三种分离自冬虫夏草真菌及培养条件

对采自青海玉树、青海果洛和云南迪庆的冬虫夏草鲜品进行虫生真菌的分离、纯化,获得3种生长形态不同的真菌QH 2019、GL 2019和YN 2019.通过形态学及分子鉴定,菌株QH 2019为蝙蝠蛾拟青霉Samsoniella hepiali,菌株GL 2019为粉棒束孢Isaria farinosa,菌株YN 2019...     

分离自北京水系的疫霉属三个中国新记录种

疫霉是一类世界性分布的卵菌,目前广泛承认有120种,其中很多存在于湖泊、溪流等水系中。本研究通过叶饵法从北京水系中诱集疫霉,共分离到疫霉菌株463株,利用Single-strand conformation polymorphism(SSCP)进行分析,筛选出不同基因型的代表菌株。依据形态学特征及β-tubulin基因序列和ITS序列对这些菌株进行种类鉴定,发现3种国内新记录种,分别为节水疫霉Phytophthora gonapodyides、北方疫霉Phytophthora borealis和波斯疫霉Phytophthora parsiana。     

四种嗜热真菌的分离与鉴定

目的:在对嗜热真菌的资源调查中,分离到嗜热真菌20株。方法:通过形态学比较研究并结合分子分析方法。结果:鉴定出嗜热真菌4种,即杜邦青霉Penicillium dupontii、疏绵状嗜热丝孢菌Thermomyceslanuginosus、嗜热子囊菌Thermoascus aurantiacus、嗜热革节孢Scytalidium thermophilum。此外,还分离到耐热真菌1种,鉴定为不规则头梗霉Cephaliophora irregularis,为中国新记录种。结论:这些研究结果新增了嗜热真菌在中国的分布记载,丰富了我国西南地区嗜热真菌的菌种资源库,另外对分离获得的嗜热真菌进行木聚糖酶活性测试,发现嗜热子囊菌为高产木聚糖酶活力的菌株。     

分离自青海湖可培养耐盐真菌的多样性研究

青海湖位于青藏高原东北部,属于典型的高原盐湖沉积环境。作者以常规的分离培养方法对青海湖中的耐盐真菌多样性进行了研究。从黑马河、耳海和尕海共分离得到617株耐盐真菌,结合形态学和分子生物学的方法将菌株鉴定到18个属和45个种。子囊菌的菌株数比接合菌和担子菌多,枝孢菌和青霉菌为优势耐盐真菌。在这45种耐盐真菌中,轻度、中度和极端嗜盐真菌分别有19、25和1种。分离自黑马河地区的耐盐真菌,其物种丰富度指数Ma（3.12）、多样性指数H′（1.11）和均匀度指数J（0.267）均比耳海和尕海的高。从1.5%浓度下     

湛江红树林滩涂可培养真菌种群多样性分析

【目的】明确湛江地区红树林滩涂海洋真菌的种类及其分布,为海洋真菌的开发利用研究奠定基础。【方法】运用稀释平板法从湛江市高桥及特呈岛红树林滩涂不同的潮位带(低、中、高)和不同树种(白骨壤、桐花树、木榄、红海榄)采集淤泥样品550份,采用真菌形态学和ITS序列分析技术进行多样性研究【。结果】分离获得海洋真菌274株,共鉴定出19属39种真菌,以曲霉属Aspergillus、青霉属Penicillium和木霉属Trichoderma真菌分离频率高,为湛江红树林滩涂优势真菌种类,尤其在中潮位带真菌种类最多。此外,分离获得真菌Talaromyces helicus,为中国新记录种。【结论】湛江红树林滩涂海洋真菌的种类十分丰富,具有潜在的开发和利用前景。     

白木香内生真菌的分离及分子鉴定

对采自广东省信宜市的白木香进行了内生真菌分离培养,共获得50个菌株,通过rDNA中内转录间隔区(ITS)序列鉴定其为20个种,其中确定至种名的有7属8种,仅确定至属名的有8种,不能确定种属的有4种,其中A20菌株(Fimetariella rabenhorstii)为国内首次报道。刺盘孢菌(Colletotrichum)共分离到17株,占分离总数的34%,为白木香优势种群;镰刀菌(Fusarium)共分离到11株,是结香部位的优势种群。白木香内生真菌分布部位的专一性不明显,茎中分离的数量及种类最多,叶中最少;5年龄内生真菌的多样性较好,10月龄的多样性较低。     

芦荟植物内生真菌的研究 Ⅰ．内生真菌的分离及鉴定

从中华芦荟 [AloeveraL .varChinese(HawBerg) ]、元江芦荟 [A .yuanjiangensisXiong&Zhengsp .nov .(暂拟 ) ]及库拉索芦荟 (A .barbadsisMill.)的根、叶、花柄、花中分离获得内生真菌共 88株 ,经形态观察分类鉴定为 4个目、3个科、2 2个属。且查明 ,芦荟不同种类不同部位微生物的数量、分布、种群及其组成存在有差异。     

红树林生态系统中不同生境不同深度土壤的可培养真菌的多样性

【目的】了解八门湾红树林生态系统中不同生境(潮间带、海洋到红树区的过渡带、海桑红树区)和不同深度土壤的可培养真菌的多样性。【方法】采用稀释涂布平板法分离土壤中的真菌,利用形态学观察和ITS rDNA序列分析技术研究可培养真菌的表观和遗传多样性。【结果】从八门湾红树林生态系统的3个不同生境中分离到257株真菌,分别属于21属28种,其中青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)和木霉属(Trichoderma)为优势类群。来自不同生境或者同一生境不同采样深度的土壤真菌种类组成不同,并且有些真菌类群只出现在特定的样品中。从空间角度看,红树区土壤样品的真菌多样性高于其他两个生境的土壤样品;从垂直角度看,潮间带和过渡带的表层土壤样品的真菌多样性高于深层土壤样品,而红树区的深层土壤样品真菌多样性高于表层土壤样品。【结论】八门湾红树林生态系统中的可培养真菌资源丰富,种类多样性较高,但不同生境或不同深度的可培养真菌分布存在较大的差异。这些结果揭示了红树林土壤中可培养真菌的生态分布特点,也为红树林真菌资源的开发利用提供了基础的背景资料。     

漳江口红树林沉积物可培养真菌多样性

红树林真菌由于其独特的生态特征、多样性特点和丰富的新型生物活性代谢产物而引起了广泛的关注。本文以漳江口红树林保护区4个采样点的沉积物为研究对象,采用8种筛选培养基（RBM、PDA、CDA、Martin、YM、SDA、ISP2和R2A）分离可培养真菌,根据ITS序列分析对其进行物种鉴定,并利用多样性指数分析评价不同采样点真菌群落的差异。结果共分离到274株真菌,隶属于2门12纲23目39科52属,其中优势属为枝顶孢属（Acremonium）（20.8%）和青霉属（Penicillium）（11.3%）,其次是枝孢属（Cladosporium）（7.3%）和帚枝霉属（Sarocladium）（7.3%）。8种筛选培养基中,分离出真菌种属类型最丰富的培养基是RBM,其次是PDA。根据Shannon-Wiener多样性指数（H′）、Simpson优势度指数（D）、Magalef丰富度指数（R）和Pielou均匀度指数（J）的分析结果,在属的水平上,距海洋的位置越近,真菌的群落多样性越高,真菌分布越均匀。     

辽宁地区药用植物根际土壤真菌多样性的研究

作者于2007和2008年的5-10月间在辽宁省的丹东、凤城、清原、桓仁等药材产区采集土壤样品200余份,通过采用稀释平板法和土壤颗粒平板法进行土壤真菌的分离和培养,共分离和鉴定出27属54种真菌,其中接合菌2属3种、子囊菌1属1种、无性型真菌24属50种。分离到的部分真菌种类是重要的药用植物病原菌,如Cylindrocarpon destructans、Fusarium oxysporum和F.solani。研究发现,Penicillium paxilli、P.expansum、Trichoderma atroviride及T.viride的分离频率最高,是辽宁省4个调查地区药用植物根际土壤真菌的优势菌群。     

甘肃省冬虫夏草遗传多样性的ISSR分析

对采自甘肃省3个冬虫夏草主产区域6个具有代表性地方的18个样本进行ISSR分析。15条ISSR引物共扩增得到条带清晰并呈多态性的95条谱带,每一引物扩增获得的ISSR条带数在3－9条之间,扩增片段集中在300－3,000bp。基于遗传相似性系数（GS）、不加权成对群算术平均法（UPGMA）构建的系统树分析,可以看出：分离自同一株虫草上不同部位的样本无显著遗传差异;同一地点样本间的遗传分化较小;不同地域的样本间存在着较大的遗传分化,遗传多样性较丰富。同时6个地方的冬虫夏草明显地分为3个区域,而在同一区域不同     

冬虫夏草的质量和功能研究进展

冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis是名贵的药用与食用菌,具有抗氧化、抗细菌、抗肿瘤及免疫调节等多种功能。冬虫夏草的正确鉴别、质量和功能评价有助于这一珍贵资源的研发。本文从如下方面综述冬虫夏草在质量和功能方面的研究进展:1)性状特征和真假鉴别;2)主要成分;3)药效功能;4)质量评价。     

应用ISSR技术分析不同分离方法获得的冬虫夏草菌株的遗传多样性

从60个引物中筛选出7个扩增条带清晰且多态性好的ISSR引物,并摸索合适的PCR反应条件,用于40株冬虫夏草的无性型——中国被毛孢菌株的PCR反应,共得到62条带,其中多态性条带38条,多态性百分率仅为61.29%,遗传相似系数范围在0.78¹.00之间。非加权配对算术平均法(UPGMA)聚类分析的结果表明:40株中冬虫夏草无性型菌株并没有完全按照不同的分离方法聚为3个类型;单子囊孢子分离法获得的菌株,明显区别于其他菌株而单独聚为一类,其他菌株则混合聚类。     

冬虫夏草的研究进展、现存问题与研究展望

冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis是传统的名贵中药材,具有非常重要的食用与药用价值。本文从天然冬虫夏草的地理分布与形态特征,冬虫夏草菌的分离、分类、遗传与进化、大量培养,寄主昆虫蝠蛾的分类、分布、生物学与人工饲养,冬虫夏草的化学成分与药效作用等方面综述了冬虫夏草的研究进展,分析了冬虫夏草研究现存的问题,并展望未来的研究方向。     

糖类对冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis芽生孢子产量及毒力的影响

冬虫夏草Chinese cordyceps是食药两用的传统名贵资源。其人工培养需要冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis的优质芽生孢子。为获得高产量及高感染力芽生孢子,本研究测定不同糖类培养基对冬虫夏草菌芽生孢子产量及毒力（对小金蝠蛾Thitarodes xiaojinensis幼虫的存活率、携菌率和僵虫率）的影响。两个冬虫夏草菌株于含6种糖（葡萄糖、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖）的液体培养基中分别培养30、45和60 d,计数芽生孢子产量并将收集的孢子注射感染两个品系的小金蝠蛾6龄幼虫,置于不同温度下观察幼虫的存活率、携菌率及僵虫率。结果显示：不同糖源培养基中芽生孢子的产量差异显著,其中含麦芽糖培养基中芽生孢子产量最高;注射菌株和幼虫品系对被注射幼虫的存活率无显著差异;不同糖源培养基获得的芽生孢子对蝠蛾幼虫的存活率无显著差异,对携菌率和僵虫率产生影响;以含麦芽糖为糖源的培养基、芽生孢子培养时间显著影响被注射幼虫的存活率与僵虫率,其中培养30 d的冬虫夏草菌所注射的幼虫的存活率、僵虫率显著高于60 d的;温度也显著影响被注射幼虫的存活率、僵虫率,10℃的幼虫存活率和僵虫率显著高于14℃、18℃的。研究结果为培养优质冬虫夏草芽生孢子,提高被侵染蝙蝠蛾幼虫僵虫率提供了参考。     

培养基及培养条件对冬虫夏草菌固体发酵产分生孢子的影响

为获得冬虫夏草菌固体发酵产分生孢子的最优工艺,以野生分离的冬虫夏草菌为材料,对其固体发酵产分生孢子的培养基及培养条件进行了研究。试验结果表明：泥炭土为最佳基础培养基,该培养基中冬虫夏草菌气生菌丝生长一般,但产分生孢子最多,可达4.2×10³个/g;泥炭土培养基中添加0.1‰ IAA（吲哚乙酸）、0.1‰ IBA（吲哚丁酸）和0.1‰ NAA（萘乙酸）能促进冬虫夏草菌气生菌丝的生长和分生孢子的产生,其分生孢子达8.1×10³个/g;该基础培养基中,冬虫夏草菌于18℃培养30d后,在10℃、相对湿度45%、蓝光照射进行诱导,分生孢子可达1.0×10⁴个/g。本研究建立了一种大量获取冬虫夏草菌分生孢子的方法,为冬虫夏草繁育奠定了基础。     

Molecular characterization of p53 mutations in primary and secondary liver tumors: diagnostic and therapeutic perspectives

p53 is one of the most mutated genes in human cancer. We have performed the molecular characterization of p53 and have searched for correlations with etiological factors and clinical parameters in primary and secondary liver tumors. A systematic study was carried out, innovative in many respects, to determine the mutational pattern of all 11 exons of p53 and analysis was extended also to exons 1–4 and 9–11 and the exon/intron junctions. Our analyses were performed on case histories of 114 patients from the European area and highlighted p53 mutation patterns different from those reported in the literature for the same tumors. In our case history, different tumors of the same organ showed a different frequency and distribution of mutations. In analyzed tumor types, gene status was a prognostic indicator of survival because patients undergoing liver resection without mutated p53 had a more favorable prognosis than mutated patients. This suggests p53 molecular diagnosis could become a further criterion in the decision for surgery and possible therapies. We describe the ideal conditions for polymerase chain reaction (PCR), single-strand conformation polymorphism (SSCP), and direct sequencing, which we have set in order to optimize yields, sensitivity, and time of what might become a massive molecular screening.     

糖类和植物生长调节剂对冬虫夏草子实体人工培养的影响

为提高人工培养冬虫夏草子实体的产量,需要优化其培养参数。本实验测定培养基中糖类和植物生长调节剂对冬虫夏草子实体产量的影响。于大米小麦作为主要组分的培养基中接入冬虫夏草菌,在9~13℃下培养60 d,转入4℃培养。葡萄糖培养基中,冬虫夏草子实体干重是麦芽糖培养基中的7.6倍,出现菌丝和收获子实体的时间也比麦芽糖培养基中至少快2个月;蔗糖培养基中未获得子实体。不同种类和浓度植物生长调节剂对冬虫夏草子实体产量影响显著。于菌液中加入环磷腺苷、三十烷醇和玉米素的培养瓶均未发现菌丝生长。加入100μg/mL 6-苄氨基腺嘌呤的培养瓶可见菌丝生长,但未见原基分化。转入4℃下6个月后,与对照相比,加入100μg/mL吲哚乙酸、1μg/mL和100μg/mL吲哚丁酸、10μg/mL赤霉素、1μg/mL和10μg/mL乙烯利,以及1μg/mL 2,4-D的培养瓶中子实体干重均显著提高,其中加入1μg/mL吲哚丁酸和1μg/mL 2,4-D的培养瓶的子实体干重是对照的15倍。实验结果为优化冬虫夏草子实体人工培育提供了支撑。     

Bacterial community dynamics in the hyporheic zone of an intermittent stream

The dynamics of in situ bacterial communities in the hyporheic zone of an intermittent stream were described in high spatiotemporal detail. We assessed community dynamics in stream sediments and interstitial pore water over a two-year period using terminal-restriction fragment length polymorphism. Here, we show that sediments remained saturated despite months of drought and limited hydrologic connectivity. The intermittency of stream surface water affected interstitial pore water communities more than hyporheic sediment communities. Seasonal changes in bacterial community composition was significantly associated with water intermittency, phosphate concentrations, temperature, nitrate and dissolved organic carbon (DOC) concentrations. During periods of low- to no-surface water, communities changed from being rich in operational taxonomic units (OTUs) in isolated surface pools, to a few OTUs overall, including an overall decline in both common and rare taxa. Individual OTUs were compared between porewater and sediments. A total of 19% of identified OTUs existed in both porewater and sediment samples, suggesting that bacteria use hyporheic sediments as a type of refuge from dessication, transported through hydrologically connected pore spaces. Stream intermittency impacted bacterial diversity on rapid timescales (that is, within days), below-ground and in the hyporheic zone. Owing to the coupling of intermittent streams to the surrounding watershed, we stress the importance of understanding connectivity at the pore scale, consequences for below-ground and above-ground biodiversity and nutrient processing, and across both short- and long-time periods (that is, days to months to years).     

至少6个突变基因型冬虫夏草菌在冬虫夏草子座中表达的动态变化

本研究检测了在冬虫夏草成熟过程中突变基因型冬虫夏草菌在子座中表达的动态变化。根据冬虫夏草菌基因内转录间隔区(ITS)序列中大量散在的点突变,设计了8个单核苷酸多态性(SNP)延伸引物,采用SNP质谱基因分型法测定各个SNP位点的单核苷酸延伸反应,观察冬虫夏草子座中转换突变和颠换突变基因型菌在冬虫夏草成熟过程中表达的动态变化。其中5个SNP延伸引物(067721-211,067721-240,067721-477,067721-531和067721-581)位于rDNA ITS1和ITS2段,用于区分GC和AT偏倚基因型,但不区分2个AT偏倚基因型。另外3个延伸引物(067740-324,067740-328和067740-360)位于rDNA 5.8S段,用于区分2个AT基因型。采用PCR+EcoRⅠ限制性酶切法检验2个GC偏倚基因型冬虫夏草菌在冬虫夏草成熟过程中表达的动态变化。结果表明:冬虫夏草子座rDNA ITS1-5.8S-ITS2片段的8个SNP位点的质谱图谱显示冬虫夏草子座中存在至少5个冬虫夏草菌转换突变和颠换突变等位基因。它们的表达在冬虫夏草成熟过程中呈现动态变化。067721-211和067721-477位点的AT偏倚型等位基因的峰高明显高于GC偏倚型;随着冬虫夏草的成熟,这2个位点的AT型等位基因峰高大幅度下降。SNP质谱图不仅显示转换突变的等位基因,颠换突变等位基因也有很高的检出率,它们的峰高在一些位点甚至超过GC和AT基因型等位基因;随着冬虫夏草的成熟,颠换突变等位基因的检出率和峰高趋于下降。在区分2个AT偏倚基因型的研究中,AB067744和AB067740 2个基因型的等位基因同时存在于未成熟冬虫夏草子座中。随着冬虫夏草的成熟,AB067744基因型等位基因的峰高明显降低,而AB067740基因型等位基因的峰高明显升高。PCR产物EcoRⅠ酶切试验发现子座中存在2组GC偏倚型菌,具有完全不同的成熟模式。综上,冬虫夏草子座中存在至少6个突变基因型冬虫夏草菌,其表达随着冬虫夏草的成熟呈现动态变化。这些突变基因型菌表达的动态变化对于冬虫夏草子座的萌发和成熟具有重要菌物学意义。