姜老师信箱

蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我对蛋白纯化和大规模生产使用的纯化技术很有兴趣,有几个问题想向您请教:1.蛋白质复合物在生命体中是可溶状态吗?如果提取出体外,分子量较大的蛋白复合物(大于5000kDa)能以溶解状态存在吗?如果是胶体形式,会沉淀下来还是类似于悬浮液?(假定在pH7的水溶液中)     

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蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是刚结束的"第13期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"学员,想向您请教一下我在实验中遇到的问题。我的色谱图中可以明显看到几个相对独立的峰,但是在SDS-PAGE图中,150 kDa附近自始至终都出现条带;并且Fr.61-130和Fr.131-172两个峰的蛋白组成并没有太大差别,为什么还会分成两个不同的紫外吸收峰呢?     

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<正>蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是"第十七期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"学员,将要进行MBP融合蛋白纯化,向您请教几个问题:(1)哪家公司的直链淀粉树脂好?(2)纯化过程中有什么需要特别注意的问题?(3)Tris-HCl缓冲液和磷酸盐缓冲液哪个好?pH值影响大吗?为什么不同标签用不同裂解缓冲液?非常感谢!姜老师答:学员你好。     

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<正>蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是"蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员,在纯化一个糖蛋白,使用的是单抗与CNBr结合后的亲和层析,洗脱是0.1M甘氨酸,盐酸调节pH至2.5,样品用含有巯基乙醇的5×上样缓冲液煮沸十分钟,但结果显示分子量增加了很多,由36KD左右到了60KD。想向您请教原因。非常感谢!姜老师答:     

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蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我的主要工作之一是分离蛋白,尤其是未知蛋白,目前我遇到了一个问题想向您请教。我分离到了一个蛋白,无论从分离过程到回收重复都没有问题,但在鉴定上遇到了困难。     

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<正>蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是第十二期蛋白质分离纯化技术专题研讨班的学员,向您请教渗透冲击法破菌的问题。我把E.coli培养到OD 0.5左右,加40%蔗糖冰上10min,然后离心直接加与原箘液1,2,3,4倍体积的蒸馏水,放置观察,一直没有观察到细菌破坏。我们的蛋白是在胞浆里面的,也看了一些文献,似乎渗透冲击更适用于表达在细胞膜和细胞壁之间的周     

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蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是您"蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员。我们准备用溴化氰活化介质偶联α-银环蛇毒素装柱,溴化氰活化的琼脂糖4B是某知名公司的,空柱还没定,说明书上推荐的是HR 16/10。请问这款柱子我们可以用吗?急切盼望您的回复,谢谢!     

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蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是刚结束的"第13期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"学员,向您请教关于乳酸菌发酵液中分离小分子生物活性物质的问题。活性物质目前未知,初步猜测可能为环二肽,手性未知。我们合成后未检测到生物活性,所以需要重新进行分离纯化。     

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蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我想向您请教关于怎样利用双水相萃取重组蛋白的问题。我查了些资料,但对以下问题还不是很清楚:1.应该选取什么浓度范围的体系组合来从发酵的     

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蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是您蛋白质研讨班的学员,最近在纯化方面遇到了一点问题,想向您请教。我在做第一步纯化时,目的蛋白的活性总是很好,无论是用阴阳离子柱还是凝胶柱,都能获得很好的活性洗脱组分。但是到了第二步纯化,不管是离     

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蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是"第13期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员,在上课时听您讲过用Protein A纯化单克隆抗体的效果并不完美,请问这是不是由于纯化后抗体容易形成二聚体或多聚体,而导致活性下降?我还想请教一下:1.如果只     

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蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我近期在做蛋白纯化的中试生产,有几个问题想请教一下:1.我现在处理的菌量在50-100g,500ml-1000ml A液重悬,用高压均质机破碎,离心过滤后上His亲和柱(GE公司     

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蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是第15期蛋白质分离纯化技术研讨班的学员,目前用渗透压冲击法提取细菌胞内酶,在优化条件时碰到了一些问题,实验步骤和部分结果请见附件(略)。希望得到您的回复,谢谢!姜老师答:你好!很高兴看到你发来的实验报告,但你没有完全按照我课程上讲的做:     

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蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是"第14期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员,现在正在做有关茶叶、苹果等多酚氧化酶(PPO)分离纯化的实验,目的是为了得到PPO的纯品。目前我遇到一些困难,希望得到您的指点。我分离纯化PPO是通过匀浆、硫酸铵沉淀、DE-52阴离子交换柱、冻干进行的,我的问题如下:1.硫酸铵沉淀后的酶液,透析多久较合适?2.将酶液上样后,是     

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蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是刚结束的"第13期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"学员,您的授课让我获益良多。学习期间我曾向您请教过用NHS柱偶联抗原来纯化多克隆抗体的问题。关于偶联抗原蛋白量的计算,NHS柱商品说明书上显示配体密度为16-23μmol/ml干介质(ligand density:16-23μmol/ml drained medium),我使用的抗原分子量约为     

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蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是蛋白质研讨班的学员,实验中有个问题向您请教。用硫酸铵沉淀镍柱亲和纯化的蛋白溶液后,用20mM PBS(pH6.8)复溶,接着用G25 5ml预装柱在AKTA纯化仪上脱盐,缓冲液为20mM PBS(pH6.8),出现了两个几乎等高的UV峰。第一个峰先于电导峰,第二个峰与电导峰重叠,SDS-PAGE显示两个峰均为目的蛋白(57kDa),而且4℃放置过夜之后,两个峰对应的溶液变浑浊。请您指点!