桑葚花色苷提取物对乳腺癌细胞凋亡及线粒体膜电位的影响

目的:观察桑葚花色苷提取物对人乳腺癌细胞株MDA-MB-453、MDA-MB-231和MCF-7细胞凋亡及线粒体膜电位的影响.方法:利用超声辅助乙醇萃取法提取桑葚花色苷,pH示差法测定提取物花色苷总含量,以50、100和150 mg/mL桑葚花色苷提取物作用三种乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453和MCF-7 24h,采用Annexin V/PI双染流式细胞分析法检测细胞凋亡水平变化,JC-1探针染色激光共聚焦扫描显微镜观察MDA-MB-453细胞线粒体膜电位水平变化.结果:凋亡分析结果表明,桑葚花色苷提取物作用后三种乳腺癌细胞凋亡率均升高,显示出促凋亡效应,且具有剂量-效应关系,100和150 mg/mL组凋亡率显著升高(P＜0.05).激光共聚焦扫描显微镜检测结果显示,桑葚花色苷提取物作用24h,可使MDA-MB-453细胞线粒体膜电位显著下降,表现为红色/绿色荧光的比值显著降低(P＜0.05).结论:桑葚花色苷提取物可显著降低乳腺癌细胞线粒体膜电位,并促发细胞凋亡.     

线粒体跨膜电位与细胞凋亡

细胞凋亡作为细胞固有的、受机体严密调控的细胞死亡形式,在多细胞生物体清除衰老细胞及无能细胞等方面发挥重要的作用.近年来,细胞凋亡的研究重点已从细胞核转向线粒体.各种死亡信号诱导线粒体膜通透性改变孔（permeability transition pore, PT pore）开放,引起线粒体跨膜电位下降,导致促凋亡物质释放,继而激活caspase,最终使细胞凋亡.Bcl-2和Bcl-X_L通过对线粒体作用而抑制细胞凋亡,而Bax、Bak与Bad通过调节线粒体而诱导细胞凋亡.     

线粒体参与介导MOPDO抑制HepG2细胞增殖、诱导其凋亡的作用

研究新合成的一氧化氮供体--核苷衍生物6-甲基-4-(2-氟-3,5-二-O-苯甲酰基-1-β-D-呋喃阿拉伯糖)-[1,2,5]噁二唑[3,4-d]嘧啶-5(4H),7(6H)-二酮1-氧化物(MOPDO)抑制人肝癌细胞HepG2增殖、诱导凋亡的作用.以不同浓度的MOPDO作用于人肝癌细胞HepG2,MTT检测与相差显微镜观察相结合,分析MOPDO对HepG2细胞增殖的影响;膜联蛋白-V/PI双染检测细胞凋亡率;JC-1染色检测线粒体膜电位(△ψm)变化;硝酸酶法测定细胞培养液中NO的含量.结果发现,MOPDO以时间和剂量依赖性方式抑制HepG2细胞的增殖,细胞形态出现相应的变化;细胞凋亡率的增加呈时-效和量-效关系;JC-1染色显示,线粒体膜电位随着MOPDO剂量的增加降低;MOPDO释放的NO量呈剂量依赖性增加.表明线粒体可能参与介导MOPDO抑制HepG2细胞的增殖、诱导其凋亡的作用.     

线粒体与细胞凋亡机制

细胞凋亡是生理性的细胞死亡过程,受到多种基因的精确调节,一类被统称为ｃａｓｐａｓｅ的半胱氨酸蛋白酶是细胞凋亡程序的执行者,综们被激活后作用于细胞内的一些蛋白质,经起细胞凋亡。线粒体中含有许多凋亡相关因子,在凋亡信号转导中起着重要作用。细胞受到凋亡刺激后,细胞色素ｃ、ＡＩＦ、ｃａｓｐａｓｅ－９等凋亡相关因子从线粒体中释放出来。细胞色素ｃ通过和Ａｐａｆ－１、ｃａｓｐａｓｅ－９相互作用,激活ｃａｓｐａｓ     

三氧化二砷诱导细胞凋亡对线粒体的影响

线粒体作为细胞能量的“动力工厂”,在细胞的生理过程中起着重要的作用,本文采用三氧化二砷（Ａｓ２ Ｏ３） 诱导ＭＧＣ－ ８０３ 细胞凋亡,通过罗丹明１２３ 和Ｈｏｅｃｈｅｓｔ３３２５８ 对细胞进行荧光标记,利用具有光子计数成像能力的超高灵敏度荧光显微镜观察凋亡细胞与未加入Ａｓ２ Ｏ３ 的对照组细胞的区别,发现Ａｓ２ Ｏ３ 在诱导细胞凋亡时可引起线粒体内膜电位差减小     

线粒体与细胞凋亡

细胞凋亡是一种由基因控制的自主性死亡过程。近年来研究发现,线拉体在细胞凋亡过程中起重要作用,它可以通过改变膜通透性、释放凋亡活性物质等介导细胞凋亡。     

线粒体与细胞凋亡

细胞凋亡是一种重要生物学过程,在细胞生长发育以及对外界刺激的反应中有关键的作用。近年来发现线粒体跨膜电位与线粒体通透性改变在细胞凋亡过程中起重要作用。并且提出了线业体通透性改变孔道复合物的假说,引起广泛的注意,本文谨作一简单介绍。     

细胞凋亡相关基因与人类肿瘤

介绍细胞凋亡相关的基因,以及这些基因的改变在恶性肿瘤的发生、发展及治疗中的怍用。     

细胞凋亡与线粒体细胞色素c

１细胞色素ｃ在细胞凋亡中的作用Ｋｅｒｒ于１９７２年提出了细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）,随后发现细胞凋亡现象普遍存在于各种生物中,与细胞的生长发育,免疫调节以及许多病变如肿瘤有直接关系。与细胞坏死不同,细胞凋亡是一个相对主动的过程,伴随着一系列形态上...     

人胚胎干细胞和分化细胞差别基因的筛选

人类胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)在增殖过程中如何保持未分化状态是干细胞生物学的核心问题之一,已有的LIF通路、Oct-4因子及Nanog基因的作用还不能对这一问题做出全面的解释。为进一步了解维持hESC未分化状态的机制,采用自行建立培养的hESC及分化的hESC细胞克隆(differentiated hESC,dhESC),应用抑制消减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)结合反向cDNA斑点杂交技术,筛选出在hESC高表达、在dhESC中低表达或不表达的表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)共105个。通过与GenBank比较,显示其中76个EST代表61个已知基因,18个EST代表15个假想基因,另有11个属于未知EST。选取其中8个克隆进行半定量RT-PCR分析,证实其中7个克隆在hESC中高表达,在dhESC中低表达或不表达。结果表明,hESC分化前后涉及多个基因的差异表达,对这些在hESC中高表达、在dhESC中低表达或不表达基因的进一步功能研究为阐明维持hESC未分化状态的机制提供了基础。     

病毒基因与细胞凋亡

细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是受遗传控制的细胞自灭过程,是机体维持稳态的主要机制之一。是一种典形的细胞程序化死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ）,细胞程序化死亡的诱导与调控机制是当今生物学中非常活跃的研究领域,涉及到细胞生物学,病毒学、免疫学、发育生物学、致癌生物学等学科。具有重要的理论与实践意义。引起细胞凋亡的因素很多,本文仅就病毒基因与细胞凋亡的关系,主要以疤疹病毒科,腺病毒科,杆状病毒科和逆转录病毒中某些病毒与细胞凋亡相关的基因及其结构,作用方式和分子机理的研究结果进行综述并对以后研究方向作些展望。     

基因芯片技术筛选家蝇抗菌肽相关基因

用生物学软件对GenBank中部分昆虫抗菌肽基因编码区保守域设计探针, 用直接点样法将探针点印在特制玻片上构建寡核苷酸(Oligonucleotide, oligo)探针微阵列; 提取诱导后24 h的家蝇三龄幼虫脂肪体总RNA, 逆转录成cDNA并标记上荧光标记物Cy3, 与构建的oligo探针微阵列杂交, 经洗片、扫描处理后进行数据分析。结果在两次重复实验中均检测到有效杂交信号的基因点有15个(不包括阳性对照基因), 为进一步发现其新基因提供了依据。     

Inhibition of Caspases Rescues Brown Adipocytes from Apoptosis Downregulating BCL-XS and Upregulating BCL-2 Gene Expression

Serum deprivation of the immortalized brown adipocyte cell line resulted in growth arrest inG₀/G₁phases of the cell cycle and apoptosis, as detected by DNA laddering, nuclei condensation and fragmentation, and an increase in the percentage of hypodiploid cells. In addition, apoptosis in these cells is accompanied by an induction of the expression of the apoptotic form of the Bcl-x gene, the isoform Bcl-xS, and by a decrease of Bcl-2 expression, Bcl-xL remaining almost undetectable. The loss of mitochondrial membrane potential was associated with apoptosis. Z-VAD, a cell-permeable inhibitor of caspases, but not cycloheximide, precludes DNA laddering under serum deprivation. Moreover, Z-VAD rescues serum-deprived brown adipocytes from apoptosis, decreasing the percentage of hypodiploid cells, the percentage of apoptotic cells under Tunnel assay, and the external display of phosphatidylserine. More importantly, Z-VAD survival effects on immortalized brown adipocytes concur with a downregulation of Bcl-xS mRNA/protein and an upregulation of Bcl-2 protein content. Ultimately, Z-VAD prevents the loss of mitochondrial membrane potential.     

基因芯片技术在新基因发现中的应用

基因芯片技术是20世纪90年代中期在生命科学领域中发展起来的一种分子生物学新兴技术,是多学科的交叉融合。简要概述了基因芯片技术的产生、原理、特点、制作方法和类型,及其在新基因发现中的应用。     

Resistance of Human Liver Mesenchymal Stem Cells to FAS-Induced Cell Death

Mesenchymal stem cells (MSCs) have a pronounced therapeutic potential in various pathological conditions. Though therapeutic effects of MSC transplantation have been studied for a long time, the underlying mechanisms are still not clear. It has been shown that transplanted MSCs are rapidly eliminated, presumably by apoptosis. As the mechanisms of MSC apoptosis are not fully understood, in the present work we analyzed MSC sensitivity to Fas-induced apoptosis using MSCs isolated from the biopsies of liver fibrosis patients (L-MSCs). The level of cell death was analyzed by flow cytometry in the propidium iodide test. The luminescent ATP assay was used to measure cellular ATP levels; and the mitochondrial membrane potential was assessed using the potential-dependent dye JC-1. We found that human L-MSCs were resistant to Fas-induced cell death over a wide range of FasL and anti-Fas mAb concentrations. At the same time, intrinsic death signal inducers CoCl₂ and staurosporine caused apoptosis of L-MSCs in a dose-dependent manner. Despite the absence of Fas-induced cell death treatment of L-MSCs with low concentrations of FasL or anti-Fas mAb resulted in a cellular ATP level decrease, while high concentrations of the inducers caused a decline of the mitochondrial membrane potential. Pre-incubation of L-MSCs with the pro-inflammatory cytokine TNF-α did not promote L-MSC cell death. Our data indicate that human L-MSCs have increased resistance to receptor-mediated cell death even under inflammatory conditions.     

镉通过引发氧化应激和线粒体损伤诱导PK-15细胞凋亡

镉（cadmium,Cd）是一种生物累积性的有毒重金属元素,能够在肾组织大量蓄积并引起肾发生病变和功能损伤。前期研究证实,Cd处理能够引起猪肾PK-15细胞的活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平升高和细胞死亡,但详细机制有待进一步研究。本研究以PK-15细胞为研究对象,通过CCK-8检测、透射电镜观察、DCFH-DA标记、JC-1染色、彗星实验和流式细胞术等研究手段,分别检测Cd处理后的细胞活性、形态变化、ROS生成、线粒体膜电位Δψm、DNA损伤及细胞凋亡情况。CCK-8实验结果显示,CdCl2处理后PK-15细胞活性下降,且呈时间和剂量依赖性;形态学观察发现,CdCl2处理引起PK-15细胞皱缩、变圆,细胞核固缩、染色质凝聚,线粒体肿胀、线粒体嵴减少或消失;荧光染色和流式细胞术检测结果显示,CdCl2处理引起PK-15细胞内ROS水平升高、线粒体膜电位Δψm下降和DNA损伤,最终导致细胞凋亡。Western印迹结果显示,CdCl2处理组中促凋亡蛋白质Bax表达量上调,抑凋亡蛋白质Bcl-2表达量下调,并且CdCl2处理组检测到了活化状态的裂解胱天蛋白酶3(cleaved caspase 3)。此外,ROS清除剂N-乙酰基-L-半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）缓解了CdCl2引起的线粒体损伤、DNA损伤和细胞凋亡。综上所述,Cd通过引发氧化应激和线粒体损伤诱导PK-15细胞凋亡。     

A Novel Apoptosis-like Pathway, Independent of Mitochondria and Caspases, Induced by Curcumin in Human Lymphoblastoid T (Jurkat) Cells

We have shown previously [E. Sikora, A. Bielak-Zmijewska, K. Piwocka, J. Skierski, and E. Radziszewska (1997) Biochem. Pharmacol. 54, 899-907] that curcumin prevents formation of oligonucleosomal DNA fragmentation in rat thymocytes and human leukemic T lymphocytes (Jurkat cells) induced to undergo apoptosis. In this paper we show that 50 microM curcumin by itself induces cell death in Jurkat cells, but its symptoms differ from those observed after a short ultraviolet (uv) irradiation. Ultraviolet-irradiated Jurkat cells displayed typical symptoms of apoptosis: morphological changes, internucleosomal and high-molecular-weight DNA fragmentation, formation of sub-G1 fractions in DNA content frequency histograms, and dissipation of the mitochondrial transmembrane electric potential (Delta psi). In contrast, curcumin-treated Jurkat cells exhibited DNA splitting into high-, but not low-, molecular-weight fragments. These cells retained their high mitochondrial Delta psi, and the content of Ca2+ in endoplasmic reticulum stores remained at the level typical for untreated cells. The frequency of opening of the mitochondrial permeability transition pores in curcumin-treated cells was decreased compared to the controls, whereas uv irradiation made these pores completely open. Curcumin did not produce any change in the activity of caspase-3, whereas uv irradiation considerably activated this protease. The morphology of curcumin-treated cells displayed chromatin condensation, which was insensitive to the caspase inhibitor z-VAD-fmk, but no formation of typical apoptotic bodies, as was the case after uv irradiation. In contrast to uv-irradiated cells, curcumin-treated Jurkat cells considerably increased the level of Bcl-2. It is concluded that the programmed cell death induced by curcumin in Jurkat cells differs from "classical" by the lack of mitochondrial depolarization and of the involvement of caspases.     

牵张作用对成骨样细胞MG63的线粒体跨膜电位的影响

目的:探讨在低渗透压形成的静牵张应力环境下线粒体跨膜电位与细胞增殖分化及凋亡的关系。方法:用成骨样细胞MG63细胞株进行体外培养、扩增,在对数生长期采用不同的低渗透压对细胞进行刺激,检测不同作用务件下线粒体跨膜电位(ΔΨm)、细胞增殖比例(S期百分比)以及凋亡指数。结果:240mOsm组ΔΨm呈上升趋势,4h达到峰值,6h逐渐下降,但仍高于对照组;163 mOsm组ΔΨm在6 h时明显降低。277和240 mOsm组S期百分比在6 h和8 h达到峰值(26.54±0.71,28.10±0.39:26.96±0.33,28.55±0.26)。三个实验组的凋亡峰均提前,且大于对照组,尤以163 mOsm组为最(54.87±0.78)。结论:成骨样细胞MG63ΔΨm的变化与时间和力学刺激强度有一定的依赖性,预示线粒体跨膜电位的变化与细胞增殖活性之间存在一定的关系。     

同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞凋亡的研究

观察不同浓度同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)在Cu2 介导下,能否诱导培养的人脐静脉内皮细胞凋亡,以揭示HCY致血管内皮损伤的机制。采用细胞计数板检测脱落细胞量;比色法分别测定乳酸脱氢酶释放率、细胞内丙二醛含量和超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力的改变;Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核形态变化及流式细胞术定量测定细胞凋亡。结果表明HCY在生理浓度Cu2 的介导下,可能通过氧化应激损伤的机制而导致血管内皮细胞凋亡,这提示在体内可能通过此途径诱发动脉粥样硬化。