fc区的融合抗体具有很好的生物学活性,有希望用做体外诊断,用纯化相应的抗原,或者可能用于体内预防与治疗。     

基因工程抗体

通过基因工程可以大规模地制备能与人相容的单克隆抗体或其片段,用于诊断、治疗以及抗体结构与功能的研究。基因工程抗体的制备过程是通过PCR技术获得抗体或其片段的基因,再与适当的载体重组后引入不同的宿主系统,如哺乳动物细胞、昆虫细胞、大肠杆菌和植物中进行表达、装配。较详细地介绍了基因工程抗体的背景、现状和进展。     

哺乳动物细胞大规模培养的又一方法

这里介绍的是用于制备单克隆抗体或其它细胞产物的大规模培养哺乳动物细胞的又一方法。Monoclonal Production Inter-national(MPI)公司和堪萨斯州立大学正在研制一种培养哺乳动物细胞的方法,即在母牛子宫中发育胚胎周围的羊水里进行细胞培养。该公司希望近期能就它所研制的一种仪器颁布一项专利,这种仪器可以把细胞引入子宫羊水中,也可以从中取样或收取羊水。这一方法的目的是扩大活细胞,如产生单克隆抗体的杂种瘤的培养规模。以前不论是小规模还是大规模单克隆抗体的制备,常常是将杂种瘤细胞培养在老鼠体腔内。应用大型动物效率会更高。堪萨斯州立大学的W. Fortner说,最初的结果表明,从一个母牛子宫可获得5     

抗人B7-H1单克隆抗体的制备和鉴定

目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单克隆抗体并对其亚型进行鉴定;用间接ELISA法测抗体效价;将肺癌组织制成石蜡切片,用抗人B7-H1抗体进行免疫组化染色。结果:获得1株稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型为IgG1;抗体效价为1×108,纯化后的抗体含量为6.76g/L;免疫组化实验中,单抗可与肺癌组织表面的B7-H1蛋白特异地结合。结论:制备了人B7-H1单克隆抗体,为B7-H1检测试剂盒的研制奠定了基础。     

群特异性蓝舌病病毒单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备群特异性抗蓝舌病病毒（BTV）单克隆抗体,并对其特性进行鉴定,为建立检测BTV抗原及抗体的ELISA方法奠定基础。方法：用纯化的BTV颗粒为免疫抗原免疫BALB/c鼠,以大肠杆菌表达的VP7蛋白作为筛选抗原,用间接ELISA法筛选杂交瘤细胞株;选取抗体效价最高的一株制备BTV单克隆抗体,以该抗体为捕获抗体与8种不同血清型BTV进行ELISA反应,结果与细胞病变反应进行比对;以该抗体为竞争抗体,与12种不同血清型绵羊BTV抗血清进行竞争ELISA反应,并将结果与参比c-ELISA试剂盒结果进行比对。结果：筛选出5株稳定分泌BTV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并选其中一株（3E2）制备了高纯度的单克隆抗体;该单抗用于检测不同血清型BTV,与细胞病变反应结果完全相符;用于检测不同血清型绵羊BTV抗血清,其结果与参比c-ELISA试剂盒符合率为100%,与鹿流行性出血热病毒抗原和抗体均无交叉反应。结论：制备的BTV单克隆抗体具有良好的群特异性,可用于检测不同血清型BTV抗原及BTV抗体。     

单克隆抗体技术简介

1980年,人-人B淋巴细胞杂交瘤融合成功,获得人的特异性单克隆抗体。它可以避免动物外源蛋白在人体内的过敏反应,用于人类疾病的诊断和治疗。今将制备技术及其在医学方面的应用简介如下: 1.制备技术与原理制备技术关键是细胞融合与融合细胞的培养、抗体筛检与细胞克隆化两步。细胞融合与融合细胞的培养取新制备的脾细胞悬液和处于生长对数期的鼠骨髓细胞悬液(活率均须>95％),按2∶1—10∶1(脾细胞∶骨     

国际杂交瘤细胞资料数据库

1975年英国有两位免疫学家Kohler和Milstein,找到了一种性能惊人的人称“生物导弹”的杂交瘤细胞,它的发现成为医疗领域里发生的一场真正革命。这样的一些细胞能产生精制度很高的抗体,叫做单克隆抗体,它能识别即定的分子,然后就固定其上。在某种意义上说,这是一些非常专异的反应剂,能从一些血型,海拉(HLA)细胞组织相容性系统,血清组分、细菌、病毒,寄生菌等作终结诊断。其应用范围更加迅速地扩展开来,例如农业、生物化学、有机化学等领域都有用途。     

改善抗体生产效率

西雅图遗传系统公司开发了一种能改善人单克隆抗体生产的技术。据该公司称这一技术提高了找出大量合适细胞类型的几率。这一技术与加州埃墨里维尔喀特生物公司开发的增强细胞培养和抗体收获工艺相结合,亦打开了生产足够用于治疗的大量抗体的大门。