MFN1在肝癌转移中的调控作用研究

目的:探讨线粒体融合蛋白MFN1(mito-fusion 1)在肝癌转移中的作用及其机制。方法:1).采用免疫组化实验检测15对肝癌转移灶组织与原发灶组织中MFN1的表达,以明确肝癌转移时是否伴有MFN1表达的改变。2).采用si RNA (small interference RNA)下调肝癌细胞中MFN1的表达后,提高Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测其迁移和侵袭能力,通过实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和Western blot实验分别检测基质金属蛋白酶1 (matrix metalloproteinase 1,MMP1)、MMP2、MMP7及MMP9的m RNA和蛋白表达。结果:1)肝癌转移灶组织中MFN1表达显著低于原发灶组织(P0.05)。2).下调MFN1表达后,肝癌细胞的迁移和侵袭能力显著升高,MMP7的表达显著增加,而MMP1、MMP2与MMP9的表达无明显变化。结论:线粒体融合蛋白MFN1在肝癌转移组织中表达显著降低,可能通过激活MMP7表达,促进肝癌细胞侵袭和转移。     

Calpain2对肝癌细胞浸润和转移能力的影响

目的：肝细胞癌（HCC）是一类常见的恶性肿瘤,主要表现为进展迅速、易复发及预后不良。侵袭转移作为肝癌的最主要的恶性表型,是造成较高致死率的主要原因。Calpain是钙激活中性蛋白酶,广泛参与了细胞多种生命过程。其中Calpainl和Calpain2是Calpain家族主要成员,对于维持肿瘤细胞恶性表型有重要作用。本研究通过RNA干涉技术下调人肝癌Huh7细胞中Calpain2基因的表达,检测下调Calpain2对人肝癌Huh7细胞黏附,侵袭和迁移能力的影响,明确Calpain2在人肝癌细胞浸润和转移过程中的作用。方法：合成Calpain2的RNAi片段,瞬时转染人肝癌细胞Huh7,降低Hull7细胞中Calpain2的表达,运用细胞黏附实验,细胞侵袭实验及划痕愈合实验检测干涉Calpain2对肝癌细胞的黏附,侵袭和迁移能力的影响。结果：合成Calpain2的RNAi片段。瞬时转染人肝癌细胞Huh73,36小时后,细胞中Calpain2的蛋白水平明显下降,干涉Calpain2后人肝癌细胞Huh7的黏附率,侵袭率及划痕修复率的显著下降。结论：以上实验结果表明Calpain2能够促进肝癌细胞黏附,侵袭及划痕修复能力,Calpain2能够促进肝癌细胞的浸润和转移的作用,是肝癌发生发展过程中的肿瘤促进因子。因此,Calpain2可以作为抑制肝癌侵袭和转移的潜在靶点,靶向Call＇ain2的药物可能成为治疗肝癌侵袭转移的新方法。     

Smad7对肝癌细胞增殖和迁移的影响及其临床意义

目的:探究Smad7对肝癌细胞增殖和迁移的影响及其临床意义。方法:通过转染pcDNA3.1(+)-Smad7质粒或Smad7的小干扰RNA使得Smad7在肝癌细胞系HepG2和Huh7中过表达或敲减,应用MTT法检测Smad7对肝癌细胞增殖的影响,采用细胞划痕实验以及Transwell实验探讨Smad7对肝癌细胞迁移的影响。采用qRT-PCR检测9例肝癌癌患者手术切除的组织样本中Smad7的表达。结果:过表达Smad7的肝癌细胞增殖能力与对照组相比有明显的下降,而敲减smad7能够促进肝癌细胞的增殖。过表达smad7的肝癌细胞穿过Transwell小室底膜的能力显著下降,而敲减Smad7能够促进这种能力。Smad7在肝癌癌旁组织中的表达显著高于癌组织。结论:Smad7能够在肝细胞肝癌的进展中发挥负向调控作用。     

RNA干扰肝细胞肝癌中PECAM-1的表达对肿瘤细胞侵袭及增殖的影响

目的:探讨PECAM-1在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及意义。方法:选择2013年5月-2015年6月在我院接受治疗的HCC患者100例,收集肝癌患者HCC组织及癌旁组织,另选取100例正常肝脏组织作为对照组。应用免疫组织化学法检测PECAM-1在肝癌组织、癌旁组织以及正常肝脏组织中的阳性表达。利用小分子干扰RNA技术(si RNA)构建低表达的PECAM-1,并转染至肝癌细胞中抑制PECAM-1的表达。应用Transwell小室法检测肝癌细胞的侵袭能力,CCK-8法检测肝癌细胞的增殖能力。结果:PECAM-1在肝癌组织、癌旁组织及正常肝脏组织中呈不同程度阳性表达(P0.05);PECAM-1在肝癌组织及癌旁组织中的表达显著高于正常肝脏组织,差异具有统计学意义(P0.05);PECAM-1在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P0.05);转染si RNA PECAM-1后,肝癌细胞中PECAM-1 m RNA的表达水平明显下降,PECAM-1蛋白表达也明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);转染si RNA PECAM-1后,肝癌细胞侵袭及增殖能力明显降低,差异具有统计学意义(P0.001)。结论:PECAM-1在肝癌患者血清中高表达,PECAM-1 si RNA能够抑制肝癌细胞的侵袭及增殖能力,提示PECAM-1可作为预测肝癌发生及发展的临床指标。     

苯胺嘧啶衍生物X-9通过下调整合素β1表达抑制肝细胞癌迁移侵袭

整合素在许多肿瘤细胞中高表达,并且参与肿瘤细胞的侵袭转移。在肝细胞癌中,整合素β1被报导高表达,并促进肿瘤细胞的侵袭。目前,对于整合素的表达调控癌细胞机制以及干预其表达进而抑制肿瘤细胞转移的研究较少。本研究探讨利用小分子化合物抑制整合素表达来抑制肿瘤细胞迁移和侵袭的可能。首先,对临床肝癌细胞患者癌组织和癌旁组织中的整合素β1的表达进行检测,发现其在癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P<0.05）。对TCGA肿瘤数据库的生物信息学分析结果同样显示,整合素β1的高表达与肝癌的分期（P=0.019）和预后（P=0.013）相关。通过筛选发现,苯胺嘧啶衍生物X09可以抑制肝癌细胞中整合素β1的mRNA和蛋白质的表达（P<0.01）。细胞划痕愈合实验和细胞穿孔实验结果显示,苯胺嘧啶衍生物X-9能够抑制肝癌细胞的迁移和侵袭（P<0.01）。进一步的研究证实,在肝癌细胞中外源表达整合素β1可以逆转X-9对肝癌细胞迁移和侵袭的抑制;而在敲低整合素β1的细胞中,X-9对细胞的迁移和侵袭的抑制被消除。因此,鉴定出苯胺嘧啶衍生物X-9可以通过下调整合素β1表达,进而抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。     

苯胺嘧啶衍生物X-9通过下调整合素β1表达抑制肝细胞癌迁移侵袭

整合素在许多肿瘤细胞中高表达,并且参与肿瘤细胞的侵袭转移。在肝细胞癌中,整合素β1被报导高表达,并促进肿瘤细胞的侵袭。目前,对于整合素的表达调控癌细胞机制以及干预其表达进而抑制肿瘤细胞转移的研究较少。本研究探讨利用小分子化合物抑制整合素表达来抑制肿瘤细胞迁移和侵袭的可能。首先,对临床肝癌细胞患者癌组织和癌旁组织中的整合素β1的表达进行检测,发现其在癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P<0.05）。对TCGA肿瘤数据库的生物信息学分析结果同样显示,整合素β1的高表达与肝癌的分期（P=0.019）和预后（P=0.013）相关。通过筛选发现,苯胺嘧啶衍生物X09可以抑制肝癌细胞中整合素β1的mRNA和蛋白质的表达（P<0.01）。细胞划痕愈合实验和细胞穿孔实验结果显示,苯胺嘧啶衍生物X-9能够抑制肝癌细胞的迁移和侵袭（P<0.01）。进一步的研究证实,在肝癌细胞中外源表达整合素β1可以逆转X-9对肝癌细胞迁移和侵袭的抑制;而在敲低整合素β1的细胞中,X-9对细胞的迁移和侵袭的抑制被消除。因此,鉴定出苯胺嘧啶衍生物X-9可以通过下调整合素β1表达,进而抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。     

人肝内胆管癌细胞PRL-3 的表达与侵袭转移研究

目的:探讨PRL-3在人肝内胆管癌侵袭转移中的作用.方法:利用小RNA技术干扰肝内胆管癌细胞株PRL-3表达,并采用细胞划痕实验和Transwell体外侵袭实验评价PRL-3对肝内胆管癌细胞侵袭转移能力的影响.结果:RT-PCR和Western blot结果均显示转染PRL-3特异性siRNA-2组PRL-3表达明显降低(P＜0.05).PRL-3 siRNA-2组在划痕培养24h后划痕区域宽度占初始划痕区域宽度的百分比为(62.12±6.28)％,阴性对照组为(23.88±2.55)％,空白对照HCCC-9810组为(21.20±6.07)％.PRL-3siRNA-2组细胞的划痕两端距离相比明显较宽,分别与阴性对照组细胞和空白对照HCCC-9810组细胞相比均有统计学意义(P＜0.05),后两者无显著性差异(P＞0.05).Transwell体外侵袭实验结果显示,PRL-3 SiRNA-2组细胞侵袭能力明显减弱,穿膜细胞数为(19.40±2.30)个/HP,明显少于阴性对照组(64.00±2.73)个/HP和正常HCCC-9810组(67.20±3.l1)个/HP,差异有显著性(P＜0.05);正常HCCC-9810组和阴性对照组无明显差异(P＞0.05).结论:PRL-3特异性siRNA能够抑制肝内胆管癌细胞HC-CC-9810中内源性PRL-3的表达,并可以明显抑制肝内胆管癌细胞的迁移侵袭能力.     

肌动蛋白结合蛋白对肝癌细胞迁移与侵袭能力的影响及其机制研究

该文旨在探讨肌动蛋白结合蛋白(actin-binding protein,ANLN)对肝癌细胞迁移与侵袭能力的影响。应用荧光定量PCR(q RT-PCR)检测ANLN在肝癌组织和癌旁组织中的表达差异,运用慢病毒介导sh RNA干扰技术靶向敲低肝癌细胞Huh-7中ANLN的表达,并通过q RT-PCR和Western blot方法验证敲低效率;通过细胞迁移实验和侵袭实验检测肝癌细胞的迁移与侵袭能力。进一步通过q RT-PCR和Western blot检测ANLN基因敲低对基质金属蛋白酶9(matrix metallopeptidase 9,MMP9)m RNA和蛋白质水平的影响。最后,分析MMP9在ANLN敲低调控的肝癌细胞迁移侵袭过程中的作用。结果显示,在20例肝癌组织样本和癌旁组织中,ANLN在肝癌组织中m RNA水平较癌旁组织显著增高(P0.001)。其中,在发生转移的肝癌组织中,ANLN m RNA水平较无转移的肝癌组织显著增高(P0.001)。慢病毒介导sh RNA能显著抑制肝癌细胞中ANLN的表达,ANLN基因敲低能抑制肝癌细胞的迁移能力,并能显著抑制肝癌细胞的侵袭能力。机制研究发现,ANLN的基因敲低能显著抑制MMP9的表达,MMP9的过表达能逆转ANLN基因敲低对肝癌细胞迁移侵袭能力的抑制作用。该研究结果提示,在肝癌组织中,ANLN m RNA水平明显增高,ANLN的表达水平与迁移侵袭能力密切相关。ANLN基因敲低可能通过调节MMP9的表达,从而抑制肝癌细胞的迁移侵袭能力。     

沉默BCAT1对肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:研究BCAT1在肺癌细胞A549的增殖、迁移及侵袭能力中的作用。方法:通过小干扰RNA(si RNA)沉默A549细胞中BCAT1的表达,细胞分为对照组(Con)、BCAT1基因沉默组(si RNA-BCAT1)和si RNA阴性对照组(si RNA-NC)。利用Western blot检测si RNA对BCAT1的沉默效果;划痕愈合实验检测沉默BCAT1后A549细胞迁移能力的改变;Transwell小室侵袭实验检测沉默BCAT1后A549细胞侵袭能力的变化;MTT实验检测沉默BCAT1对A549细胞增殖能力的影响。结果:与Con组相比,si RNA-BCAT1组的BCAT1蛋白表达明显降低(P0.05),细胞划痕愈合率明显降低(P0.05),能够穿膜的细胞数明显减少(P0.05),而Con组和si RNA-BCAT1组细胞的增殖能力比较差异无明显统计学意义(P0.05)。结论:沉默BCAT1抑制A549细胞的迁移和侵袭能力,而对其增殖能力无影响。     

线粒体分裂蛋白FIS1通过诱导上皮间质转化促进肝癌侵袭与迁移

目的:研究线粒体分裂蛋白1(Mitochondrial fission protein 1,FIS1)介导的线粒体分裂对肝癌细胞侵袭与迁移的调控作用与机制。方法:采用免疫组化实验比较10对肝癌原发灶与转移灶组织中FIS1表达,以明确FIS1与肝癌转移的关系。通过si RNA干扰FIS1的表达后,用Transwell实验检测肝癌细胞迁移与侵袭能力的变化,q PCR与Western Blot检测上皮间质转化标志分子上皮型钙黏蛋白(epithelia cadherin,E-cadherin)、紧密连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)、神经型钙黏蛋白(neural cadherin,N-cadherin)、波形蛋白Vimentin的表达。结果:肝癌转移灶组织中FIS1的表达显著高于原发灶组织。干扰FIS1表达后,肝癌细胞迁移和侵袭能力均明显下降,细胞上皮间质转化标志蛋白E-cadherin和ZO-1的表达上调,而N-cadherin和Vimentin的表达下调。结论:线粒体分裂蛋白FIS1在肝癌转移灶组织中高表达,并可能通过调节细胞上皮间质转化促进肝癌细胞转移。     

shRNA抑制活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）对前列腺癌细胞C4-2表型的影响

目的:探讨AID在前列腺癌中的表达情况,AID对前列腺癌细胞C4-2的侵袭、迁移、增殖以及凋亡方面的影响。方法:应用靶向敲减AID的慢病毒对前列腺癌细胞C4-2进行干扰,运用Western-blot、免疫组化、平板克隆形成、流式、Transwell实验对前列腺癌组织和前列腺癌细胞C4-2表型的变化情况进行研究。结果:临床前列腺癌样本中AID高表达,良性前列腺增生组织中AID低表达,正常前列腺组织不表达(*P0.05);shRNA干扰以后的shAICDA-C4-2单克隆细胞株中AID的表达量显著降低,其增殖、迁移和侵袭能力阳性对照组(Monoclonal6)与阴性对照组(NC)相比分别降低49%、80%、63%,凋亡率阳性对照组(Monoclonal6)为阴性对照组(NC)的3.2倍。结论:前列腺癌组织中AID高表达,AID在促进前列腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制前列腺自细胞的凋亡中具有极其重要的作用。AID表达极可能与前列腺癌的进展、预后明显相关。     

自分泌运动因子在肝细胞癌侵袭及转移中的作用

目的:探讨自分泌运动因子(AMF)在人肝细胞癌侵袭和转移中的作用。方法:人肝细胞系LO2和人肝细胞癌细胞株MHCC97-H作为实验材料,检测二者AMF的表达水平;设计并合成针对AMF基因序列的双链小干扰RNA转染高转移性人肝癌细胞株MHCC97-H,Western blot检测AMF基因的蛋白的表达水平;通过MTT实验检测转染后细胞的增殖力;通过体外Transwell小室对比沉默AMF基因前后的肝癌细胞的迁移力和侵袭力;最后用细胞悬液皮下接种小鼠,观察沉默AMF基因前后肝细胞的成瘤能力。结果:AMF在MHCC97-H的表达量较高;将双链小干扰RNA转入MHCC97-H后,AMF的表达显著降低(P0.05);沉默AMF基因序列后,MHCC97-H的增殖力、迁移力和侵袭力均有明显下降(P0.05);用细胞悬液皮下接种小鼠沉默AMF基因的MHCC97-H形成的肿瘤体积小于对照组(P0.05)。结论:AMF基因可调节肝癌细胞的迁移和侵袭。     

线粒体E3泛素连接酶MARCH5表达上调促进肝癌生长

目的:膜相关锌指蛋白MARCH5(membrane-associated RING-CH 5)是定位于线粒体外膜的E3泛素连接酶,在调控线粒体分裂融合相关蛋白的表达中发挥重要作用。以往研究在多种肿瘤中证实了线粒体分裂融合的异常,但目前MARCH5在肝癌中的表达与生物学作用均不清楚。本研究旨在探讨MARCH5在肝癌组织与细胞系中的表达及其在肿瘤生长中的调控作用。方法:1).利用免疫组化实验检测62对肝癌癌与癌旁组织中MARCH5表达,以明确MARCH5在肝癌中的表达是否发生了异常改变。2).利用qRT-PCR与Western blot实验检测4株肝癌细胞(SNU-354、SNU-368、HLE与HLF)与1株正常肝细胞HL7702中MARCH5表达,进一步分析MARCH5在肝癌细胞系中的表达改变。3).下调肝癌细胞中MARCH5表达后,利用EDU实验与克隆形成实验分析对肝癌细胞增殖与克隆形成能力的影响。结果:1).MARCH5在肝癌组织中表达显著高于癌旁组织。2). MARCH5在4株肝癌细胞中的表达均显著高于正常肝细胞。3).下调MARCH5表达可显著抑制肝癌细胞的增殖与克隆形成。结论:MARCH5在肝癌中表达显著上调并通过诱导增殖与克隆形成而促进肝癌的生长。     

Sprouty-2对胃癌细胞上皮间质转化及侵袭转移的影响

目的:研究Sprouty2(SPRY2)基因在胃癌肿瘤细胞上皮间质转化(EMT)和侵袭转移的影响。方法:体外培养人胃癌细胞(BGC-823),采用慢病毒介导的sh RNA沉默SPRY2基因,并用实时定量PCR与Western blot检测其SPRY2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达,采用细胞划痕实验、Transwell实验检测SPRY2基因沉默后的胃癌细胞侵袭转移能力变化。结果:在慢病毒介导sh RNA沉默SPRY2基因的人胃癌BGC-823细胞中,SPRY2的m RNA和蛋白表达明显降低(P0.05),SPRY2沉默后人胃癌细胞E-cadherin的蛋白表达增多(P0.05),vimentin的蛋白表达减少(P0.05)。此外,SPRY2沉默后,胃癌细胞迁移能力和侵袭能力明显减弱(P值均P0.05)。结论:Sprouty-2基因通过调节E-cadherin与vimentin的表达参与胃癌细胞的上皮-间质转化,进而促进胃癌细胞的迁移与侵袭。     

STAMBPL1 promotes the progression of lung adenocarcinoma by inhibiting DHRS2 expression

BackgroundLung cancer is responsible for the majority of cancer deaths in the world. We found a significant increase of STAMBPL1 expression in lung adenocarcinoma (LUAD) tissues and cells. However, its mechanism has not been clarified.MethodsLUAD tissues and adjacent normal tissues were collected from 62 patients treated in the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University from August 2018 to August 2021. In vivo, the clinical data and STAMBPL1 expression of 62 patients with LUAD were analyzed by qPCR. In vitro, cell experiments were carried out after STAMBPL1 knockdown in A549 and H1299 cells to determine cell growth, migration rate, evasiveness, colony-forming ability, and apoptosis. Gene sequencing was used to explore the expression of various genes in A549 and H1299 cells to verify that DHRS2 was up-regulated after STAMBPL1 knockdown; cell experiments further detected the role of the DHRS2 gene after DHRS2 overexpression in A549 and H1299 cells. A rescue experiment was conducted to certify that STAMBPL1 promotes NSCLC progression by regulating DHRS2 expression.ResultsAfter STAMBPL1 knockdown by siRNA. Migration, invasion, colony formation, and proliferation of siRNA groups were suppressed than those of NC groups in A549 and H1299 cells, while the cell apoptosis rate of siRNA groups increased significantly. By using gene-sequence analysis, we found that the expression level of the DHRS2 gene was up-regulated in STAMBPL1 siRNA groups, compared with STAMBPL1 NC (negative control) groups in A549 and H1299, which was verified by qPCR and WB. Further experiments showed that the DHRS2 OE group was suppressed in cell proliferation, migration, and invasion in the A549 and H1299 cell lines compared to the DHRS2 NC group, while DHRS2 OE group was significantly enhanced in the cell apoptosis in the A549 and H1299 cell lines. According to the rescue experiment, cell proliferation, migration, and invasion of the STAMBPL1 SI+DHRS2 SI group were enhanced compared with the STAMBPL1 SI+DHRS2 NC group in A549 and H1299 cells, while the STAMBPL1 SI+DHRS2 OE group were further decreased.ConclusionsThe expression of STAMBPL1 mRNA is significantly up-regulated in LUAD, promoting the progression of LUAD by down-regulating the expression of DHRS2 and acting as a potential biomarker of LUAD.     

研究报告: 基于AS1411适配体的DNA-RNA杂交载体的抗肿瘤研究

目的 研究连接适配体的DNA-RNA分子作为杂交载体靶向肿瘤细胞并导入功能性RNA分子进入细胞的有效性，以及对肿瘤细胞的影响。方法 设计合成短的互补DNA、RNA分子，组装成DNA-RNA杂合链；连接AS1411适配体为靶向分子，再分别连接p21 saRNA和TIGIT siRNA作为药物分子，记为P21 saRNA和TIGIT siRNA，构成杂交载体，通用结构式为AS1411-DNA/RNA-sxRNA；检测AS1411-DNA/RNA-sxRNA能否靶向结合并进入肿瘤细胞及其对瘤细胞生存、迁移、侵袭和凋亡的影响。结果 将设计的杂交载体各部分等摩尔加入杂交缓冲体系并于特定温度条件下孵育，TBM聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到AS1411-DNA/RNA-sxRNA成功组装；AS1411-DNA/RNA-sxRNA杂交载体在10%血清条件下也显示出良好的抗降解稳定性；荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察，SKOV3细胞表面及胞内存在绿色大量荧光信号，杂交载体成功进入肿瘤细胞。杂交载体孵育后：在mRNA水平上，p21基因表达（2.14±0.25）是对照组（1.02±0.10）2倍以上，P<0.05；TIGIT基因表达（0.63±0.09）低于对照组（1.09±0.15），P<0.05；在蛋白质水平上，p21基因表达（1.57±0.16）是对照组（1.10±0.09）1.5倍以上，P<0.05；TIGIT基因表达（0.61±0.12）低于对照组（1.01±0.07），P<0.05。CCK-8实验显示，P21 saRNA（3.10±0.13）和TIGIT siRNA（2.91±0.13）杂交载体孵育组与空白对照组（3.67±0.15）相比，卵巢癌细胞增殖能力显著下降（P<0.05）；划痕实验结果显示，P21 saRNA孵育组愈合率（42.53±2.90）%、TIGIT siRNA孵育组愈合率（36.23±3.43）%，明显低于空白对照组（76.47±3.64）%，P<0.05；Transwell检测迁移能力发现：P21 saRNA孵育组（128.25±5.36）、TIGIT siRNA孵育组（119.50±8.79）低于对照组（186.5±8.56）；侵袭能力：P21 saRNA孵育组（145.5±9.45）、TIGIT siRNA孵育组（112.25±5.63）也显著低于对照组（202.50±10.12），P<0.05；细胞凋亡率：P21 saRNA孵育组（11.74%±2.47%）、TIGIT siRNA孵育组（17.12%±2.04%）明显高于对照组（5.66%±1.44%），P<0.05。结论 所制备的AS1411-DNA/RNA-sxRNA杂交载体能够有效靶向肿瘤细胞，携带功能性小RNA靶向导入肿瘤细胞并调控目的基因表达，使肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力受到抑制；该结果为利用DNA-RNA偶联AS1411适配体作为靶向工具的杂交载体，靶向杀伤表面表达NCL蛋白的肿瘤细胞提供了实验基础。     

miR-181a通过调控上皮间质转化过程影响卵巢癌细胞的迁移和侵袭

目的:探讨mi R-181a在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌细胞的迁移和侵袭的影响和可能机制。方法:采用细胞免疫荧光检测卵巢癌细胞中抗波形蛋白和E-钙粘蛋白的表达,Western blotting检测mi R-181a对抗波形蛋白和E-钙粘蛋白的表达情况的调控;划痕愈合实验检测mi R-181a对卵巢癌细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测mi R-181a对卵巢癌细胞侵袭能力的影响。结果:增加mi R-181a的表达后,EMT过程中的相关蛋白激活水平下调,mi R-181a一定程度上可以抑制卵巢癌细胞的EMT过程;过表达mi R-181a后可以明显影响Vimentin[D1(4.58±0.85)vs(0.29±0.02),P0.05;D5(4.16±0.79)vs(0.29±0.02),P0.05]和E-Cadherin[D1(4.75±0.41) vs.(4.56±0.38),P0.05;D5(2.19±0.18) vs.(4.56±0.38),P0.05]蛋白的表达;COC1细胞的迁移能力随mi R-181a的表达的增高而降低[(19.24±4.31)%vs.(25.95±6.02)%,P0.05;(51.25±8.75)%vs.(73.49±12.54)%,P0.05];过表达mi R-181a后可以一定程度上减弱卵巢癌COC1细胞的侵袭能力[(74.64±8.21)vs(231.98±21.72),P0.05]。结论:mi R-181a通过调控上皮间质转化过程影响卵巢癌细胞的迁移和侵袭行为。     

miR-223在结肠癌组织中的表达及促进结肠癌细胞迁移侵袭的机制研究

目的:探讨微小RNA-223 (mi R-223)在结肠癌组织中的表达及对结肠癌HT-29细胞侵袭、迁移能力的影响及机制。方法:检测mi R-223在结肠癌组织与癌旁组织中的表达。通过脂质体转染法将mi R-223模拟物(mi R-223 mimics,mi R-223 mimics组)及microRNA无关序列(mi R-223 NC,NC组)转染入结肠癌HT-29细胞。采用Real-time PCR检测转染后细胞中mi R-223和TWIST的表达,Western blot检测TWIST的蛋白表达,Tranwell检测细胞的迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告基因检测mi R-223对TWIST基因启动子活性的影响。采用Transwell迁移与侵袭实验检测mi R-223 mimic及Twist si RNA共转染后人结肠癌细胞系HT-29迁移与侵袭能力的变化。结果:与癌旁结肠组织比较,mi R-223在结肠癌组织中呈现明显高表达(P0.05);与空白对照组和mi R-223 NC组比较,转染mi R-223 mimics后的HT-29细胞中的mi R-223表达显著增加(P0.05)。与阴性对照组和空载转染组相比较,mi R-223 mimics转染组穿透的细胞数目明显增加(P0.05),且mi R-223 mimics转染组的细胞侵袭能力显著增强(P0.05)。与mi R-223 NC组和空白对照组比较,转染mi R-223 mimics的HT-29细胞的TWIST基因m RNA和蛋白表达均显著增加(P0.05)。双荧光素酶检验结果显示TWIST为mi R-223的下游靶基因。共转染TWIST si RNA和mi R-223 mimics的结肠癌HT-29细胞的迁移与侵袭能力较单独转染mi R-223 mimics的HT-29细胞显著减弱(P0.05)。结论:mi R-223可能通过上调下游靶基因TWIST水平促进结肠癌HT-29细胞的迁移与侵袭。     

miR-125a-5p转染对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及相关机制研究

摘要 目的：探究miR-125a-5p转染对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及相关机制。方法：将肝癌细胞分为对照组、下调组和上调组,并通过细胞转染建立稳定转染的下调组和上调组。MMT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测P13K/Akt通路中AKT、Bax、Bcl-2、P13K、P-AKT蛋白表达量。结果：与上调组相比,下调组24、48、72 h细胞增殖率,细胞侵袭、迁移细胞数,AKT、Bcl-2、P13K、P-AKT蛋白表达量显著降低,具有统计学差异（29.67±9.87 vs 17.34±5.71,t=5.192,P＜0.05、34.75±11.56 vs 15.17±5.04,t=7.365,P＜0.05、38.48±12.81 vs 12.51 ±4.13,t=9.153,P＜0.05,72.53±24.17 vs 36.28±12.07,t=6.365,P＜0.05、86.51±28.75 vs 46.28±15.32,t=5.858,P＜0.05,1.26±0.41 vs 0.81±0.26,t=4.397,P＜0.05、1.35±0.44 vs 0.76±0.24,t=5.584,P＜0.05、1.48±0.46 vs 0.79±0.26,t=6.194,P＜0.05、1.22±0.39 vs 0.73±0.24,t=5.584,P＜0.05）;与上调组相比,下调组24、48、72h细胞凋亡率,Bax蛋白表达量显著升高,具有统计学差异（17.62±5.84 vs 29.31±9.75,t=4.879,P＜0.05、14.97±4.65 vs 34.19±11.36,t=7.427,P＜0.05、11.26±3.74 vs 38.62±12.86,t=9.690,P＜0.05,0.75±0.24 vs 1.33±0.43,t=5.587,P＜0.05）。结论：下调miR-125a-5p的表达,可通过作用于P13K/Akt通路,调控AKT、Bax、Bcl-2、P13K、P-AKT蛋白表达量,进而起到抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡以及抑制肝癌细胞的侵袭、迁移能力。     

In vitro anticancer activity of extracted oil from Parrotiopsis jacquemontiana (Decne) Rehder

BackgroundParrotiopsis jacquemontiana, commonly referred to as “Beranj” in the local community, is widely used traditionally and has numerous health benefits. However, no studies have been conducted to investigate its anticancer potential, particularly its extracted oil.PurposeThe present study was put forth to appraise the anticancer potential of Parrotiopsis jacquemontiana extracted oil against liver (hcclm3 and hepg2) and breast cancer (mda-mb 231 and mcf-7) cell lines relative to normal cell lines (lo2 and mcf-10a) via MTT assay.MethodsFlow cytometry indicated the apoptotic effect whereas invasion and migration capabilities of oil against cancer cells were determined by Matrigel invasion chamber and wound-scratch assays.ResultsThe results of oil revealed a time and dose-dependent increase in cell proliferation inhibition, conferring to least IC50 shown against hcclm3 (144.9 ± 0.75 μg/ml) and mda-mb 231 (145.7 ± 0.32 μg/ml) cell line at 72 h, whereas no cytotoxic effect on normal cells was observed. In addition, the oil significantly (p < 0.001) suppressed the migration and invasion of hcclm3 and mda-mb 231 cells, showing noteworthy anti-metastatic potential. Furthermore, cell death was confirmed by Annexin‒V/PI staining where the maximum apoptotic percentage was calculated for oil (200 μg/ml) alongside mda-mb 231 conferring to 15.36 ± 1.22, 26.7 ± 1.2, and 36.43 ± 1.65 at 24, 48, and 72 h whereas 12.33 ± 1.05, 19.36 ± 1.62, and 29.3 ± 0.79 was recorded alongside hcclm3 at similar time intervals, respectively.ConclusionIn conclusion, the extracted oil exhibited strong anti-proliferative, anti-metastatic, and apoptotic effects and therefore may have potential applications in cancer treatment, however, further studies of oil regarding the action mechanisms and compounds involved in anticancer therapy are necessary.