幽门螺杆菌感染细胞模型的建立及感染相关microRNAs的筛选鉴定

目的：建立稳定的幽门螺杆菌（H.pylori）感染人胃上皮细胞模型;筛选并鉴定H.pylori感染相关microRNAs（miRNAs）的表达,为深入研究感染相关miRNAs的调控作用机制奠定基础。方法：将H.pylori标准株按MOI=100：1感染人胃上皮细胞,通过检测炎性细胞因子及炎症反应关键酶的表达综合评价感染模型;采用博奥公司miRNAs V3.0芯片分析细胞感染前后miRNAs表达谱变化,运用实时定量PCR技术和Northern杂交对表达显著差异的miRNAs进行分析鉴定。结果：H.pylori感染细胞24 h后,细胞分泌促炎细胞因子IL-8显著升高（P〈0.01）;启动炎症反应的关键酶COX-2的表达明显增加。芯片数据显示：H.pylori感染引起超过2倍显著差异表达的miRNAs包括：表达上调的PREDICTED-MIR191、miR-155、miR-92b、miR-30b、miR-146a、miR-16等,和表达降低的miR-181b、miR-324。实时定量PCR和Northern杂交结果显示感染相关miR-155和miR-146a在H.pylori感染细胞模型中表达均显著增加（P〈0.01）。结论：miR-155和miR-146a在感染细胞模型中的表达增加提示二者可能参与H.pylori感染的免疫调控过程。     

幽门螺杆菌感染诱导microRNA-146a表达的机制研究

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)感染引起人胃上皮细胞microRNA-146a(miR-146a)上调的分子机制。方法:分别用H.pylori重组蛋白、全菌蛋白、培养上清、感染相关炎性因子(IL-8、TNF-α、IL-1β)以及TLR配体刺激人胃上皮细胞,检测细胞miR-146a的表达;通过生物信息学软件预测和荧光素酶实验鉴定miR-146a启动子,分析诱导表达的相关信号通路。结果:除H.pylori感染相关炎性因子IL-8、TNF-α、IL-1β能够明显诱导miR-146a表达上调(P<0.01)外,其他刺激因素均不能诱导miR-146a的显著表达;当采用RNAi技术将IL-8、TNF-α、IL-1β分别沉默,检测H.pylori诱导miR-146a表达时,各沉默组与对照组均无显著差异。软件预测显示miR-146a启动子序列中含有多个NF-κB结合位点;H.pylori能够显著增加miR-146a启动子荧光素酶报告载体的相对荧光素酶值;当启动子序列中的NF-κB结合位点发生突变,其相对荧光素酶比值显著降低(P<0.05)。结论:H.pylori感染相关炎性因子IL-8、TNF-α、IL-1β能够诱导miR-146a表达明显上调;NF-κB信号通路在H.pylori感染诱导miR-146a的表达中发挥关键作用。     

幽门螺杆菌感染诱导microRNA-146a表达的机制研究

目的：探讨幽门螺杆菌（H.pylori）感染引起人胃上皮细胞microRNA-146a（miR-146a）上调的分子机制。方法：分别用H.pylori重组蛋白、全菌蛋白、培养上清、感染相关炎性因子（IL-8、TNF-α、IL-1β）以及TLR配体刺激人胃上皮细胞,检测细胞miR-146a的表达;通过生物信息学软件预测和荧光素酶实验鉴定miR-146a启动子,分析诱导表达的相关信号通路。结果：除H.pylori感染相关炎性因子IL-8、TNF-α、IL-1β能够明显诱导miR-146a表达上调（P〈0.01）外,其他刺激因素均不能诱导miR-146a的显著表达;当采用RNAi技术将IL-8、TNF-α、IL-1β分别沉默,检测H.pylori诱导miR-146a表达时,各沉默组与对照组均无显著差异。软件预测显示miR-146a启动子序列中含有多个NF-κB结合位点;H.pylori能够显著增加miR-146a启动子荧光素酶报告载体的相对荧光素酶值;当启动子序列中的NF-κB结合位点发生突变,其相对荧光素酶比值显著降低（P〈0.05）。结论：H.pylori感染相关炎性因子IL-8、TNF-α、IL-1β能够诱导miR-146a表达明显上调;NF-κB信号通路在H.pylori感染诱导miR-146a的表达中发挥关键作用。     

幽门螺杆菌感染新型原代人胃上皮细胞模型的建立

目的 培养三维(3D)人胃黏膜上皮类器官,转为二维(2D)原代胃黏膜细胞培养,并建成人2D原代胃上皮细胞的幽门螺杆菌感染模型。 方法 (1)从正常人胃上皮组织中分离胃腺,在含有多种生长调节和凋亡抑制等混合因子的培养基中,依附于基质胶而培养成3D类器官;(2)利用免疫荧光技术鉴定胃上皮类器官的相关分子标记;(3)研究正常原代胃上皮细胞被幽门螺杆菌感染后的形态学变化,利用免疫印迹技术鉴定幽门螺杆菌感染相关蛋白的表达水平。 结果 成功培养出可长期传代的人胃上皮3D类器官,具有典型的人胃黏膜上皮分子标记。而且3D类器官转为2D平面培养的原代胃上皮细胞,可作为幽门螺杆菌的体外原代细胞感染模型。 结论 3D胃上皮类器官,可作为2D原代胃上皮细胞的持久来源,为研究幽门螺杆菌感染人体胃上皮的分子机制带来个体化的新模型。     

幽门螺杆菌感染与细胞自噬的研究进展

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H. pylori）是一种革兰阴性微需氧病原菌,也是定植于人类胃黏膜上皮中最特异的一种致病菌。它与人消化性溃疡、慢性胃炎、胃癌及胃黏膜相关组织淋巴瘤（MALT）等疾病密切相关。此后又发现H. pylori可能是一种兼性胞内菌,该菌可能通过自噬在胃上皮细胞和巨噬细胞中得以生存、繁殖并引起慢性持续性感染。本文根据近年发表的自噬相关文献,对H. pylori感染不同细胞后自噬对其存活的影响以及H. pylori不同配体引起的自噬调节作一综述。     

幽门螺杆菌感染的诊断和治疗

本文阐述幽门螺杆菌（ＨＰ）在消化性溃疡病中的作用以及ＨＰ感染的诊断和治疗,着重介绍清除ＨＰ的一些药物及治疗方案。     

幽门螺杆菌急性感染对胃上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)急性感染对GES 1细胞凋亡的影响,揭示H. pylori引起GES 1细胞凋亡变化的分子机制。 方法 将H. pylori临床分离株SBK与胃上皮细胞GES 1按不同比例(感染复数MOI分别为50∶1和100∶1)共培养24 h,建立H. pylori急性感染模型。采用流式细胞仪分析GES 1的凋亡,通过Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl xL、Bcl 2、Bax、Caspase 3和NF κB p65的表达。经H. pylori感染的GES 1细胞为处理组细胞,未经H. pylori感染的GES 1细胞即为对照细胞。使用SPSS 21.0软件对结果进行统计学分析。 结果 GES 1细胞经H. pylori处理24 h后,与对照细胞相比,MOI为50∶1(t=11.040,P结论 H. pylori急性感染通过改变线粒体途径中凋亡相关蛋白Bax、Bcl 2及Bcl xL的表达促进GES 1细胞凋亡,且GES 1细胞的凋亡程度与H. pylori的感染复数有关。     

幽门螺杆菌动物感染模型的建立及较适感染剂量的确定

尝试在SPF级KM鼠胃内定植HP ,并确定其定植的较适感染菌量。采用幽门螺杆菌 (HelicobacterPylori,HP)SydneyStrain 1株 (简称SS1)攻击 ,连续 5次 ,分别于最后一次感染后第 2、4、8、12、16、2 6周处死小鼠 ,取胃粘膜组织分别进行病理切片 ,尿酶试验、涂片镜检和HP分离培养。结果　试验组动物HP定植率可达 10 0 % ,对照组未有定植 ,感染量越大越易定植 ,定植菌量随时间的延长有增加的趋势 ,定植时间可达 2 6周 ,12周龄小鼠感染的较适菌量 5× 10 8。病理组织学检查显示 ,小鼠有轻至中度浅表性胃炎改变 ,随时间延长有加重趋势 ,对照组未见炎症反应。HPSS1株能在SPF级KM鼠胃内较长期定植 ,并能引起胃部炎性病变     

幽门螺杆菌感染的动物模型及实际应用

幽门螺杆菌已被公认为慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等胃癌的重要病因,但其 致病与免疫机制等多问题的深入解决尚有 待于动物模型的发展。本文好在小猪、犬、猴、裸鼠胃中建立的ＨＰＢ感染模型,或用ＨＰ近似菌如Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｆｅｌｉｓ（ＨＦ）或Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｍｕｓｔｅｌａｓ（ＨＭ）在小鼠、雪貂胃中建立的拟ＨＰ感染模型,并介绍了它们在观察抗ＨＰ疗法疗效、ＨＰ及其近似菌致病及免疫机制研究中的应用     

胃癌组织中幽门螺杆菌L型感染与淋巴管形成关系的研究

目的 研究胃癌组织中D2-40、LYVE-1标记的微淋巴管密度(LVD)、血管内皮生长因子受体(VEGFR-3)表达与幽门螺杆菌L型(helicobacter pylori L-form,Hp-L型)感染之间的关系.方法 应用革兰染色和免疫组化SP法检测80例胃癌组织和25例对照组的Hp-L型感染,同时用免疫组化SP法检测上述组织的LVD值和VEGFR-3的表达,分析Hp-L型与LVD以及VEGFR-3表达的关系结果 胃癌组织中革兰染色L型检出阳性率为67.5％;免疫组化Hp-L型抗原表达阳性率为65％,两种方法检测同时阳性的病例50例,占62.5％.胃癌组的Hp-L型阳性率、LVD及VEGFR-3表达阳性率均高于对照组(P＜0.01);胃癌组中Hp-L阳性组的LVD值和VEGFR-3表达阳性率高于Hp-L阴性组.LVD与胃癌淋巴结转移具有一定关系.结论 Hp-L型感染与胃癌的发生、发展密切相关,Hp-L型可能是肿瘤淋巴管生成的重要促进因子,影响胃癌的侵袭和转移.     

胃癌组织中幽门螺杆菌L型感染及骨桥蛋白检测的意义

目的通过检测胃癌组织中幽门螺杆菌L(HP-L)型感染以及OPN的表达情况,探讨Hp-L型感染对胃癌侵袭、转移生物学行为的影响及可能机制。方法①应用革兰染色及免疫组化(SP)法检测120例胃癌组织中的Hp-L型感染情况;②应用免疫组化(SP)法检测胃癌组织中的OPN的表达。分析Hp-L型感染与OPN表达的关系以及和临床病理因素之间的关系。结果①120例胃癌组织中有88例革兰染色检出Hp-L型,其阳性率为73.3%(88/120);免疫组化Hp-L型抗原表达阳性率为70.8%(85/120),革兰染色Hp-L型检出和Hp-L型抗原表达同时阳性的病例有82例(两者同时阳性者为Hp-L型阳性),其阳性率为68.3%(82/120)。②胃癌组织中Hp-L型阳性组的OPN表达阳性率分别为70.73%(58/82),高于Hp-L型阴性组表达率,且有统计学意义(P<0.005)。经四格表资料χ2检验,胃癌组中Hp-L型阳性与OPN阳性表达呈正相关(r=0.27,P<0.001)。③胃癌中Hp-L型阳性与肿瘤的大小、癌细胞的血管侵袭、浸润深度及淋巴结转移具有相关性(P<0.001-P<0.05)。结论 Hp-L型感染是引起胃癌...     

以左氧氟沙星为基础的三联疗法根除幽门螺杆菌的疗效分析

目的：本研究的目的是评估以左氧氟沙星为基础的三联疗法根除幽门螺杆菌的疗效分析。方法：112例通过快速尿素酶试验和13C．尿素呼气试验证实感染了幽门螺杆菌的非溃疡性消化不良的患者入组本实验,患者被随机分为7d组（54例）和14d组（58例）,接受包括雷贝拉唑Oomgb-i．d．）加左氧氟沙星（500mgq．d．）和阿莫西林（1000mgb．i．d．）的治疗,并进行6周的随访,治疗结束至少4周后通过13C．尿素呼气试验确定根除率。结果：幽门螺杆菌总的根除率为83．9％（ITT）和88．7％（PP）。7d组51名患者完成了治疗。其根除率为75．9％（ITT）、80．4％（PP）,而14d组的根除率达到91．4％（ITT）、96．4％（PP）,P〈0．05。结论：包含雷贝拉唑、左氧氟沙星和阿莫西林的三联疗法对于根除幽门螺杆菌是有效的,但相同方案的14d疗法疗效明显优于7d疗法。     

以左氧氟沙星为基础的三联疗法根除幽门螺杆菌的疗效分析

目的:本研究的目的是评估以左氧氟沙星为基础的三联疗法根除幽门螺杆菌的疗效分析。方法:112例通过快速尿素酶试验和13C-尿素呼气试验证实感染了幽门螺杆菌的非溃疡性消化不良的患者入组本实验,患者被随机分为7d组(54例)和14d组(58例),接受包括雷贝拉唑(10mgb.i.d.)加左氧氟沙星(500mgq.d.)和阿莫西林(1000mgb.i.d.)的治疗,并进行6周的随访,治疗结束至少4周后通过13C-尿素呼气试验确定根除率。结果:幽门螺杆菌总的根除率为83.9%(ITT)和88.7%(PP)。7d组51名患者完成了治疗,其根除率为75.9%(ITT)、80.4%(PP),而14d组的根除率达到91.4%(ITT)、96.4%(PP),P<0.05。结论:包含雷贝拉唑、左氧氟沙星和阿莫西林的三联疗法对于根除幽门螺杆菌是有效的,但相同方案的14d疗法疗效明显优于7d疗法。     

Gastric juice neopterin in Helicobacter pylori infection

Abstract Neopterin, a pteridine compound produced by macrophages activated by interferon-gamma, is widely used to assess the activation of cellular immunity. An elevation in serum or urinary neopterin reflects immune activation in many different disorders, including viral infections, cancer, autoimmune diseases or acute myocardial infarction, but less attention has been paid to neopterin concentration in other biological fluids. The aim of the present study was to examine neopterin concentration in gastric juice. An association with the presence of Helicobacter pylori , a bacterium linked to the most common disorders of upper digestive tract, was also investigated. Gastric juice was obtained at endoscopy from 61 patients. Neopterin was determined by a radioimmunoassay and the presence of H. pylori was examined by urease test. The macroscopic finding of bile in gastric juice was associated with significantly higher neopterin levels compared to patients where no bile was noted (15.5 ± 15.6 vs. 2.1 ± 3.0 nmol/l, P < 0.001). However, similar concentrations were observed in the H. pylori positive and H. pylori negative patients (7.6 ± 12.0 vs. 11.1 ± 14.9 nmol/l). Even in the absence of macroscopic bile contamination, no significant difference could be found between the infected and uninfected patients (2.3 ± 3.2 vs. 1.3 ± 1.9 nmol/l), and the patients with duodenal ulcer and normal findings (3.8 ± 4.6 vs 1.6 ± 1.9 nmol/l). The contamination of gastric juice with bile represents the limitation for the use of neopterin as a marker of immune activation in the gastric mucosa. Rather than an index of immune activation, gastric juice neopterin concentration represents a marker of duodenogastric reflux.     

FAK在胃癌组织中的表达及与Hp-L型感染的关系

目的探讨局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)在胃癌组织中的表达意义及与幽门螺杆菌L型(Helicobacter pylori-L,Hp-L)感染的关系。方法 (1)应用免疫组织化学Elivision法检测120例胃癌组织及40例切缘正常胃粘膜组织(对照组)中FAK蛋白的表达情况,采用免疫组织化学和革兰染色法检测Hp-L型的感染情况;(2)采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测40例新鲜胃癌组织及对应切缘正常胃黏膜组织(对照组)中FAK的mRNA表达。结果胃癌组FAK蛋白的表达阳性率高于对照组(P0.05),且FAK的高表达与分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(P0.05),与年龄、性别、肿瘤大小无关(P0.05);RT-PCR显示,肿瘤组织、远端正常对照组织的FAK表达量差异明显(P0.01)。胃癌组Hp-L型检出率72.5%(87/120)与对照组37.5%(15/40)有显著性差异(P0.05),与免疫组化Hp-L型抗原表达率65.0%(78/120)无显著性差异(P0.05),Hp-L检出阳性率为69.2%(83/120);胃癌组中Hp-L型感染阳性组的FAK表达阳性率高于Hp-L型阴性组(P0.05),且Hp-L型阳性率和FAK蛋白的表达呈正相关(r=0.291,P0.05)。结论FAK蛋白和mRNA在胃癌中的表达增加,且与胃癌的浸润、转移相关,其机制可能与幽门螺杆菌L型(Hp-L型)感染有关。