Twist1在肿瘤发生中的作用

Twist1作为bHLH转录因子起初被发现在胚胎发育中起关键作用. 最近10年研究证明,它在多种癌的发生、发展中发挥重要作用. 本文结合多种信号通路（如MAPK、STAT、NF κB）以及与其基因表达调控相关的转录因子、翻译后修饰、microRNA等综述Twist1表达调节. 同时,根据其参与癌的发展及作用方式,结合细胞间联系、肿瘤微环境、侵袭和迁移、化疗抗性、上皮 间质转化（EMT）、细胞衰老与程序性死亡、肿瘤干细胞等,概括Twist1在肿瘤发生中的作用.     

胚胎发育基因Twist在宫颈癌中的研究进展

Twist基因是具有高度保守的转录因子,属于螺-环-螺(basic helix-loop-helix,bHLH)转录家族。已有研究发现,许多上皮性肿瘤细胞中Twist基因通常呈过度表达,在抗细胞凋亡、耐药性、上皮-间质转变(epithelial-mesenchymal transi-tion,EMT)、肿瘤新生血管形成、肿瘤侵袭、转移起到了非常重要的作用。目前,国内外对宫颈癌中Twist的作用研究较     

Twist2的生物学功能及其分子机制

碱性螺旋-环-螺旋(Basic helix-loop-helix protein,bHLH)家族成员Twist2对间质细胞系的发生和发育起转录调节作用,经直接或间接机制发挥分子开关功能,从而激活或抑制靶基因。Twist2能直接结合DNA上 E-box保守序列,招募共激活物或抑制剂;能与E蛋白调节因子发生蛋白-蛋白相互作用,干扰激活或抑制功能。Twist2无义突变导致Setleis综合征。对Twist2的早期研究多集中在骨骼发育,随后在多种肿瘤中发现其有表达差异,研究表明Twist2在肿瘤的上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)中发挥着重要作用。Twist2参与了多条通路的调控,其调控作用的发挥受到时空表达、磷酸化、二聚化和细胞定位的调节,在机体的正常发育、体内平衡和疾病发生机制中研究Twist2的作用显得尤为重要。文章对Twist2在成骨分化、肿瘤形成和EMT中的作用及其分子机制进行综述,以便帮助了解Twist2的生物学功能,为进一步在疾病的诊断、发展、以及治疗等方面的转化应用研究提供依据。     

Twist对小鼠乳腺癌细胞基因表达谱的调控研究

摘要 Twist是一个bHLH（basic Helix-loop-Helix）类型的转录因子,近年来研究发现,Twist在乳腺癌中的表达显著升高,并能促进乳腺癌的转移。为了探索Twist促进乳腺癌转移的分子机制,本文采用RNA干扰技术在小鼠乳腺癌细胞株4T1中沉默Twist的表达,通过全基因组基因芯片技术检测了Twist沉默前后4T1细胞基因表达谱的差异性。体内实验结果证明Twist表达被沉默后4T1细胞的肺转移能力明显被抑制。芯片结果表明：表达差异显著的基因有167条,其中与肿瘤相关的基因有26条,包括15条上调基因和11条下调基因。这些基因中可能存在能被Twist调控并与肿瘤转移相关的基因,为以后研究Twist影响乳腺癌转移的分子机制提供了帮助。     

Twist 在胸腺上皮性肿瘤中的表达及预后意义

目的:检测Twist在胸腺上皮性肿瘤的表达及其与预后的关系。方法:应用免疫组织化学pv6000法检测Twist在87例胸腺上皮性肿瘤(胸腺瘤71例,胸腺癌16例)中的表达情况,分析其与患者各项临床病理指标及预后的关系。结果:Twist蛋白在胸腺癌的阳性表达(81.3%)显著高于胸腺瘤组织(11.3%),其阳性表达的差异存在统计学意义(P<0.001),其在胸腺瘤各亚型之间表达的差异无统计学意义(P>0.05)。Twist阳性表达与胸腺上皮性肿瘤术后发生远处转移呈正相关关系(r=0.40,P=0.001)。Kaplan-Meier生存分析显示Twist阳性表达患者术后生存期低于Twist阴性表达患者(P<0.001)。结论:检测Twist蛋白表达情况对于鉴别胸腺瘤与胸腺癌可能有重要的参考价值,Twist阳性表达可能与术后发生远处转移有关并影响患者术后生存期。     

Twist (and rotation?) of central-pair microtubules in flagella ofPoterioochromonas

Summary The chrysoflagellate algaPoterioochromonas bears two unequal flagella. There is a short naked one and a long flagellum with mastigonemes. Ultrastructural investigation reveals that the centralpair microtubules in both flagella have no fixed position with respect to the flagellar base and root system, or the mastigoneme rows in the long flagellum. The central-pair microtubules are twisted several times along the length of the flagellum. This might indicate active or passive rotation of the central-pair microtubules during flagellar beat.     

Twist1调控FoxM1 在上皮性卵巢癌中的表达

目的:探讨Twist1调控转录因子Fox M1在上皮性卵巢癌中的表达。方法:采用免疫组织化学SP法检测Fox M1、Twist1在上皮性卵巢癌组织中表达情况,斯皮尔曼秩相关分析其在上皮性卵巢癌组织中的表达相关性;双荧光素酶报告系统检测Twist1对Fox M1的调控作用;Real-time quantitative RT-PCR和蛋白免疫印迹技术验证Twist1对Fox M1的调控作用。结果:Twist1、Fox M1在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率分别是71.4%(40/56)、78.6%(44/56),明显高于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.05);且其在上皮性卵巢癌中的表达显著相关(r=0.896,P<0.01);Twist1可以结合并激活Fox M1启动子(P<0.05);上调Twist1表达可以激活Fox M1在卵巢癌细胞中的表达(P<0.05),而干扰Twist1后可以下调Fox M1的表达(P<0.05)。结论:Twist1参与调控增殖相关转录因子Fox M1在卵巢癌中的表达,可能是一个潜在的治疗靶点。     

Membrane Protein Chaperones: A New Twist in the Tail?

The integration of tail-anchored membrane proteins at the endoplasmic reticulum occurs via a specialised ATP-dependent pathway, but the cytosolic factors involved have proven elusive. A novel ATPase that mediates this process has now been identified.     

Twist及Akt2在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨Twist、Akt2在甲状腺乳头状癌中的表达和相互关系。方法应用免疫组化方法,对60例甲状腺乳头状癌、10例结节性甲状腺肿进行Twist、Akt2表达的研究。结果甲状腺乳头状癌Twist及Akt2阳性表达率分别为81.67%(49/60)及60.00%(36/60),结节性甲状腺肿Twist及Akt2阳性表达率分别为0.00%(0/10)及10.00%(1/10),前者与后者相比差异有统计学意义(P<0.05);Twist及Akt2在甲状腺乳头状癌中的表达水平与病人的年龄及原发肿瘤分期无关,但与有无淋巴结转移相关(P<0.05),且Akt2的表达在T3,4期肿瘤及T1,2期肿瘤相比也具有显著性(P<0.05);Twist及Akt2的表达呈正相关(r=0.492,P=0.000)。结论在大多数甲状腺乳头状癌的上皮细胞中都存在Twist及Akt2的过表达,其淋巴结转移的发生与Twist及Akt2过表达或功能的不正常可能有密切的关系;Twist与Akt2的表达呈正相关。     

转录因子Twist的siRNA筛选、腺病毒构建及功能检测

目的 筛选特异性沉默人的Twist基因的siRNA序列,构建siTwist腺病毒并在MG63及143B骨肉瘤细胞中进行功能鉴定.方法 体外退火获得4组siTwist双链DNA序列,克隆至含有Twist基因的pSOS-Twist质粒中获得pSOS-siTwist质粒,脂质体转染HEK293细胞,GFP检测筛选有功能的siTwist片段,将筛选出的siTwist序列构建腺病毒,感染143B骨肉瘤细胞.通过RT-PCR、Western 印迹检测Twist的表达.siTwist与Twist腺病毒共感染MG63骨肉瘤细胞,细胞计数及细胞侵袭实验检测siTwist对Twist的抑制作用.结果 在HEK293细胞中,4组siTwist中有2组GFP的表达明显降低,且siTwist腺病毒能抑制143B骨肉瘤细胞中内源性的Twist表达,Twist腺病毒能促进MG63骨肉瘤细胞的增殖和转移,而两组siTwist与Twist共感染组MG63细胞的增殖及迁徙率均明显低于Twist组（P〈0.05）.结论 筛选出两对特异性沉默Twist基因的siRNA片段,并成功构建腺病毒,转染细胞后能有效抑制内源性和外源性的Twist表达,为研究Twist在骨肉瘤细胞增殖和转移中的作用及具体机制提供了有效的分子工具.     

Twist和maspin在乳腺浸润性导管癌及原位癌中水平增高

目的检测浸润性导管癌(infiltrating ductal carcinoma,IDC)中上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标记物Twist蛋白和maspin蛋白的表达,并分析它们之间的相互关系以及临床病理意义。方法收集临床病例325例石蜡包埋IDC、50例导管原位癌以及50例正常乳腺组织,应用免疫组织化学ElivisionTMplus法检测IDC、原位癌和正常乳腺组织中Twist和maspin蛋白的表达。结果 Twist在IDC组、原位癌组、正常对照组中的阳性表达率为55.7%、24.0%、2.0%,表达逐渐降低,差异有统计学意义;maspin蛋白在IDC组、原位癌组和正常对照组中的阳性率分别为40.9%、80.0%、100%,表达逐渐升高,差异有统计学意义。Twist蛋白的表达与IDC组织的淋巴结转移与否及临床分期及术后生存期均有关;随着maspin蛋白的阳性表达率的降低,IDC组织的分化越差、淋巴结易发生转移、临床分期越高,差异有统计学意义,且maspin蛋白阳性表达组患者的生存时间明显高于其阴性表达组患者。Spearman相关分析显示在IDC中,Twist蛋白和maspin蛋白呈负相关。Cox回归分析显示Twist和maspin蛋白的阳性表达以及TNM分期是影响IBC患者术后生存的独立预后因素。结论Twist和maspin蛋白的异常表达可能参与了乳腺癌的发生、发展及转移过程;Twist和maspin可以作为预测IDC患者浸润、转移及预后的标记物。     

胃腺癌中Twist、Snail与KAI1的免疫反应性及其临床意义

目的检测原发性胃腺癌(gastric adenocarcinoma,GAC)中上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关标记物Twist和Snail蛋白以及肿瘤转移抑制因子KAI1水平,并分析它们之间的相互关系以及临床意义。方法通过免疫组织化学Elivision~(TM)plus法检测261例GAC和80例正常胃黏膜组织中Twist、Snail和KAI1蛋白的免疫反应性。结果Twist和Snail在GAC组织中的免疫反应阳性率显著高于其在对照组中的阳性率;KAI1蛋白在GAC组织中的免疫反应阳性率显著低于其在对照组中免疫反应阳性率。Twist和Snail蛋白免疫反应阳性率与GAC组织的浸润深度、临床病理分期和淋巴结转移均显著相关;KAI1蛋白的免疫反应阳性率与GAC肿瘤组织的分化程度、浸润深度、临床病理分期及淋巴结转移显著相关。Kaplan-Meier生存分析显示,Twist和Snail蛋白免疫反应阳性组患者的总体生存时间明显短于其阴性组患者,而KAI1蛋白免疫反应阳性组的患者总体生存时间明显长于其阴性组患者。Spearman相关分析显示,KAI1蛋白与Twist和Snail蛋白的免疫反应性之间呈负相关,Twist和Snail的免疫反应性呈正相关。Cox多因素回归分析表明Twist和KAI1蛋白的免疫反应阳性以及pTNM分期是影响GAC患者生存的独立预后因素。结论 Twist、Snail水平升高和KAI1水平降低可能参与了GAC的浸润及转移过程;联合检测Twist、Snail和KAI1的免疫反应性对GAC患者的肿瘤进展及预后判断有重要意义。     

miR-181a–Twist1 pathway in the chemoresistance of tongue squamous cell carcinoma

Although many researches have been undertaken to disclose the mechanisms of chemoresistance, the mechanisms remain unclear. The aim of this study is to elucidate the role of miR-181a–Twist1 pathway in the chemoresistance of tongue squamous cell carcinoma (TSCC). We found that cisplatin-induced chemoresistance in TSCC cell lines underwent EMT (epithelial–mesenchymal transition) and was accompanied by enhancing metastatic potential (migration and invasion in vitro), miR-181a downregulation and Twist1 upregulation. Functional analyses indicated that miR-181a reversed chemoresistance, inhibited EMT and metastatic potential in TSCC cells. Twist1 was confirmed as a direct miR-181a target gene by luciferase reporter gene assays. Twist1 knockdown by siRNA led to a reversal of the chemoresistance, inhibited EMT and metastatic potential in TSCC cells. Our study demonstrates that miR-181a–Twist1 pathway may play an important role in the development of cisplatin-chemoresistance, with EMT and an increase the metastatic potential of TSCC cells.     

Twist1稳定表达细胞株的建立及对乳腺癌细胞上皮-间充质转变的影响

目的:构建Twist1的慢病毒真核表达载体,并建立稳定表达Twist1的乳腺癌细胞株,研究Twist1在乳腺癌中对上皮-间充质转变(EMT)的影响。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增Twist1编码序列,克隆到慢病毒p CDH载体,构建成p CDH-Twist1,转染293T细胞,Western印迹鉴定p CDH载体介导的Twist1的表达;包装病毒载体,感染ZR75-1细胞,用嘌呤霉素筛选得到稳定表达Twist1的细胞株,检测ZR75-1细胞对EMT的影响。结果:经Bam HⅠ、Eco RⅠ双酶切及测序证实得到p CDH-Twist1表达载体,Western印迹实验发现Twist1在293T细胞内表达;嘌呤霉素筛选得到稳定表达Twist1的ZR75-1细胞株。结论:构建了p CDH-Twist1的真核表达载体并建立了稳定表达Twist1的ZR75-1细胞,为进一步研究Twist1在EMT过程中的机制奠定了基础。     

Mutant p53R175H upregulates Twist1 expression and promotes epithelial–mesenchymal transition in immortalized prostate cells

A mutation within one allele of the p53 tumor suppressor gene can inactivate the remaining wild-type allele in a dominant-negative manner and in some cases can exert an additional oncogenic activity, known as mutant p53 ‘gain of function'' (GOF). To study the role of p53 mutations in prostate cancer and to discriminate between the dominant-negative effect and the GOF activity of mutant p53, we measured, using microarrays, the expression profiles of three immortalized prostate epithelial cultures expressing wild-type, inactivated p53 or mutated p53. Analysis of these gene expression profiles showed that both inactivated p53 and p53^R175H mutant expression resulted in the upregulation of cell cycle progression genes. A second group, which was upregulated exclusively by mutant p53^R175H, was predominantly enriched in developmental genes. This group of genes included the Twist1, a regulator of metastasis and epithelial–mesenchymal transition (EMT). Twist1 levels were also elevated in metastatic prostate cancer-derived cell line DU145, in immortalized lung fibroblasts and in a subset of lung cancer samples, all in a mutant p53-dependent manner. p53^R175H mutant bearing immortalized epithelial cells showed typical features of EMT, such as higher expression of mesenchymal markers, lower expression of epithelial markers and enhanced invasive properties in vitro. The mechanism by which p53^R175H mutant induces Twist1 expression involves alleviation of the epigenetic repression. Our data suggest that Twist1 expression might be upregulated following p53 mutation in cancer cells.     

除痰解毒方联合吉非替尼对肺腺癌H1975荷瘤小鼠Twist、Fibronectin表达的影响

本文研究除痰解毒方(Chutan Jiedu Decoction,CJD)联合吉非替尼对肺腺癌H1975荷瘤小鼠移植瘤twist、fibronectin表达的影响,从上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)角度探讨其抗肿瘤作用机制。建立人肺腺癌H1975耐药细胞荷瘤裸鼠模型,随机分为模型组,吉非替尼组,除痰解毒方低、中、高剂量组,除痰解毒方中剂量联合吉非替尼组,每组10只,各组予以相应的药物灌胃2周。检测瘤体积和瘤质量,计算抑瘤率,采用免疫组织化学法、Western blot法、荧光定量PCR法检测各组肿瘤组织twist、fibronectin蛋白及基因的表达。结果显示,联合用药组抑瘤率为61.92%,明显高于模型组、吉非替尼组,除痰解毒方低、中、高剂量组(P0.01)。免疫组织化学法、Western blot法及荧光定量PCR法结果均显示除痰解毒方中剂量、高剂量及联合用药组均能下调twist和fibronectin的表达,且联合用药组下调作用高于单独用药组(P0.01)。研究结果表明除痰解毒方联合吉非替尼对肺腺癌H1975荷瘤小鼠移植瘤生长及twist、fibronectin表达的抑制作用优于除痰解毒方单药及吉非替尼组,其协同增效作用可能与逆转EMT增强吉非替尼的敏感性有关。