白藜芦醇经PI3K/Akt/mTOR 信号通路诱导人肾癌786-O细胞自噬

白藜芦醇(resveratrol)可抑制人肾癌786-O细胞增殖,并诱导其凋亡,但是白藜芦醇对786-O细胞自噬(autophagy)的影响及机制尚不清楚。为探究其机制,体外培养786-O细胞,采用CCK-8检测786-O细胞活力;TUNEL染色检测786-O细胞凋亡;透射电子显微镜观察786-O细胞自噬体;吖啶橙染色观察786-O细胞自噬小泡;GFP-LC3质粒转染分析观察786-O细胞自噬体;Western印迹检测LC3、beclin-1、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR的表达。结果显示,白藜芦醇以浓度和时间依赖性的方式抑制786-O细胞活力,并诱导细胞凋亡;与对照组相比,白藜芦醇使786-O细胞自噬增强;Western印迹结果显示,与对照组相比,白藜芦醇组LC3-II/LC3-I和Beclin-1显著增高(P0.01),表明白藜芦醇导致786-O细胞自噬体积累。与对照组相比,白藜芦醇使786-O细胞的p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR显著降低(P0.01),表明白藜芦醇可通过PI3K/Akt/mTOR信号通路增强自噬。综上所述,白藜芦醇通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路从而诱导786-O细胞自噬。     

Spautin-1通过抑制自噬可增强舒尼替尼诱导的肾癌细胞凋亡

目的:研究spautin-1(一种自噬抑制剂)是否能抑制舒尼替尼诱导的肾癌细胞的自噬以及对舒尼替尼诱导的肾癌细胞凋亡的影响。方法:以肾癌细胞系786-O细胞为模型,Western Blot检测spautin-1对舒尼替尼诱导786-O细胞自噬的影响;Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测spautin-1和舒尼替尼对786-O细胞增殖的影响;应用流式细胞术,检测spautin-1对舒尼替尼诱导的786-O细胞凋亡的影响;Western Blot检测spautin-1的促凋亡作用与PI3K/AKT/GSK3β信号通路及抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的关系。结果:与舒尼替尼单独处理组相比,spautin-1能通过降低Beclin-1的表达显著抑制舒尼替尼在786-O细胞中诱导的自噬;Spautin-1和舒尼替尼联合作用明显增强舒尼替尼对786-O细胞增殖的抑制作用;Spautin-1能进一步增强舒尼替尼诱导的786-O细胞的凋亡;Spautin-1和舒尼替尼联合处理786-O细胞时,可以显著降低p-AKTSer473和p-GSK3βSer9的蛋白表达水平,增强GSK3β的活性,进而下调Bcl-2、Mcl-1的表达。结论:Spautin-1能通过抑制AKT活性并活化GSK3β,进一步降低抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1的表达,增强舒尼替尼诱导的肾癌细胞凋亡。     

TRPM7调控PI3K/AKT通路对人脑血管外膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAFs)的异常增殖参与了血管增殖性疾病的发生发展。该研究探讨TRPM7(transient receptor potential melastatin 7)能否通过调控PI3K/AKT信号通路影响HBVAFs增殖和凋亡。体外培养HBVAFs细胞,分为如下几组:parental(正常培养HBVAFs细胞)、si-NC、si-TRPM7、si-NC+IGF-1(PI3K/AKT信号通路激活剂)、si-TRPM7+IGF-1。通过qRT-PCR法检测TRPM7 mRNA表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况;Western blot法检测目的蛋白水平。结果显示,si-TRPM7转染可显著降低HBVAFs细胞中TRPM7 mRNA和蛋白表达水平(P0.001);与si-NC组比较,si-TRPM7组细胞增殖活力下降(P0.001),细胞G_0～G_1期细胞比率上升(P0.001),S期细胞比率下降(P0.001),周期调控蛋白CCND1、CDK2、CDK4水平均明显下降(P0.001),凋亡百分比增加(P0.001),Bcl-2、p-PI3K及p-AKT蛋白表达下降(P0.001),Bax、cleaved caspase-3及Cytochrome c蛋白表达增加(P0.001);而PI3K/AKT信号通路激活剂IGF-1处理可有效逆转si-TRPM7介导的上述改变(P0.001)。这些结果提示,干扰TRPM7表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路激活发挥抑制HBVAFs细胞增殖并诱导凋亡的作用,为TRPM7作为血管增殖性疾病的治疗靶点提供理论依据。     

RHCG基因在非小细胞肺癌中的表达及对细胞增殖的影响

为了探讨Rh type C glycoprotein (RHCG)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖的影响及可能的作用机制,本研究使用荧光定量PCR法检测12对NSCLC及癌旁组织样本中RHCG mRNA的表达水平及pcDNA3.1-RHCG质粒对A549细胞RHCG m RNA的表达;采用CCK-8法检测细胞增殖能力;运用PI染色法检测细胞周期;使用免疫印迹法检p-PI3K、PI3K、p-AKT以及AKT蛋白表达水平。本研究发现,与癌旁组织比较,NSCLC中RHCG m RNA表达水平明显降低。RHCG过表达能抑制NSCLC细胞系A549细胞增殖能力。此外,RHCG过表达使A549细胞周期G1/S期转化发生阻滞。本研究还发现,RHCG过表达可下调A549细胞p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT水平。本研究表明,RHCG抑制NSCLC细胞增殖的作用与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

PI3K/AKT/NF-κB轴调控胃癌细胞HGC-27增殖

目的:构建磷酸化AKT1(Ser473)位点突变真核表达载体,并检测PI3K/AKT/NF-κB信号通路轴对胃癌细胞增殖的影响。方法:以带有pcDNA3.0-Flag标签的AKT1质粒为模板,扩增出AKT1(Ser473A)(丝氨酸突变成丙氨酸)位点突变编码序列,将其插入pcDNA3.0-Flag载体中,双酶切和测序验证后瞬时转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测其表达情况;将突变质粒与空载体分别转染胃癌细胞HGC-27,通过Western印迹检测其下游基因核转录因子κB(NF-κB)在蛋白水平的变化;通过CCK-8法检测对细胞生长曲线的影响。结果:双酶切和测序结果表明,pcDNA3.0-Flag-AKT1(Ser473A)真核表达质粒构建成功;转染293T细胞后获得表达;转染胃癌细胞HGC-27后,Western印迹验证去磷酸化AKT1(Ser473A)可下调NF-κB的蛋白水平(P0.01);细胞生长曲线结果显示,转染pcDNA3.0-Flag-AKT1(Ser473A)较空载体细胞生长慢(P0.01)。结论:PI3K/AKT/NF-κB信号通路轴在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。     

姜黄素作用PTEN/PI3K/AKT通路诱导食管癌EC109细胞凋亡

目的:研究姜黄素作用食管癌的分子机制。方法:体外培养人食管癌细胞(EC109),15~120μmol/L姜黄素处理后,采用CCK-8法检测姜黄素对细胞的增殖抑制作用,透射电镜观察细胞超微结构,Annexin V-FITC/PI双染激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡,流式细胞术分析15~120μmol/L姜黄素作用EC109细胞后PTEN/PI3K/AKT通路相关蛋白PTEN、AKT、GSK3β和Caspase 3的表达水平。结果:CCK-8检测结果姜黄素能显著抑制EC109细胞的增殖,呈剂量和时间效应关系;透射电镜和激光共聚集显微镜观察发现姜黄素能使EC109细胞发生凋亡;流式细胞仪蛋白水平分析显示姜黄素可增强细胞中PTEN、GSK3β和Caspase 3的表达,抑制AKT的表达。结论:姜黄素抑制EC109细胞的增殖并促进其凋亡的生物学效应与增强PTEN的表达抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

瑞香素通过抑制PI3K/AKT通路触发内质网应激抑制胃癌细胞活性

目的 探讨瑞香素（Daphnetin）对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 将胃癌细胞HGC-27随机分为对照、低剂量（5μg/mL瑞香素）、中剂量（10μg/mL瑞香素）、高剂量（25μg/mL瑞香素）和高剂量+740Y-P(25μg/mL瑞香素+30μmol/L PI3K/Akt信号通路激活剂740Y-P)5组,药物处理48 h后分别采用CCK-8法、EdU实验、流式细胞术、TUNEL实验、蛋白免疫印记法检测细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达水平。结果 瑞香素可剂量依赖性抑制HGC-27细胞增殖,诱导HGC-27细胞凋亡,增加内质网相关蛋白CHOP、ATF4、p-PERK、p-EIF2α的表达,降低p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平;此外PI3K/Akt信号通路激活剂740Y-P可逆转瑞香素对HGC-27细胞增殖的抑制,并逆转瑞香素对HGC-27细胞内质网应激相关蛋白表达的促进作用。结论 瑞香素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路触发内质网应激抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡而发挥其对胃癌的抑制作用。     

PI3K/AKT信号通路调控Myogenin和MCK基因的表达

骨骼肌分化过程受多个信号通路调控, PI3K/AKT信号通路是其中最重要的信号转导通路之一。PI3K/AKT信号通路可以调控骨骼肌分化, 但在染色质水平上的调控机制还不是很清楚。文章以小鼠成肌细胞(C2C12)为研究材料, 采用免疫印迹、染色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation, ChIP)、定量PCR (Q-PCR)的方法研究PI3K/AKT信号通路调控Myogenin和MCK基因的表达。研究发现, C2C12细胞分化过程中添加PI3K/AKT信号通路激活剂处理24 h, Myogenin和MCK蛋白表达水平显著升高, 组蛋白H3K27me3去甲基化酶UTX的表达也升高, H3K27me3在Myogenin基因启动子区和MCK基因启动子及增强子区的富集与对照组相比显著降低。用PI3K/AKT信号通路抑制剂处理, 结果相反。因此, PI3K/AKT信号通路可能通过调控组蛋白去甲基化酶UTX的表达活性改变靶基因的H3K27me3的富集进而调控骨骼肌分化。     

维生素K3通过调控Ras信号通路抑制前列腺癌细胞增殖

摘要 目的：研究维生素K3对前列腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法：CCK-8检测维生素K3对前列腺癌细胞系增殖的影响;应用siRNA干扰Siah2表达之后,CCK-8检测维生素K3对前列腺癌细胞系增殖的影响;Western Blot检测维生素K3对前列腺癌细胞Siah2和Spry2表达的影响;免疫共沉淀技术检测维生K3对Siah2介导的Spry2泛素化水平的影响;Western Blot检测维生素K3对Ras信号通路中pERK表达的影响;构建裸鼠皮下前列腺癌模型,研究维生素K3对肿瘤生长的影响。结果：维生素K3抑制前列腺癌细胞系增殖,并且维生素K3浓度越高,对细胞抑制增殖作用越明显。前列腺癌细胞中干扰Siah2表达后,10 μM维生素K3对细胞增殖无明显抑制作用即维生素K3对前列腺癌细胞增殖抑制作用依赖Siah2。10 μM维生素K3能减弱Siah2对Spry2的泛素化水平使Spry 2表达升高。维生素K3能使前列腺癌细胞中Ras信号通路中的pERK蛋白表达降低。动物实验显示维生素K3治疗12天后,对照组和维生素K3组间肿瘤体积大小具有统计学差异,说明维生素K3能够有效地抑制裸鼠皮下前列腺癌生长。结论：维生素K3通过抑制Siah2泛素连接酶活性,介导其底物Spry2表达升高,进而抑制Ras/Raf/MEK/ERK信号通路起到抑制前列腺细胞增殖作用。     

抑制eIF3I蛋白的泛素化降解促进人宫颈癌细胞增殖

目的:研究eIF3I蛋白在细胞中的泛素化修饰,阐明其对人宫颈癌细胞系Hela增殖的影响.方法:通过点突变技术获得突变体K282R,与野生型eIF3I比较泛素化的水平,研究细胞内的泛素化修饰调控.经流式细胞仪分析细胞周期,研究野生型蛋白eIF3I和突变体K282R对Hela细胞的细胞周期影响.再从周期蛋白水平研究eIF3I对细胞增殖的调控作用.结果:突变体K282R比野生型eIF3I蛋白的外源表达量大.在Hela细胞中K282R突变体的泛素化水平低,抑制了该蛋白的泛素-蛋白酶体途径降解.过表达eIF3I能上调周期蛋白Cyclin D1的表达量,促进细胞进入由G1期进入S期.同时,泛素化程度低的突变体K282R具有较强的促进细胞增殖的作用.结论:抑制eIF3I的泛素-蛋白酶体途径降解能上调周期蛋白CyclinD1的表达,促进肿瘤细胞增殖,提示eIF3I在细胞增殖和肿瘤发生发展中发挥作用.     

小檗碱通过PI3K/AKT信号通路调控人牙周膜干细胞的增殖和成骨分化

该文旨在探讨小檗碱(berberine)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖和成骨分化的影响及潜在的机制。体外培养hPDLSCs,将其分为空白对照(Con)组、PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(LY)组、小檗碱(Ber)组和小檗碱+PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(Ber+LY)组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测h PDLSCs的增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期分布,酶联免疫检测仪检测碱性磷酸酶(ALP)活性,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、骨钙蛋白(OCN)、骨膜蛋白(POSTN)和骨桥蛋白(OPN)的表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PCNA、Cyclin D1、OCN、POSTN、OPN和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况。与Con组相比,Ber组h PDLSCs增殖活力,ALP的活性,S期和G₂/M期细胞比例,PCNA、Cyclin D1、OCN、POSTN、OPN、p-PI3K和p-AKT的表达水平均显著升...     

miR-191靶向BDNF基因通过激活PI3K/AKT信号通路促进猪未成熟支持细胞增殖

睾丸支持细胞数量是影响精子生成能力的主要因素之一,micro RNA (miRNA)参与调控猪未成熟支持细胞的发育过程,然而,大多数被鉴定出的miRNA对支持细胞的作用及其机制尚不明确。基于本课题组前期高内涵筛选结果,本文进一步通过流式细胞术、蛋白免疫印迹和双荧光素酶报告基因等方法,研究了miR-191调控猪未成熟支持细胞增殖和凋亡的作用机理。结果表明:过表达miR-191显著促进细胞周期由G1期进入S期和G2期,细胞增殖能力显著增强,细胞凋亡率显著降低;而抑制表达miR-191则与之相反。双荧光素酶报告基因系统验证miR-191直接靶向BDNF基因3′-UTR。抑制表达BDNF基因促进细胞周期进入S期,并促进细胞增殖而抑制细胞凋亡,与过表达miR-191的作用一致。共转染试验结果显示,BDNF基因可以拮抗miR-191对细胞增殖和凋亡的调控作用。此外,过表达miR-191和抑制表达BDNF基因均可显著促进PI3K/AKT信号通路中关键蛋白PI3K和AKT的磷酸化水平,且BDNF基因同样拮抗miR-191对PI3K和AKT蛋白的调控作用。本研究结果证实miR-191靶向BDNF基因,通过激活PI3K/AKT信号通路促进猪未成熟支持细胞增殖且抑制其凋亡,为进一步解析miR-191调控猪精子生成的生物学功能提供了理论基础。     

基于PI3K/AKT通路探究上调miR-210对牙髓干细胞增殖、凋亡能力的影响

摘要 目的：研究基于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路探究上调微小RNA 210(miR-210)对大鼠牙髓干细胞增殖、凋亡能力的影响。方法：选取10只健康Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠,颈椎脱臼处死后提取大鼠下切牙牙髓,进行牙髓干细胞培养和鉴定。分为正常组（未进行处理）,miR-210抑制组（给予20 nmol/L的miR-210抑制物）,miR-210对照组（给予20 nmol/L的miR-210模拟物）三组。采用CCK-8法检测牙髓干细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测ALP活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,采用免疫印迹（Western blot）检测PI3K、AKT蛋白。结果：与正常组相比,miR-210抑制组细胞增殖、ALP活性降低,细胞凋亡率升高;miR-210对照组细胞增殖、ALP活性升高,细胞凋亡率降低（P＜0.05）。与miR-210抑制组相比,miR-210对照组细胞增殖、ALP活性升高,细胞凋亡率降低（P＜0.05）。与正常组相比,miR-210抑制组PI3K、p-AKT蛋白表达降低,miR-210对照组PI3K、p-AKT蛋白表达升高（P＜0.05）。与miR-210抑制组相比,miR-210对照组PI3K、p-AKT蛋白表达升高（P＜0.05）。结论：miR-210通过调控PI3K、p-AKT蛋白激活PI3K/AKT通路,促进大鼠牙髓干细胞增殖,抑制牙髓干细胞凋亡。     

阿托伐他汀抑制PI3K/AKT/FoxO1通路及高糖诱导的足细胞增殖、凋亡及氧化应激损伤

目的 基于磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/转录因子叉头框转录因子O亚族1(PI3K/AKT/FoxO1)通路研究阿托伐他汀对高糖诱导的足细胞增殖、凋亡、迁移、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素（IL）-6]及氧化因子超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平的影响。方法 体外培养人肾小球足细胞HGPC,分为对照组、高糖组、阿托伐他汀组、PI3K/AKT/FoxO1信号通路抑制剂组、阿托伐他汀+抑制剂组及阿托伐他汀+PI3K/AKT/FoxO1信号通路激活剂组。分别测定细胞增殖、凋亡、迁移能力、炎症因子（TNF-α、IL-6）水平、氧化因子（SOD、MDA）水平及PI3K/AKT/FoxO1信号通路相关蛋白表达水平。结果 10μmol/L阿托伐他汀为干预细胞活力的最佳浓度。高糖组细胞增殖率、SOD水平降低,凋亡率、迁移率、TNF-α、IL-6、MDA水平、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-FoxO1/FoxO1比值升高;阿托伐他汀组和抑制剂组细胞增殖率、SOD水平升高,凋亡率、迁移率、TNF-α、IL-6、MDA水平、p-PI3K/PI3K、p-AKT/A...     

去泛素化酶USP10通过稳定Smurf1抑制TGF-β/BMP信号通路

目的 探究生理条件下去泛素化酶USP10调控的关键信号通路及分子机制。方法 利用GEO2R和Metascape对Usp10^+/+和Usp10^-/-新生小鼠肾组织基因芯片(GSE198574)差异表达基因和通路富集分析，使用免疫印迹实验和免疫组化技术检验核心转录因子的表达情况；进一步利用免疫印迹检测该信号通路，并通过基因芯片和免疫组化分析候选分子的表达情况；使用免疫共沉淀(Co-IP)和GST-pull down实验验证USP10与候选分子的相互作用，通过泛素化实验明确USP10对底物分子的调控机制；利用免疫印迹检测细胞增殖、凋亡相关蛋白p21、Cleaved-caspase 3的表达情况，使用CCK-8和克隆形成实验分析USP10对细胞增殖的影响。结果 Usp10^-/-新生小鼠肾组织中TGF-β/BMP通路激活，USP10在小鼠体内缺失后导致Smad泛素相关因子1 (Smurf1)蛋白质水平降低，Smad1/5蛋白质水平上调，却不影响它们的转录水平；机制上，USP10与Smurf1存在相互作用，并依赖其去泛素化酶活性去除...     

PI3K抑制剂LY294002在HPV感染宫颈癌细胞的调节作用

高危型人乳头瘤病毒(Human papiloma virus,HPV)感染是宫颈癌的危险因素,HPV16是常见的高危型HPV,与宫颈癌的发病有关,但具体机制未明确.有临床研究报道,宫颈癌组织中HPV16感染与磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)表达增加有关,为了阐明PI3K/AKT信号通路及其抑制剂LY294002在HPV感染宫颈癌细胞增殖中的调控作用,本实验培养了 HPV16感染的宫颈癌细胞株SiHa、HPV阴性的宫颈癌细胞株C33A、正常宫颈上皮细胞株H8,检测了 p-PI3K、p-AKT的表达水平;SiHa细胞分为对照组、50 μmol/L及100 μmol/L LY294002组,药物干预后检测细胞增殖活力A490值及p-PI3K、p-AKT、c-myc、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达水平;皮下注射SiHa细胞建立移植瘤小鼠模型,分为对照组、25mg/kg、50mg/kg LY294002组,药物干预后取移植瘤称重.结果显示,SiHa细胞中p-PI3K、p-AKT的表达水平均高于C33A、H8细胞;50 μmol/L及100 μmol/L LY294002组 SiHa 细胞的 A490值及 p-PI3K、p-AKT、c-myc、bcl-2的表达水平均低于对照组;25 mg/kg、50 mg/kg LY294002组移植瘤小鼠的移植瘤质量均低于对照组(P＜0.05).以上结果表明HPV16感染的宫颈癌细胞中PI3K/AKT信号通路过度激活具有促增殖作用.本实验阐明了 PI3K/AKT通路及其抑制剂LY294002在HPV16感染的宫颈癌细胞增殖中的调控作用,PI3K/AKT通路的激活能够促进HPV16感染的宫颈癌细胞增殖及移植瘤的生长,使用信号通路抑制剂能够抑制细胞增殖及移植瘤生长,未来PI3K/AKT通路可能成为HPV16感染引起宫颈癌的防治靶点.     

MiR-425对血管平滑肌细胞增殖迁移的作用及分子机制

目的探讨miR-425对人主动脉平滑肌细胞增殖迁移的作用及潜在的分子机制。方法实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells, HASMCs)中miR-425的表达水平。转染miR-342inhibitor改变HASMCs中内源性miR-425的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖及周期的变化,Transwell检测细胞迁移能力;Western blot检测PTEN、PI3K、p-AKT/AKT、MMP-9的蛋白表达水平。结果血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)可时间及剂量依赖性地促进HASMCs中miR-425的表达。转染miR-425 inhibitor可抑制AngⅡ对HASMCs的促增殖作用,并抑制细胞迁移,同时细胞中PI3K、p-AKT/AKT及MMP-9的蛋白水平显著降低,PTEN水平显著升高。结论沉默miR-425可通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制人主动脉平滑肌细胞的增殖及迁移,提示miR-425可作为血管重构的一个潜在诊疗靶点。     

miR-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控胶质瘤细胞的增殖

探讨miR-21对胶质瘤细胞U87中人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路相关影响作用研究。脂质体Lipofectamine~(TM)2000将miR-21 inhibitor和miR-21 NC转入U87细胞中,48 h后,RT-PCR检测miR-21表达,MTT法检测细胞活力,Annexin V/PI流式双染检测细胞凋亡情况,Western blotting检测PTEN/PI3K/AKT激活情况及程序性细胞死亡因子4(PDCD4),Bax及Bcl-2的表达。与miR-21 NC组比较,miR-21 inhibitor组miR-21表达量显著降低,U87细胞活力下降,细胞凋亡率提高,PI3K、Bcl-2及p-AKT表达量下调,PTEN、PDCD4及Bax表达量上调,差异均具有统计学意义(p0.01)。miR-21inhibitor能显著的抑制U87细胞的增殖,与PTEN/PI3K/AKT信号通路有关。     

ADAM17通过EGFR-PI3K/Akt/p27通路调控前列腺癌细胞增殖

ADAM17是金属蛋白酶家族(ADAMs)成员之一,研究发现ADAM17可以通过水解细胞表面蛋白的胞外结构域导致肿瘤细胞的增殖和转移.本课题前期研究结果显示,与LNCap细胞相比,ADAM17在DU145细胞中高表达,且与细胞增殖相关.为了研究ADAM17与前列腺癌细胞增殖相关基因p27表达的关系及调控机制,我们采用RNAi技术下调ADAM17的表达,加入PMA(一种ADAM17的激活剂)上调ADAM17的表达,通过细胞计数和CCK-8方法检测细胞增殖,RT-PCR检测p27mRNA的表达,Western印迹检测ADAM17的表达;进一步阻断EGFR和PI3K/Akt信号转导,RT-PCR方法检测p27mRNA的表达,Western印迹检测ADAM17、EGFR、pEGFR、Akt和pAkt的表达.结果显示ADAM17的表达与前列腺癌细胞的增殖呈正相关(P0.05);p27mRNA的表达与ADAM17的表达呈负相关(P0.05);分别阻断EGFR和PI3K/Akt信号转导通路,同时使ADAM17表达增加,与对照组(单独PMA处理组)相比,p27mRNA的表达均增加(P0.05).提示ADAM17调控前列腺癌细胞增殖相关基因p27表达是通过EGFR-PI3K/Akt信号通路实现的.     

哈蟆油通过激活PI3K/Akt/NF-κB途径保护氧化应激损伤的大鼠卵巢颗粒细胞

本文探讨哈蟆油含药血清对H_2O_2致大鼠卵巢颗粒细胞氧化应激损伤的保护作用与分子机制。将大鼠原代卵巢颗粒细胞分为6组:正常对照组、H_2O_2模型组、阳性药对照组、哈蟆油含药血清低、中、高剂量组。CCK-8法检测哈蟆油含药血清对H_2O_2致颗粒细胞氧化应激损伤细胞活力的影响;实时荧光RT-PCR法检测PI3K、AKT3 mRNA的表达水平;Western blot检测p-Akt(Ser473)、NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果发现与正常对照组相比,H_2O_2刺激后细胞活性明显下降,哈蟆油含药血清能够提高颗粒细胞存活率。机制研究发现,哈蟆油含药血清通过恢复H_2O_2诱导细胞增殖相关PI3K、AKT3 mRNA水平,上调p-Akt(Ser473)、IKKβ、NF-κB(p65)蛋白的表达,下调IκBα蛋白的表达。以上结果表明,哈蟆油对H_2O_2诱导卵巢颗粒细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路密切相关。这可能是其抗氧化的作用机制之一。