荧光定量PCR诊断结核性脑膜炎的临床价值

目的 探讨荧光定量PCR检测脑脊液（CSF）结核分枝杆菌评估其临床意义。方法 应用荧光定量PCR技术检测45例CSF结核分枝杆菌并与抗酸杆菌染色。结核抗体酶联免疫吸附试验（结核抗体ELISA,简称酶联OT）进行比较。结果 荧光定量检测CSF结核杆菌的阳性率为11．1％,酶联OT为13．3％,抗酸杆菌染色为0％。结论 荧光定量PCR用于检测CSF结核分枝杆菌不具有灵敏度,阳性率低,对临床诊断结核性脑膜炎（简称结脑）无多少价值,不值得在临床上推广应用,必须寻找更有价值的诊断方法。     

分枝杆菌L型诱导

作者在TSA-L培养基上,应用D-环丝氨酸50μg/ml和异烟肼1μg/ml成功地诱导出耻垢杆菌和结核杆菌L型。其L型与原菌相比,表现有形态学的改变和抗酸染色性的变化,并且发现可能是由于两种药物的作用机制不同,其诱导结果也不尽相同。同时实验证明,在分枝杆菌L型的培养和诱导过程中,平皿胶布封口培养可以代替目前常用的烛缸培养,能减少污染又便于观察。     

三种结核分枝杆菌检测方法的比较

目的:比较三种结核分枝杆菌检测方法的阳性检出率,并且评价其检测成本等因素,为基层医院快速、准确诊断结核病提供科学依据。方法:对学院附属医院2010---2012年确诊为肺结核病的98例患者标本用抗酸染色涂片法、血清学胶体金法以及聚合酶联链式反应(PCR)分别进行检测。结果:三种检测方法的阳性率分别为:17.3%,76.5%和79.5%。结论:综合三种方法的优缺点,建议基层医院联合使用抗酸涂片染色法和血清学胶体金法进行结核分枝杆菌的检测。     

3种检测分枝杆菌方法的比较及应用价值分析

目的:比较并评价涂片抗酸染色法(涂片法)、L-J培养法和基因芯片法在分枝杆菌检测中的应用价值。方法:对241例需查抗酸杆菌的临床标本,采用涂片法、L-J培养法和基因芯片法检测分枝杆菌,3种方法检测结果存在分歧的标本再进行DNA测序,以培养鉴定结果阳性或DNA测序得到分枝杆菌序列为确诊标准。结果:241例标本,涂片法、L-J培养法和基因芯片法的检测阳性率依次为18.7%、12.0%、15.8%,经卡方检验三者阳性率的差异没有统计学意义(P0.05);检测灵敏度依次为85.4%、70.7%、93.0%,经卡方检验三种方法的灵敏度总体来说有差别(χ2=7.24,P0.05),涂片法与L-J培养法以及涂片法与基因芯片法的灵敏度差异没有统计学差异,基因芯片法的灵敏度高于涂片法(χ2=6.61,P0.05);检测特异性依次为95.6%、100.0%、100.0%。38例基因芯片检测阳性患者中有28例为结核分枝杆菌,10例为非结核分枝杆菌。结论:与涂片法及培养法相比较,基因芯片法能够鉴别分枝杆菌菌种,同时具有快速、可靠、准确度高的特点,在分枝杆菌感染的早期诊断和抗菌治疗上具有重要的临床价值。     

甲真菌病多点平皿培养法与常规试管培养法的比较

目的比较甲真菌病病原体检测中多点平皿培养法与常规试管培养法的差异。方法选择2004年10月～12月及2005年10月～12月病甲标本,分别采用多点平皿培养法(试验组)和常规试管培养法(对照组)分离病原体并作菌种鉴定。结果多点平皿培养法和常规试管培养法之间比较,阳性率分别为68.4%和49.3%(P=0.0029),污染率分别为13.2%和4.6%(P=0.0246)。致病菌分离结果:对照组皮肤癣菌75.7%,酵母菌18.9%,非皮肤癣菌霉菌5.4%;试验组则分别为46.2%,34.6%和16.7%。两组分离菌种比较,P值均<0.05。试验组共检出2例混合感染,对照组则无。结论多点平皿培养法阳性率高,可以提高对甲真菌病的病原菌的检出率,尤其是对非皮肤癣菌酵母菌和霉菌的检出率,且有助于发现甲真菌病的混合感染。但多点平皿培养法污染率亦高,应规范无菌操作。     

分枝杆菌属的分离和快速鉴定方法

分枝杆菌属的分离和快速鉴定,不仅是放线菌分类学中的重要问题,而且也为临床非典型分枝杆菌疾病的诊断提供依据。国际上研究过的分枝杆菌多从病灶中分离得到。到目前为止,很少有人较系统地报道从非病灶材料中分离这类微生物。为了更全面地研究分枝杆菌分类学,我们从采自国内和美国的370份土样中分离得到了48株抗酸菌,确定     

对血平皿及双相培养基两种培养方法的评价

目的:通过实践了解血平皿及双相培养基两种培养方法的差异性,提高阳性率.方法:将体液标本同时接种血平皿及双相培养基,按<全国临床检验操作规程>,根据分离菌株形态、氧化酶、触酶,选择相应的生化/药敏鉴定板,用美国DADE Behring公司生产的MicroScan AS-4微生物分析仪进行菌种鉴定及药敏试验.结果:364例标本血平皿131例为阳性,阳性率为36.0%(131/364),双相培养基164例为阳性,阳性率为45.1%(164/364).两种培养方法经统计学处理χ2=6.26,P<0.05.两种培养方法总阳性率为53.3%(194/364).如将标本仅接种血平皿,漏检率达17.3%(63/364),标本只接种双相培养基,漏检率达8.2%(30/364).结论:将体液标本同时接种上述两种培养基进行培养,可使阳性率有较大的提高.     

聊城市空气微生物污染的检测及评价

采用平皿沉降法对聊城市空气微生物浓度进行了初步测定.结果表明:空气中细菌、霉菌的浓度分别为3.98×103cfu/m3、0.90×103cfu/m3,空气质量处于微污染水平;从功能区划分看,商业区、主要交通区细菌污染较重,商业区及休闲娱乐区以霉菌污染为主.     

改良离心集菌法检测痰内抗酸杆菌的研究

目的研究改良离心集菌法,测定其是否能使抗酸杆菌的诊断更为安全简便。方法选取传统的抗酸杆菌直接涂片法1＋和1＋以下的阳性标本100例,用改良离心集菌法复检;再配制浓度为10000、5000、1000和100条／mL的痰菌液各100份,分别用直接涂片法和改良离心集菌法检测其检出限和检出率;最后以日常门诊标本1036例分别用两种方法进行临床应用检测和分析。结果100例直接涂片法1＋和1＋以下的阳性标本改为改良离心集菌法复检,结果为4＋有93例、3＋为7例;直接涂片法和改良集菌法的检出限分别为1000和100条／mL;10000、5000、1000和100条／mL的痰菌液用直接涂片法和改良离心集菌法检测其检出率分别为97％、53％、5％、0％和100％、100％、94％、7％。1036例日常标本用直接涂片法和改良集菌法检测的阳性率分别12．74％和16．47％。结论改良离心集菌法的阳性率高于直接涂片法,检出限低于直接涂片法,不但大大改善了实验室和实验人员生物安全,还弥补了直接涂片法中对结核杆菌在痰液中分布不均一性带来的漏检的方法局限性,因此改良离心集菌法是安全、简便的抗酸杆菌实验室值得推广使用的新诊断方法。     

应用PCR技术检测结核分枝杆菌的临床分析

采用聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｎｓｅ Ｃｈｉａｎ Ｒｅａｔｉｏｎ,即ＰＣＲ）技术检测结核分枝杆菌Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ,一年多来共检测了１００例结核（肺、肾结核）患者的痰和尿液标本,结果ＰＣＲ检出阳性率为８１％,对照用储菌涂片抗酸染色法,阳性率为５８％,用常规培养法阳性率为２０％。而对５０例非结核患者的痰和尿液标本的检测,ＰＣＲ法仍有６％的阳性率,而用涂片或常规培     

银杏外种皮提取物对芽孢杆菌生长的影响

用萃取法将银杏外种皮中的银杏酚酸成分提取出来,制成提取液。再用部分提取液乳化成乳化剂。采用液体生长抑制法和平皿培养抑制法分别对土壤中的细菌总量和芽孢杆菌进行抑菌试验。结果显示,在药浓度不断上升的情况下,相对应的细菌的存活率就越低。在液体生长抑制法中,芽孢杆菌菌悬液的OD值随药浓度的升高降低。在平皿培养法中,在药液浓度升高的情况下,土壤中细菌总量及芽孢杆菌总量受抑制程度加强。平皿培养法中用平皿表面涂布法要优于药敏纸片法。     

从临床肺炎死亡树购中分离到致病性大肠埃希菌

目的对6例1月内因肺炎死亡的树鼢采样进行病原菌分离培养鉴定分析。方法解剖死亡树购,利用无菌刀片切开肺组织,用无菌接种环插入肺内采样接种于营养琼脂培养基,另取两份样品进行细菌涂片革兰氏染色和抗酸染色。培养出来的细菌进行进一步分离和菌落生长情况的观察,并经革兰氏染色、抗酸染色、氧化酶试验、生化编码鉴定和9种药敏试验,初步确定树鼢肺部感染的致病菌及其药敏情况。结果样本革兰氏染色见到大量阴性杆菌,抗酸染色结果显示为非结核分枝杆菌,大小约为0．2μm×2～6μm。营养琼脂培养6例样品中均仅见1株旺盛生长的细菌,进一步分离培养经革兰氏染色为阴性杆菌,抗酸染色为非结核分枝杆菌,大小和染色结果与样本涂片相同,经鉴定为致病性大肠埃希菌。药敏试验表明该菌对头孢哌酮,呋喃妥因,氨苄西林,阿米卡星,氧氟沙星,诺氟沙星,磺胺甲嗯唑／甲氧苄定高度敏感;对庆大霉素和青霉素G为低度敏感。结论6例树鼢死亡原因均为细菌性肺炎,病原菌初步鉴定为致病性大肠埃希菌。药敏实验筛选出的药物可为临床治疗树鼢该类病例用药提供指导。     

空气中微生物采样方法的比较

为探讨空气中微生物采样方法的实用性和可靠性,在优选出滤膜法、撞击法的最佳采样条件的基础上,与常用的平皿沉降法进行了比较。实验表明:滤膜法在空气流速为10L/nin,采样时间为3min,膜孔径为0.3μm时采样效果较好;撞击法在空气流速为3L/min,时间为10min,吸收液装量为5ml时效果较好。将三种方法配对实验获取的数据,经统计学处理,P值均大于0.05,三法之间没有明显差异。因此,作者认为,滤膜法和撞击法能准确计算采样体积,较好地反映出空气中微生物的含量,但需特殊仪器,方法较为复杂,使用上受到一定限     

空气中微生物采样方法的比较

为探讨空气中微生物采样方法的实用性和可靠性,在优选出滤膜法、撞击法的最佳采样条件的基础上,与常用的平皿沉降法进行了比较。实验表明:滤膜法在空气流速为10L/min,采样时间为3min,膜孔径为0.3μm时采样效果较好;撞击法在空气流速为3L/min,时间为10min,吸收液装量为5ml时效果较好。将三种方法配对实验获取的数据,经统计学处理,P值均大于0.05,三法之间没有明显差异。因此,作者认为,滤膜法和撞击法能准确计算采样体积,较好地反映出空气中微生物的含量,但需特殊仪器,方法较为复杂,使用上受到一定限     

抗酸菌L型感染与前列腺癌的关系

应用抗酸（ＩＫ）染色和结核菌抗体（ＢＣＧ）免疫组化染色方法,对３０例前列腺癌及２０例前列腺增生症进行检测。结果显示：ＩＫ抗酸染色和ＢＣＧ免疫组化染色阳性率,前列腺癌分别为４３３％、４６７％;前列腺增生症为４５％、５５％,ＩＫ抗酸染色与ＢＣＧ免疫组化染色结果基本一致,两者符合率为９４％。提示结核菌Ｌ型感染与肿瘤的发生和发展可能有一定的关系     

抗酸分枝杆菌和相关菌全细胞枝菌酸甲基酯的薄层分析

用单向薄层层析方法对22种抗酸分枝杆菌及相关细菌的全细胞枝菌酸甲基酯进行了分析。结果表明,人型结核杆菌、牛型结核杆菌、堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌和胃分枝杆菌的图谱特征相似,由a、甲氧基和酮基枝菌酸酯组成,还有两种未知成分I和J。微黄分枝杆菌、草分枝杆菌、鸟分枝杆菌．胞内分枝杆菌、蛙分枝杆菌和不产色分枝杆菌等均由带a、酮基和蜡脂枝菌酸组成。其它菌种的层析图谱各不相同。诺卡氏菌、红球菌和棒杆菌的图谱较分枝杆菌属简单,主要含有a枝菌酸,又因其Rf值不同,可以将这4种菌属区别开。从肺结核患者痰中分离出来的9株标本技菌酸图谱与标准人型结核扦菌相同,这和用标准化规程进行鉴定的结果一致。我们认为单向薄层层析对于抗酸分枝杆菌的分类和鉴定具有一定的意义。     

细菌科间原生质体融合的研究

本文将赖氨酸产生菌——北京棒杆菌1134株进行标记,同时将枯草芽孢杆菌BR151菌株进一步标记后,进行科间原生质体融合的探讨,揭示了科间原生质体融合的可能性。经适宜的条件培养和预处理,再在适宜的条件下,酶解制备亲本株的原生质体,用PEG(MW6000)为聚合剂,经低温短时间处理,将1134衍生株与151衍生株的原生质体进行融合;并在改良的DM_3平皿上加入适量的细胞壁碎片(作引物)与适量的人血清白蛋白制剂,使其再生,结果棒杆菌(在酶解后2.5h.)与枯草芽孢杆菌(酶解后20min)的制备率均已达到99.98％以上,再生率分别达21.3％与90.8％以上。经适温培养48h后,从融合平皿上随机挑出若干个菌落。点种于CM母平皿上,再分别影印于10套选择培养基平皿上,进行鉴定,其融合率达到了3.9×10~(-4)。从菌落形态和菌体形态上可大体分为近1134类型,近151类型和中间类型三种。经连续传代五代后,从融合子中筛选山了几株在摇床上以甜菜糖蜜为原料。产酸水平捉高近一倍的稳定高产融合子。其中Q4413株的产酸率平均达6.56％,10立升小罐发酵产酸率6.52％,糖酸转化率为40.25％,经进一步验证,该菌株的产酸能力和遗传性均是稳定的,为远缘工业微生物育种开辟了新的可行途径。     

新疆喀什维吾尔族结核病患者结核分枝杆菌5个VNTRs基因分型研究

目的:应用多位点数目可变串联重复序列分析(multiple loci VNTR analysis,MLVA)技术,对新疆喀什地区维吾尔族结核病患者结核分枝杆菌临床分离株进行基因分型,探讨5个数目可变串联重复序列(VNTR)基因型种类及其分布。方法:收集结核分枝杆菌,采用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术,结合BioNumerics5.0软件,对其5个VNTR位点进行结果分析。结果:分离出58株结核分枝杆菌,分为4个基因群21个基因型,分别为Ⅰ群占19.1%,含7个基因型;Ⅱ群占3.4%,含2个基因型;Ⅲ群占67.2%,含9个基因型;Ⅳ群占10.3%,含5个基因型。结论:新疆喀什地区维吾尔族结核病患者的结核分枝杆菌存在明显的基因多态性,且存在主要流行菌群。     

应用基因芯片快速检测分枝杆菌

目的:将临床疑似分枝杆菌感染患者的标本用基因芯片方法进行分枝杆菌菌种鉴定,并将基因芯片检测的结果与传统的抗酸染色方法进行对比。方法:采用基因芯片PCR扩增、分子杂交、微阵列芯片扫描的方法检测379例临床疑似标本。结果:基因芯片阳性检出率为16.3%(62/379),涂片抗酸染色法阳性检出率为15.3%(58/379),两者差异无统计学意义(χ2=0.16,P>0.05);62例基因芯片检测阳性患者中有52例为结核分枝杆菌,另有10例为非结核分枝杆菌(其中3例偶然分枝杆菌,1例龟/脓肿分枝杆菌,1例堪萨斯分枝杆菌,4例浅黄分枝杆菌,1例海分枝杆菌)。结论:结合临床病例分析结果显示,基因芯片检测对鉴别结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌分型具有快速、特异性高的特点,在分枝杆菌感染的早期诊断和治疗上具有重要的临床价值,值得推广和应用。     

从新生儿血液中分离一株发酵乳糖的鼠伤寒沙门氏菌的报告

沙门氏菌一般不发酵乳糖,但有发酵乳糖的变种。我院于90年3月由新生儿血液中分离出1株发酵乳糖的鼠伤寒沙门氏菌。现报告如下。 1.一般特性:该菌为革兰氏阴性杆菌。在羊血琼脂平皿上菌落2mm大小,暗灰色,半透明、光滑、湿润、边缘整齐。在SS琼脂、麦康凯琼脂平皿上菌落无明显差别,呈淡红色。