姜黄素对顺铂所致胃组织ICC损伤的保护作用及机制

目的:探索顺铂对胃组织Cajal间质细胞(Cajal interstitial cells,ICCs)结构和功能的损伤以及姜黄素的保护作用。方法:选用成年雄性昆明种小鼠,随机分为对照组、顺铂组和顺铂+姜黄素组,每组各10只。姜黄素(200 mg/kg/d)混悬液连续灌胃15天。顺铂于实验结束前5天开始腹腔注射(2 mg/kg/d)共5天。计算每只小鼠最后5天的体重增减值,停药24 h后测量小鼠的胃排空率。电镜检测胃组织ICC超微结构,并测定特异性反映ICC功能变化的Ano1蛋白和m RNA的表达情况。结果:注射顺铂后各组小鼠的体重和胃排空率均显著降低(P0.01);与顺铂组相比,姜黄素预先灌胃组小鼠体重下降较少(P0.01),胃排空率有所回升(P0.05)。注射顺铂后,胃组织中ICCs受损,尤其与周围神经和肌肉间的缝隙连接增大甚至断裂,而姜黄素可以减轻这种损伤。同时,顺铂组胃组织中Ano1 m RNA和蛋白表达均下降(P0.01),加姜黄素组有所改善(P0.05)。结论:而姜黄素可通过减轻顺铂所致胃组织ICC结构损伤以及增强Ano1表达进而增强ICC慢波起博功能。     

顺铂耳毒性大鼠耳聋模型的研究

摘要 目的：探讨顺铂对大鼠造成的听力损伤及耳蜗细胞形态学变化。方法：体内实验,运用顺铂腹腔注射的方法,连续七天注射,通过听性脑干反应检测,观察顺铂对不同日龄的大鼠听力损伤情况;测听后取耳蜗,通过基底膜铺片和冰冻切片的免疫荧光染色,观察听力损伤后对耳蜗毛细胞和螺旋神经元的影响。体外实验,耳蜗器官培养免疫荧光染色,观察顺铂对耳蜗毛细胞和螺旋神经元的影响。结果：顺铂具有耳毒性,会对大鼠听力造成损伤,高频听力损伤更加严重,而且对不同日龄的大鼠造成的听力损失不同,小日龄的大鼠对顺铂耳毒性更加敏感。体内实验,顺铂耳毒性造成听力损失,会引起大鼠耳蜗毛细胞的缺失,但未观察到明显的螺旋神经元缺失,也没有观察到明显的Cleaved caspase-3阳性螺旋神经元细胞。体外实验,可以观察到顺铂同时引起毛细胞和螺旋神经元产生明显的损伤。结论：体、内外实验,都可以建立稳定的顺铂耳毒性大鼠耳聋模型,对研究顺铂损伤耳蜗毛细胞的发生机制和保护奠定了实验基础。     

三七总皂苷联合顺铂对胃癌大鼠肾损伤的改善作用及机制分析

摘要 目的：探讨三七总皂苷联合顺铂对胃癌大鼠肾损伤的改善作用并分析潜在机制。方法：选择60只健康SD雄性大鼠分为对照组、胃癌模型组、顺铂组及三七总皂苷组,各15只。除对照组外,其余组大鼠采用皮下接种胃癌BGC823细胞悬液法建立胃癌模型。建模成功后,给予对照组和胃癌模型组大鼠生理盐水腹腔注射和灌胃,给予顺铂组大鼠腹腔注射25 mg/kg顺铂注射液并灌胃生理盐水,给予三七总皂苷组大鼠腹腔注射25 mg/kg顺铂注射液并灌胃30 mg/kg三七总皂苷。分别于建模成功时、药物处理28 d时采用酶联免疫吸附法检测血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）和尿液β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）、肾损伤分子1（KIM-1）水平。处死大鼠后取肾脏,分别测定肾脏组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）水平,制备肾脏组织石蜡切片并行苏木精-伊红染色后观察大鼠肾组织的病理学变化。采用TUNEL染色法检测肾脏组织细胞凋亡情况,采用Western Blotting法检测肾脏组织中LC3、HIF-1α和Beclin1 蛋白表达情况。结果：顺铂组和三七总皂苷组大鼠血清SCr、BUN和尿液NAG、KIM-1水平均显著高于对照组和模型组（P<0.05）,三七总皂苷组大鼠血清SCr、BUN和尿液NAG、KIM-1水平显著高于顺铂组（P<0.05）。三七总皂苷组大鼠肾脏组织SOD、GSH水平显著低于模型组但显著高于顺铂组,MDA显著高于模型组但显著低于顺铂组（P＜0.05）,CAT与模型组无显著差异（P＜0.05）,但显著高于顺铂组（P>0.05）。顺铂组大鼠肾小管明显扩张、管腔狭窄,基底层上皮细胞水肿、坏死并形成空泡,肾小管。三七总皂苷组大鼠肾脏病理学改变程度显著轻于顺铂组。顺铂组和三七总皂苷组大鼠肾脏组织细胞凋亡指数显著增加,三七总皂苷组大鼠肾脏组织细胞凋亡指数显著低于顺铂组（P＜0.05）。顺铂组大鼠肾脏组织中LC3、HIF-1α和Beclin1蛋白水平均显著高于模型组,但显著低于三七总皂苷组（P＜0.05）。结论：三七总皂苷可能通过减轻过氧自由基和过氧化水平、增强线粒体自噬水平减少肾组织细胞凋亡,减轻顺铂引起的胃癌大鼠肾损伤。     

Orexin-A通路对胃运动的调控研究

目的:探讨下丘脑外侧核(LHA)-伏隔核(NAcc)orexin-A神经和功能通路构成及该通路对胃运动的影响及潜在机制。方法:将健康成年雄性Wistar大鼠随机分为逆行追踪组和胃运动组:逆行追踪组大鼠采用逆行追踪技术结合免疫荧光组织化学染色法,观察下丘脑外侧核-伏隔核间是否存在orexin-A神经通路;胃运动组大鼠通过在体胃运动研究,观察伏隔核内微量注射不同浓度orexin-A对大鼠胃运动幅度和频率的影响,以及电刺激下丘脑外侧核后,大鼠胃运动的变化及机制。结果:荧光逆行追踪结合荧光免疫组织化学染色结果显示:下丘脑外侧核内有荧光金和orexin-A双重标记的神经元。胃运动研究结果显示:伏隔核内微量注射orexin-A,大鼠胃运动幅度和频率显著增加,并呈现显著剂量依赖关系(P0.05),伏隔核预先微量注射SB-334867,可反转该效应(P0.05)。电刺激下丘脑外侧核,大鼠胃运动幅度和频率显著增强(P0.05)。同样,伏隔核内微量注射SB-334867,再电刺激下丘脑外侧核,电刺激导致的胃运动增强效应显著减弱(P0.05)。结论:下丘脑外侧核-伏隔核存在orexin-A神经和功能通路,该通路可能通过orexin-A受体介导参与胃动力和能量代谢调控。     

丙戊酸协同顺铂抑制乳腺癌和结直肠癌细胞生长

摘要 目的：探究丙戊酸（Valproic acid, VPA）协同顺铂抑制乳腺癌和结直肠癌细胞增殖。方法：首先使用Western blot 检测 VPA 对Acetyl-Histone H3蛋白水平的影响,使用Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测 VPA 对乳腺癌和结直肠癌细胞的细胞活力的影响。其次单药顺铂、VPA 和联合用药处理乳腺癌细胞 MDA-MB-231 和结直肠癌细胞 HCT-15,使用 IncuCyte 动态检测细胞生长过程和生长终点。结果：发现VPA 可抑制组蛋白去乙酰化酶的功能,升高Acetyl-Histone H3的蛋白水平,VPA 可抑制乳腺癌细胞和结直肠癌细胞增殖,且对 VPA 的药物敏感性相似;顺铂和 VPA 连用后可显著抑制乳腺癌和结直肠癌细胞增殖和活力。结论：本文发现 VPA 抑制组蛋白去乙酰化酶发挥抑制乳腺癌和结直肠癌细胞生长的新机制,并可以与顺铂连用提高抗肿瘤效果和药物敏感性,为同时患有癫痫和肿瘤的人群提供新的治疗思路。     

Orexin-A对大鼠胃功能的影响

目的:探讨Orexin-A对大鼠胃功能的影响。方法:通过大鼠迷走神经复合体微量注射Orexin-A后,观察大鼠胃运动、胃液和胃酸分泌的变化。结果:DVC微量注射Orexin-A后,大鼠胃收缩幅度以及收缩频率明显升高,且呈明显剂量依赖关系(P0.05),SB334867可显著阻断Orexin-A对促胃运动效应(P0.05)。DVC微量注射orexin-A后,大鼠胃液及胃酸分泌且呈剂量依赖性增加(P0.05)。结论:迷走神经复合体微量注射Orexin-A能影响胃的运动以及胃内体液的分泌。     

间充质干细胞联合铂类对肝癌大鼠抗癌效果及对免疫功能、细胞凋亡的影响

摘要 目的：探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）联合顺铂（cis-diamminodichloroplatinum Ⅱ dichloride,DDP）对肝癌大鼠抗癌效果及其免疫功能和细胞凋亡水平的影响。方法：将40只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、DDP组和联合组,各10只。除空白对照组外,其余均采用二乙基亚硝胺饲喂法建立肝癌模型。造模成功后,空白对照组和模型组大鼠静腹腔注射生理盐水并经尾静脉注射DMEM培养液,DDP组大鼠经腹腔注射DDP溶液并经尾静脉注射DMEM培养液,联合组大鼠经腹腔注射DDP溶液并经尾静脉注射BMSCs悬液。移植BMSCs两周后处死大鼠,称量肝脏质量和体质量,采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠外周血中白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、IL-8、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）水平,采用TUNEL技术检测肝细胞凋亡指数。结果：（1）模型组肝脏质量、肝脏质量/体质量均显著大于其他各组,体质量显著小于其他各组（P<0.05）。联合组肝脏质量、肝脏质量/体质量均显著显著小于模型组和DDP组,体质量显著大于模型组和DDP组（P<0.05）。（2）DDP组和联合组大鼠治疗后血清IL-2水平显著升高,IL-8和TNF-α水平显著降低（P<0.05）。联合组大鼠治疗后血清IL-2水平显著高于DDP组,IL-8和TNF-α水平显著低于DDP组（P<0.05）。（3）DDP组和联合组大鼠治疗后血清VEGF和HIF-1α水平显著降低,且显著低于模型组（P<0.05）。联合组大鼠治疗后血清VEGF和HIF-1α水平显著低于DDP组（P<0.05）。（4）联合组和DDP组肝癌细胞凋亡指数显著高于模型组,且联合组也显著高于DDP组（P<0.05）。结论：BMSCs联合DDP能够显著改善肝癌大鼠免疫功能,抑制肿瘤血管生成,促进肝癌细胞凋亡,效果优于DDP单药。     

Orexin在隔核对大鼠胃传入信息的调控

目的:研究orexin在隔核对大鼠胃传入信息的调控作用。方法:选取健康成年雄性Wistar大鼠138只(体质量250-300 g),记录神经元放电活动,鉴定隔核胃牵张(GD)敏感性神经元;隔核微量注射orexin-A或orexin-A受体拮抗剂SB334867,观察隔核GD敏感性神经元放电活动变化;隔核微量注射不同浓度的orexin-A,观察大鼠胃运动的变化。结果:隔核微量注射orexin-A的大鼠胃运动幅度和频率显著增加,并呈剂量依赖关系(P0.05-0.01),微量注射SB-334867可完全阻断orexin-A对胃运动的影响。隔核微量注射orexin-A后,有36个GD-E神经元兴奋(P0.01),16个GD-I神经元抑制。Orexin-A受体拮抗剂SB334867可完全阻断orexin-A对GD敏感神经元的作用。结论:隔核注射orexin能促进大鼠胃运动,并影响胃牵张敏感神经元的放电活动。     

Ghrelin对改善心衰大鼠左室功能紊乱的作用研究

目的:慢性心力衰竭(CHF)患者终末期阶段常发生左室(LV)重塑和心脏性恶病质,有研究称Ghrelin可能对CHFLV功能和能量代谢产生保护作用。本文旨在探讨Ghrelin对CHF大鼠LV功能紊乱和心源性恶病质的作用。方法:建立左冠状动脉结扎术和假手术组,手术后4周,给予大鼠Ghrelin或生理盐水3周。用超声心动图和心脏导管术监测结果。结果:与给予安慰剂组相比,用Ghrelin治疗的CHF和假手术组,血浆GH和胰岛素样生长因子1明显升高(t=1.49,t=0.71,P0.05)。与Sham-Placebo组相比,CHF-Placebo组大鼠体重明显减轻(t=2.18,P0.05)。然而与CHF-Placebo组相比,CHF-Ghrelin组大鼠,体重(t=3.89,P0.05),心输出量(t=3.28,P0.05),LV dP/dtmax(t=3.90,P0.05)明显增加。Ghrelin增加了CHF大鼠心脏舒张压,抑制LV扩大,增加LV缩短分数。结论:长期注射Ghrelin可改善CHF大鼠LV功能紊乱,减缓LV重构和心脏性恶病质的发展,有望为CHF的治疗提供新的途径和方法。     

顺铂联合VEGF抗体对食管癌移植瘤小鼠免疫调节以及癌细胞增殖和肺转移的影响

摘要 目的：研究顺铂联合血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）治疗对食管癌移植瘤小鼠免疫功能、癌细胞增殖以及肺转移的影响。方法：30只BALB/c小鼠通过皮下注射食管癌移植瘤模型。一周后,30只食管癌移植瘤模型小鼠被随机均分为3组,即模型组、顺铂组和联合组。模型组不进行治疗,顺铂组腹腔注顺铂治疗,联合组腹腔注射顺铂联合尾静脉注射VEGF抗体进行治疗,共治疗7周。比较各组小鼠体重,食管癌移植瘤体积和重量,卵巢癌细胞肺组织转移结节数、癌细胞转移面积和转移病灶总数,以及食管癌移植瘤外周血CD4⁺、CD8⁺以及CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞比例。结果：（1）顺博组和联合组小鼠体重均显著高于对照组,而联合组小鼠体重显著高于顺铂组（P<0.05）;（2）顺铂组和联合组小鼠CD4+和CD8+细胞比例均显著低于对照组（P<0.05）,而CD4⁺/CD8⁺却显著高于对照组（P<0.05）;（3）联合组小鼠CD4⁺和CD8⁺细胞比例均显著高于对照组（P<0.05）,而CD4⁺/CD8⁺却显著低于顺铂组（P<0.05）;（4）顺铂组和联合组小鼠食管癌肿瘤组织体积和重量,肺转移结节数、转移面积和转移病灶数均显著低于对照组（P<0.05）,而联合组小鼠显著低于顺铂组（P<0.05）。结论：VEGF抗体可以显著增强顺铂在体内对食管癌的抗癌特性,并有助于增强食管癌移植瘤小鼠免疫功能、抑制癌细胞体内增殖和肺部转移。     

侧脑室微量注射大麻素受体拮抗剂对orexin-A诱导大鼠能量代谢改变的影响及潜在机制研究

目的:探讨大麻素1型受体(CB1)抑制剂利莫那班对下丘脑外侧区(LHA)微量注射orexin-A诱导的小鼠能量代谢及相关行为变化改变的影响。方法:通过侧脑室微量注射(icv)利莫那班,同时LHA微量注射orexin-A,测量小鼠能量代谢、自主运动的变化,杏仁核(CeA)内多巴胺释放能力以及小鼠摄食量的变化。结果:侧脑室微量注射利莫那班可减弱因LHA微量注射orexin-A引起的小鼠能量代谢变化,降低小鼠自主运动,并且减弱小鼠CeA内多巴胺释放能力。注射(icv)利莫那班未改变LHA微量注射orexin-A所诱导的摄食量增多。此外,LHA双侧注射利莫那班可阻断LHA内注射orexin-A对运动活性的促进作用,但不影响小鼠的摄食量。结论:大麻素受体涉及orexin-A诱导的小鼠中脑边缘系统多巴胺系统活化的调控,对能量代谢及自主运动也有影响,但对食物摄入的调节无明显影响。     

Ghrelin对大鼠摄食的影响及orexins信号通路的调控

目的:探究Ghrelin对大鼠摄食的影响及orexins信号通路的调控作用。方法:采用免疫组织化学染色的方法观察Ghrelin免疫阳性神经元轴突末梢与orexin神经元的突触联系以及下丘脑外侧区(LHA)内c-fos的表达。侧脑室注射抗-orexin-A IgG和抗-orexin-B IgG混合液、抗-黑色素浓集激素(MCH)IgG、NPY-1受体拮抗剂后测量大鼠摄食量,观察其对ghrelin诱导摄食的影响。结果:Ghrelin免疫阳性神经元轴突末梢与orexin神经元的突触相接触。侧脑室注射ghrelin可诱导orexin神经元内c-fos表达,但是没有引起MCH神经元内c-fos的表达。预先注射抗-NPY IgG抗体,ghrelin仍然可诱导orexin神经元内c-fos表达。侧脑室预先注射抗-orexin-A IgG和抗-orexin-B IgG抗体可减弱ghrelin促摄食作用,但是预先注射抗-MCH IgG抗体对ghrelin诱导的摄食作用没有明显影响。注射NPY受体拮抗剂可进一步加强抗-orexin-A IgG抗体和抗-orexin-B IgG抗体对ghrelin诱导摄食的抑制效应。结论:ghrelin可能与orexin系统相互作用共同参与摄食和能量平衡的调控。     

黑树莓多酚经调节STAT3/Survivin信号途径对胃癌大鼠的作用机制分析

摘要 目的：分析黑树莓多酚经调节STAT3/Survivin信号途径对胃癌大鼠的作用机制。方法：选取40只雄性健康SD大鼠,取10只作为空白对照组,另30只制备胃癌大鼠模型,建模成功后分为模型组和黑树莓多酚（低、高剂量）组,各组10只;给予黑树莓多酚（低、高剂量）组大鼠5%、10%黑树莓多酚饲料喂养,给予空白对照组和模型组大鼠给予普通饲料喂养,持续干预8周后测量大鼠体质量和肿瘤体积;并采用Western blot检测STAT3、Survivin蛋白表达水平;采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测组织病理学和炎症因子水平。结果：黑树莓多酚（低、高剂量）组体质量、肿瘤体积均低于模型组,高剂量组明显低于低剂量组（P＜0.05）。STAT3、Survivin蛋白表达水平比较,黑树莓多酚（低、高剂量）组均低于模型组,高剂量组明显低于低剂量组（P＜0.05）。黑树莓多酚（低、高剂量）组胃动素（MTL）、胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃泌素（GAS）水平明显高于模型组,高剂量组明显高于低剂量组（P＜0.05）。白介素1（IL-1）、白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平比较,黑树莓多酚（低、高剂量）组显著高于模型组,高剂量组显著高于低剂量组（P＜0.05）。结论：黑树莓多酚通过调节STAT3/Survivin信号途径的方式有利于抑制胃癌大鼠肿瘤生长,并有效调节胃肠激素,改善胃功能,同时还能通过影响炎症因子水平的方式干扰胃癌进展。     

不同天数姜黄素灌胃对顺铂所致小鼠胃排空障碍的作用

目的:探讨不同天数姜黄素灌胃对顺铂所致小鼠胃排空障碍的作用及其是否通过减轻氧化损伤发挥作用。方法:健康成年昆明种小鼠,随机分为对照组、顺铂组、姜黄素组和顺铂+姜黄素灌胃1天、5天、10天、15天、20天和30天组,每组8只。用药结束后24小时测量胃残留率并取胃组织检测MDA和SOD含量。结果:注射顺铂后,各组小鼠体重明显减轻,姜黄素灌胃10~30天可明显减轻顺铂导致的体重减少(P0.05);注射顺铂后各组胃残留率升高(P0.05),而姜黄素预先灌胃10~30天可明显减轻顺铂导致的胃残留率增高(P0.05),各组间治疗效应无明显差异。姜黄素灌胃1~5天组小鼠体重和胃残留率都无显著改善。各组胃组织中MDA和SOD含量差异无统计学意义(P0.05)。结论:姜黄素预先灌胃10天以上可改善顺铂所致的小鼠胃排空障碍,但延长天数并不会有进一步改善;其作用可能不主要通过抗氧化途径。     

Ghrelin对糖尿病大鼠下丘脑弓状核胃扩张敏感神经元和胃运动的影响

目的:探讨Ghrelin对糖尿病大鼠下丘脑弓状核胃扩张敏感神经元和胃运动的影响。方法:逆行追踪结合免疫组化观察ARC中GHSR-1的表达,细胞外放电记录,观察ghrelin对GD神经元放电活动的影响及电刺激ARC对GD神经元放电活动和胃运动的影响。结果:电生理实验结果表明,在ARC Ghrelin能够能激发GD兴奋性神经元(GD-E)和GD抑制性神经元(GD-I)。然而,ghrelin可以兴奋更少的GD-E神经元,在正常大鼠中ghrelin对于GD-E的兴奋作用比在DM大鼠中的作用弱。在体胃运动研究表明,在ARC中微量注射ghrelin可以明显的增强胃运动,并且呈现剂量依赖关系。Ghrelin在糖尿病大鼠促胃动力作用低于正常大鼠。Ghrelin诱导的效应可被生长激素促分泌素受体(GHSR)拮抗剂阻断[d-lys-3]-GHRP-6或bim28163。放射免疫法和实时荧光定量PCR数据表明胃血浆ghrelin水平,在ARC ghrelin mRNA的表达水平先上升后下降,糖尿病大鼠(DM)中,在ARC中GHSR-1a mRNA表达保持在一个比较低的水平。结论:ghrelin可以调节GD敏感神经元以及胃运动,通过ARC中ghrelin受体。在糖尿病大鼠中,Ghrelin促进胃运动作用减弱可能与ARC中ghrelin受体表达减少有关。     

内源性Orexin-A调控大鼠胃运动的中枢及外周机制

目的:探讨内源性Orexin-A(OXA)对大鼠胃运动的中枢和外周作用机制。方法:选取成年Wistar大鼠为研究对象,通过禁食诱导大鼠合成内源性OXA。血浆OXA浓度采用放射免疫法测定。实验前大鼠注射OXA受体拮抗剂SB334867,观察内源性OXA的作用。迷走神经切断术用来观察迷走神经的介导作用。胃排空采用分光光度法测量,消化间期胃运动通过在胃窦部植入一应力传感器测量。Orexin前体(PPO)在胃和下丘脑组织的表达,采用蛋白印迹确定。结果:禁食18 h后,血浆OXA水平和PPO蛋白表达显著增加(P0.05),在禁食36 h组达到最高水平(P0.01)。内源性OXA促进胃排空(P0.05),抑制消化间期胃蠕动(P0.05)。外周注射SB334867均能阻断上述胃动力效应(P0.05),但对PPO表达没有影响。迷走神经切断术不能阻断内源性OXA的介导作用(P0.05)。结论:禁食能诱导内源性OXA的合成,内源性OXA能加速胃排空,同时它又抑制消化间期胃蠕动。