λDNA/HindⅢ片段在凝胶中的电泳性质分析:离子效应及其它

本文以λDN/HinaⅢ片段(2.0kbp至23.1kbp)为材料,研究在各价态金属离子作用下DNA片段在凝胶中电泳迁移率的变化规律.离子效应使DNA聚合链的挠性增大,末端距与持久长度减小,从而使电泳迁移率随离子强度的增加而减小;同时这种离子效应又是价态依赖的.DNA电泳行为的离子效应与Hervet关于DNA聚合键在凝胶中的电泳理论模型分析一致.同时尝试应用现代多聚电解质理论对电泳离子效应的半定量分析也得到了满意的结果.本文还对凝胶浓度、电场强度、以及分子量诸因素对DNA电泳性质的影响进行了实验研究与讨论.     

改良聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA

本文介绍了应用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA的改进方法。与以往方法相比,本方法从配制凝胶储备液,无需封口的水平灌胶,适当地提高电泳的电压梯度,采用改良银染法检测,省却凝胶固定,银染法DNA的纯化方法,及溴化乙锭染色法的操作等一系列改进措施,使聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA的操作得到简化,更便捷,并减小了对人与环境的毒害作用。     

链分离凝胶电泳技术

由于某些原因,(例如,用Maxam—Gibert方法测定序列;与低含量RNA杂交。)有时需要获得双链相互分离的DNA分予片断。通常采用的方法是让变性的DNA在中性琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳。许多DNA片断的两条互补链在凝胶中有不同的迁移率,其原因尚不清楚。     

有效分离1kDa分子量环脂肽的电泳方法

目的：建立一种有效分离1kDa分子量环脂肽的电泳方法。方法：针对1kDa分子量环脂肽的特点,对凝胶的组分和比例、凝胶的聚合速度等电泳条件进行了优化。结果：改进凝胶组分和比例,使得浓缩胶为7％T、3％C,夹层胶为12％T、3％C,致密胶为16．5％T、6％C;并在胶中加入尿素和甘油;同时加大APS的量使聚合速度加快。由此得到的环脂肽电泳条带清晰、平稳、紧凑,显示分子量为1．05kDa,与质谱结果吻合。结论：新建立的Tricine—SDS—PAGE是一种有效的分离1kDa分子量环脂肽的电泳方法。     

两性物质对DNA电荷逆转及凝聚的影响

聚赖氨酸(poly lysine,PL)能使DNA发生电荷逆转及凝聚,而在溶液中加入两性物质增加溶液的介电常数后,DNA发生电荷逆转的临界浓度及DNA的凝聚状态都会发生改变。作者通过动态光散射与原子力显微镜技术,研究了不同介电常数及不同培育时间下,PL对DNA电荷逆转及DNA的粒径与形态的影响。结果表明,PL浓度在10 mg/L时,DNA的电泳迁移率为0.2×10-4cm2/V·S左右,然而,当在溶液里加入1 mol/L的两性物质6-羧基己酸后,DNA的电泳迁移率变为-0.4×10-4cm2/V·S左右,说明两性物质阻碍DNA发生电荷逆转。随着两性物质浓度的增加,DNA的粒径变大,且培育时间越长,变大的越多。最后,通过原子力显微镜观察两性物质对DNA凝聚形态的影响,发现PL本身会使DNA凝聚物的尺寸变小,加入两性物质后,DNA凝聚物的尺寸反而变大。说明两性物质对DNA的凝聚形态也有影响。     

聚丙烯酰胺凝胶固定核酸方法及其应用

固相核酸已被广泛用于DNA/cDNA微阵列、固相PCR及其它核酸与生物分子检测的传感技术中.和硬质玻璃载片相比,三维聚丙烯酰胺凝胶作为固定核酸的载体具有结合核酸容量高、利于反应的类似液相环境和较少的空间效应等优点.综述了丙烯酰胺凝胶作为固定核酸载体的发展历史.着重介绍了丙烯酰胺修饰核酸直接聚合固定的方法以及在DNA芯片、焦测序、固相PCR(克隆)、及全基因组测序等核酸分析中的应用.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳在分离小分子物质中的应用

SDS-PAGE将SDS所带的大量阴性电荷和聚丙烯酰胺凝胶的高分辨率相结合,使蛋白自身的电荷被大量的阴性电荷所淹没,这样蛋白在电泳时的迁移率仅与其分子大小有关。蛋白电泳时凝胶的孔径大小和电泳介质对不同大小分子的分辨率有不同的影响,特别对相对分子量小于10000的低分子量蛋白,常规的电泳方法完全不能分辨,国外报道的尿素、缓冲液浓度及聚丙烯酰胺中的单体和双体的比例对蛋白的分辨率有较大的影响,但将几种不同因素进行综合研究,未见报道。     

甲醛诱导的磷酸化减弱Tau蛋白与DNA相互作用

异常磷酸化Tau蛋白是神经纤维缠结的主要成分,也是老年痴呆的典型病理特征之一.本实验室前期报道了Tau蛋白具有保护DNA的作用,但磷酸化对Tau与DNA相互作用的影响需要进行探索,这对于揭示Tau蛋白异常磷酸化与神经细胞死亡之间的关系具有一定的参考价值.本文采用甲醛孵育N2a细胞,引起了细胞内Tau蛋白的过度磷酸化.实验结果进一步显示,甲醛孵育组的细胞核内磷酸化Tau蛋白与DNA非共定位存在,而对照组细胞核内Tau蛋白与DNA存在一定程度的共定位现象.电泳迁移率实验检测GSK-3β催化的磷酸化Tau蛋白与DNA的结合情况,可以观察到磷酸化减弱了Tau蛋白与DNA的相互结合.这些结果表明,异常磷酸化可以使Tau蛋白丧失对DNA的保护作用,这可能是Tau蛋白异常磷酸化引起DNA损伤甚至细胞死亡的原因之一.     

电泳后凝胶中DNA的回收方法

本文根据文献和笔者近年来的研究工作,分述电泳后凝胶中核酸的洗脱、回收方法及其优缺点,以供从事这方面工作的同行参考。一、电泳回收法(一)柱状电泳洗脱法1.从聚丙烯酰胺凝胶中洗脱:Allet等于1973年报告以内切酶RI切割λDNA,用梯度     

PAGE技术对韭菜ISSR-PCR产物指纹检测效果的影响

PAGE技术是以聚丙烯酰胺凝胶作为载体的一种区带电泳检测技术,包括控制聚丙烯酰胺凝胶浓度、聚合速度、均匀度、着色度、干净度和凝胶漂移等技术环节。在分析各技术环节影响因素的基础上,系统地总结了各技术环节对韭菜ISSR扩增产物电泳指纹检测效果的影响。