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脱Ca~(2+)与结合Ca~(2+)蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2晶体的培养和X射线衍射数据 总被引:2,自引:0,他引:2
钙离子是磷脂酶A2催化必须的铺因子,以蝮蛇毒酸性磷脂酶A2为材料,采用在晶体培养液中加入EDTA或EGTA螯合剂络合法除去PLA2中可能有的Ca^2+离子和加入CaCl2以确保PLA2能克分结合上钙离子的方法培养充分结合Ca^2+和脱Ca^2+的PLA2晶体。加了螯合剂后长出的晶体为长棒状六方柱,加Ca^2+离子后长出的晶体则为短粗的六方柱。经X射线鉴定两种晶体为同晶型,空间群为P61,晶胞参数很 相似文献
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本实验观察了正常及高血压大鼠红细胞膜Ca2+,Mg2+-ATP酶对不同浓度Ca2+及Mg2+的反应。结果表明:(1)在自发性高血压大鼠(SHR),此酶最适反应的Ca2+浓度为10-6mol/L;WKY大鼠为10-4mol/L;两肾一环型肾性高血压大鼠(RHR)为10-7mol/L,Wistar大鼠为10-4mol/L,Ca2+高于以上各相应浓度时该酶活性受到抑制;(2)作为该酶激动剂的Mg2+有其最适激活浓度,在WKY大鼠、RHR及Wistar大鼠均为4.5mol/L;(3)高浓度Mg2+(36.0mol/L)可以逆转高浓度Ca2+对该酶的抑制作用。以上结果表明,底物Ca2+浓度的变化对Ca2+,Mg2+-ATP酶的催化活性影响极大,该酶活性的促发及维持必须有适宜浓度的Mg2+。高血压时此酶对Ca2+的敏感性增高,且Mg2+对酶保护作用更为明显。本结果提示,胞内高浓度Ca2+不仅是高血压发生的原因之一,并可能与其发展及恶化有关。 相似文献
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神经节苷脂(Gangliosides)是红细胞膜Ca~(2+)-Mg~(2+)ATPase的一种激活剂,这种激活作用也是依赖于Ca~(2+)存在。在200μmol/LCa~(2+)存在的反应体系中,100μg/mLGangliosides对Ca~(2+)-Mg~(2+)ATPase的激活作用最大,为基本酶活性的150%以上。实验还发现CaM拮抗剂三氟拉嗪(TFP)、粉防已碱(Tet)等也同样抑制Gangliosides的这种激活作用。其抑制的IC_(50)值为25μmol/L和30μmo1/L;而此浓度下抑制剂存在的反应体系中,对Ca~(2+)-Mg~(2+)ATPase的基本活性影响不大。 相似文献
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大量研究表明:心肌细胞缺氧后再复氧,可因氧反常和pH反常造成细胞内Ca2+超载。通常认为,在心肌细胞发生pH反常后,H+-Na+和Na+-Ca2+交换加强是细胞内Ca2+超载的重要机制。本实验结果表明:阻断了H+-Na+和Na+-Ca2+交换后,仍有部分Ca2+进入细胞,Ca2+内流量与缺氧时间成正比关系。在无Na+溶液中也得到了同样结果,表明此时Ca2+内流是通过与Na+无关的通路进入细胞的。进一步实验表明这种Ca2+内流与细胞膜内外pH梯度差密切相关。当胞外pH升高即胞内相对H+浓度增加时,Ca2+内流量也增加。故推测:pH反常所致细胞内Ca2+超载的原因,除H+-Na+和Na+-Ca2+交换外,尚有H+-Ca2+交换机制。 相似文献
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从江浙蝮蛇中分离纯化的碱性磷脂酶A2在pH9.5,0.05mmol/LCHES缓冲液中,用汽相悬滴扩散的方法,获得了适用于高分辨率X射线结构分析的单晶.经X200B面探测器分析,表明该晶体属于正交晶系,P2I2I2I空间群,晶胞参数为a=97.13,b=103.69,c=23.27.并收集了一套衍射数据,独立衍射点数12001个,数据完整度为86.2%,Rmerge为0.0459.最高分辨率达2.0,根据分子量与晶胞体积估算,一个不对称单位含两个分子. 相似文献
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从尖吻蝮蛇毒中分离出一种酸性磷脂酶A2 ,得到了一种新的晶型。用分子置换法测定其晶体结构 ,结构的分辨率达到 0 .2 8nm。该结构给出 2 1.9%的晶体学R因子 (R free =2 5 .7% )和合理的立体化学参数。与已报道的晶型相似 ,不对称单元的两个独立分子形成二体 ,揭示了这种二体的稳定性。二体的形成过程也伴随着 14~ 2 3肽段显著的构象变化 ,这一肽段属于磷脂酶A2 的界面识别部位。氨基酸序列分析表明 ,带正电荷的 34位残基是所有第二类具有溶血活性磷脂酶A2 的共同特点。NaCl对晶体的堆积具有显著的影响 ,从而导致晶胞参数的明显改变。与已报道的晶型不同 ,在酶分子的疏水通道内观测到了 2 甲基 2 ,4戊二醇 (2 methyl 2 ,4 pentanediol,MPD)分子 相似文献
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蝮蛇毒碱性磷脂酶A_2基因的克隆 总被引:2,自引:0,他引:2
从蝮蛇毒腺中抽提总RNA.利用人工合成寡核苷酸引物作逆转录,以cDNA为模板进行体外扩增,获得磷脂酶A2(简称PLA2)基因,克隆至pBS-ks载体中。通过对3个碱性PLA2(简称BPLA2)基因单独克隆分别作DNA全序列分析,推导pro-BPLA2由138个氨基酸残基构成,与已测定的部分氨基酸序列比较,基本相符。该基因成功的克隆,不仅推导出BPLA2的蛋白质全序列,也为进一步开展蛇毒功能肽蛋白质工程的研究工作打下了良好的基础。 相似文献
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研究了镧、轧、镱及四种配合物对Ca~(2+)-ATP酶活性的影响.结果表明,低浓度的La~(3+),Gd~(3+)和Yb~(3+)对肌质网Ca~(2+)-ATP酶有激活作用;随着其浓度的增加,它们对酶活性的抑制程度增大;而La~(3+),Gd~(3+)和Yb~(3+)对纯化的Ca2~(+)-ATP酶则只有抑制作用;Gd─N─乙酰─缬氨酸和Yb─丙氨酰代丙氨酸配合物对肌质网膜和纯化的Ca~(2+)-ATP酶活性的影响与Gd~(3+)及Yb~(3+)类似,但其激活程度和抑制程度比Gd~(3+)及Yb~(3+)小;Gd─DTPA和Yb-DTPA对Ca2~(+)-ATP酶活性基本无影响。 相似文献
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江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A2单斜晶体的培养和晶体学研究 总被引:2,自引:0,他引:2
江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A_2单斜晶体的培养和晶体学研究牛秀田,孟五一,桂璐璐,王小强,林政炯(中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室,北京100101)顾培忠,周元聪(中国科学院上海生物化学研究所,200031)关键词江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A_2... 相似文献
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钙离子在江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2中的作用是多方面的。它不仅能够引起酸性磷脂酶A_2在溶液中构象的变化,而且对该酶活性有较大的影响。Ca~(2+)为酶活力所必需,当Ca~(2+)浓度达到0.06mmol/L时,酶表现出很高的活力;Ca~(2+)浓度超过0.5mmol/L时,催化反应出现一个明显的延滞期。化学修饰表明His_(47)在表现活力方面起重要作用,Ca~(2+)的存在可降低其修饰反应的速度,提示这是由于Ca~(2+)引起构象发生变化而造成的。 相似文献
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将尖吻蝮蛇毒酸性磷脂酶 A2 I( A.a A P L A2 I) 的基因克隆至表达载体p B L M V L2 , 在大肠杆菌 R R1 中成功表达。表达产物 A.a A P L A2 I约占细菌蛋白质总量的30 % , 以包含体的形式存在。纯化包含体后, 将产物变性、复性, 然后用 F P L C Superose T M12 纯化, 产物经过 S D S P A G E 检测只有单一条带。对表达的 A.a A P L A2 I进行了酶活性、抑制血小板聚集活性和溶血活性的测定。结果显示, 表达的 A.a A P L A2 I的酶活性同变性后复性江浙蝮蛇酸性磷脂酶 A2( A P L A2) 的酶活性相近, 既具有抑制血小板聚集活性也具有溶血活性。最后对磷脂酶 A2( P L A2) 的结构与这些活性的关系进行了讨论 相似文献
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将尖吻蝮蛇毒酸性磷酯酶 A2 ( A.a APLA2 )基因克隆至温敏表达载体 p BLMVL2 ,在大肠杆菌 RR1中成功诱导表达 .表达产物 A.a APLA2 约占细菌蛋白质总量 2 5 % ,并以包涵体形式存在 .纯化包涵体后 ,将产物变性、复性 ,然后用 FPLC Superose TM1 2纯化 ,产物经过 SDS- PAGE检测只有单一条带 .对纯化后的表达 A.a APLA2 进行了酶活性、抑制血小板聚集活性和溶血活性的测定 .结果显示 ,A.a APLA2 的酶活性处于变性后复性江浙蝮蛇酸性磷脂酶 A2 和碱性磷脂酶A2 的酶活性之间 ,没有抑制血小板聚集活性 ,只有微弱溶血活性 .最后对 PLA2 的结构与这些活性的关系进行了讨论 相似文献
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将大鼠置于模拟海拔8km高度的低压舱内缺氧1周及缺氧后空气中常氧恢复1周和2周,观察了左右心室功能、心肌肥厚、心肌收缩蛋白含量及其Ca ̄(2+),Mg ̄(2+)-ATP酶活性的动态变化。结果表明,8km缺氧1周后肺动脉压及右心室收缩压明显升高,左右心室±dp/dtmax及收缩指数明显降低。左右心室肌明显肥厚,心肌收缩蛋白Ca ̄(2+),Mg ̄(2+)-ATP酶活性明显减低。缺氧后常氧恢复1和2周后,左右心室功能逐渐恢复达到或接近正常水平,心肌肥厚逐渐减轻或恢复正常,心肌收缩蛋白Ca ̄(2+),Mg ̄(2+)-ATP酶活性也逐渐升高。因此说明:心肌收缩蛋白Ca ̄(2+),Mg ̄(2+)-ATP酶活性的改变是心功能变化的重要生化基础之一,它的减低是缺氧心肌对环境的代偿适应。 相似文献
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研究了神经节苷脂GM_3参入肌质网膜后Ca~(2+)-ATP酶活力的变化,结果表明:GM_3参入肌质网膜后,对肌质网Ca~(2+)ATP酶活性(ATP水解活力与转运活力)有明显的激活作用.当参入的GM_3浓度为8μmol/L、参入时间为120min、温度为30℃时,对Ca~(2+)-ATP酶的激活作用最大. 相似文献
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江浙蝮蛇毒酸性与碱性磷脂酶A_2溶液构象变化的差示扫描量热法研究 总被引:1,自引:0,他引:1
运用差示扫描量热法,在不同pH值的缓冲溶液内和各种浓度的碱土族氯化物溶液内,研究了来自江浙蝮蛇(AgkistrodonhalysPallas)毒的酸性与碱性磷脂酶外A2(PLA2)的热变性过程。得到表征这两种酶溶液构象变化的热力学参数。依据这些参数研究了两者的溶液构象及其变化。在pH4.5以下,分子净荷正电的这两种酶在溶液中不形成可热致伸展的有序构象;pH高于4.5时,Asp和Glu的侧链羧基以负离子形式存在有利于有序构象的稳定。His是决定PLA2活力和热稳定性的重要残基。磷酸根离子和这两种酶有结合作用而降低有序构象的热稳定性。碱土族阳离子除和这两种酶结合外,还以依赖于离子强度的方式复杂地影响酶的溶液构象,但其作用不完全是静电性的,是或多或少地随离子的不同而不同的。计算给出酸性PLA2的△Hcd. 相似文献
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脑缺血诱导Ca~(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ自身磷酸化的抑制作用张光毅,唐放鸣,赵昇皓(徐州医学院生化教研室,221002)关键词脑缺血;Ca~(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ;自身磷酸化兴奋住氨基酸通过其突触后膜受体导致ode内流,不仅具有诱导和... 相似文献