环状糊精与环状糊精葡萄糖基转移酶

本文简述了环状糊精的结构性质和用途,并对环状糊精葡萄糖基转移酶的测定方法和固定化做了简要综述。     

鳜及大眼鳜线粒体DNA比较研究

采用10种限制性内切酶HindⅢ、EcoRⅠ、BglⅠ、BglⅡ、BamHⅠ、PvuⅡ、PstⅠ、SalⅠ、XbaⅠ、XhoⅠ对鳜及大眼鳜肝脏线粒体DNA（mtDNA）进行了分析。鳜鱼mtDNA分子量为9.703×106u,大小为16．19kb;大眼鳜mtDNA分子量为9．603×106u,大小为16．02kb。根据单、双酶切结果构建了鳜及大眼鳜mtDNA10种酶限制性酶切图谱,并对两种鱼的mtDNA酶切图谱进行了比较。     

氧化葡萄糖杆菌合成右旋糖酐糊精酶的pH两阶段控制策略

为了进一步提高氧化葡萄糖杆菌右旋糖酐糊精酶的产量,在3 L发酵罐水平上考察了pH(3.5?6.0)对菌体生长和产酶的影响。基于不同pH发酵过程中菌体生长及产物合成的变化,确定了pH两阶段控制策略,即0?6 h时控制pH 5.0,6 h后将pH调至4.0。通过采用这一优化策略,右旋糖酐糊精酶酶活有了较大的提高,可达4.03 U/mL,比不控制pH模式下提高了38.5%,是摇瓶水平的12.5倍,同时发酵时间从47 h缩短为15 h。     

γ-环状糊精葡萄糖基转移酶产生菌32-3-10产酶条件及酶促反应条件的研究

筛选到一株牙孢杆菌32－3－10,它所产γ-环状糊精葡萄糖基转移酶可以淀粉为底物生成γ-环状糊精,对其产酶条件及酶促反应条件进行了研究。     

鳜胃肠道和肝脏主要消化酶活性的研究

以初始体重(6.77±0.64) g的鳜(Siniperca chuatsi)为实验对象, 从消化道肠肽酶活力和小肽转运吸收方面比较研究鳜对活饵与饲料消化吸收能力的差异。实验采用3种分组投食策略, 将鳜分活饵组(仅投喂活饵鱼)、饲料组(仅投喂饲料)、复投活饵组(以下简称复投组, 先投喂饲料后活饵鱼)。活饵组、饲料组分别饲养22d, 复投组经5d驯饲、15d饲料和2d活饵喂养。饲养结束时在各组进食0.5h、1h、2h、3h、6h、12h、16h时分别取样肠和幽门盲囊, 测定氨肽酶和羧肽酶含量与活力, 小肽转运载体基因Pept1a、Pept1b和Pept2 mRNA表达水平, 及进食12h后肠内容物及粪便中残余小肽含量。结果表明: 各组羧肽酶、氨肽酶含量变化无显著性规律, 酶活力总体呈先升后降趋势; 活饵组肽酶活力峰值显著高于复投组高于饲料组(P<0.01), 复投组由饲料转喂活饵后, 肠道肠肽酶活力显著上升; 各组前肠、中肠及幽门盲囊Pept1a、Pept1b mRNA表达显著高于后肠(P<0.01), 后肠则以Pept2 mRNA高表达(P<0.01)。在复投组摄食活饵后, 小肽转运载体基因表达水平较饲料组迅速回升(P<0.01); 摄食12h, 复投组肠内容物小肽含量显著高于活饵组和饲料组, 小肽吸收效率随消化时间延长而上升。饲料组粪便中小肽含量显著高于活饵组与复投组, 未转运的小肽中含必需氨基酸居高。综上所述, 投喂鳜配合饲料, 对肠肽酶活力、小肽转运载体基因表达和小肽吸收速率均产生不利影响, 鳜对饲料蛋白的分解和小肽转运吸收效率显著低于活饵鱼。

     

应用细胞透性化技术快速提取氧化葡萄糖杆菌胞内右旋糖酐糊精酶

将细胞透性化技术应用到右旋糖酐酶的提取检测过程中,根据单因素实验和正交试验设计确定了从氧化葡萄糖杆菌(Gluconobacter oxydans)细胞中提取胞内右旋糖酐糊精酶(DDase)的最佳方法:甘氨酸(Gly)质量分数15%,Triton X-100体积分数1%,菌悬液OD600为0.5~6.0,pH为6.81,冰浴处理时间1 h,透性化试剂的提取效率可达到酶活最大值的90%以上。与超声波细胞破碎法相比,该方法条件温和,酶的释放率较高并易于大量试样的平行实验操作。     

闽江和漓江暗鳜mtDNA控制区序列差异分析

为解决暗鳜(Siniperca obscura)在分类上的争议,利用PCR和直接测序法分析了闽江和漓江13尾暗鳜mtDNA控制区的序列差异。在长度813bp的同源序列中,共发现71个变异位点,占分析位点总数的8.73%;定义了11个单倍型,其中闽江群体7个,漓江群体4个,两群体之间没有共享单倍型,且有37个鉴别位点。两群体间的核苷酸歧义度(Dxy)为5.421%±1.129%。分子方差分析(AMOVA)得出两群体间的固定指数(Fst)为0.852(P<0.001)。构建的NJ亲缘关系树中,闽江暗鳜和漓江暗鳜各自组群,明显分为两支。这些表明闽江和漓江暗鳜群体之间出现了显著的遗传分化,其分化可能与南岭山脉的隆起形成有关。     

利用环状糊精纯化淀粉水解酶类

环状糊精是由环状糊精葡萄糖基转移酶作用于淀粉所产生的一组非还原性环状低聚糖 ,最常见的有α,β和γ型 ,它们分别是由 6、7或 8个葡萄糖单元以α 1,4糖苷键联结而成的。由于其特殊的“内疏水外亲水”分子结构 ,使得环状糊精能与多种有机分子形成特殊结构的包合物 ;同时环状糊精还能与酶的活性 /非活性部位相互作用 ,所以以环状糊精为配体 ,利用亲和层析纯化水解淀粉的酶类     

鳜和乌鳢最适温度的研究

研究了体重47.2-540.2g的鳜和45.0-546.2g的乌鳢的最适摄食和生长温度。结果表明,鳜的最大摄食率随温度的上升而增大,在25-35℃之间形成“最适温度平台”,低温（10-25℃）时,乌鳢的最大摄食率随温度的上升而增加,在25-30℃之间形成“最适温度平台”,之后随温度的增加而下降,鳜的特定生长率随温度的增加而加快,在25-35℃“最适温度平台”,乌鳢的特定生长率受体重和温度的交互影响。     

病毒感染影响宿主细胞葡萄糖代谢研究进展

病毒挟持宿主细胞代谢以实现自身的复制和增殖,糖类作为宿主细胞最主要能量来源及大分子物质合成重要碳源,在病毒增殖过程中其代谢受到严密调控。本文从病毒感染影响葡萄糖转运、糖代谢(糖酵解、磷酸戊糖途径、糖异生)以及胰岛素信号通路等3个方面概述病毒感染影响宿主细胞葡萄糖代谢研究进展,以期为病毒影响细胞葡萄糖代谢研究提供参考。     

异亮氨酸对鳜mTOR信号通路及氮代谢影响

通过脑室注射异亮氨酸, 探究短期内异亮氨酸对鳜(Siniperca chuatsi)雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路及氮代谢影响。结果显示: 脑室注射异亮氨酸后, (1)促进鳜氨氮排泄; (2)谷氨酸脱氢酶基因(Glutamate dehydrogenase, GDH)、谷草转氨酶基因(Glutamic oxaloacetic transaminase, GOT)和腺苷酸脱氨酶基因(Adenosine monophosphate deaminase, AMPD)氮代谢基因相对表达量显著性上调(P<0.05); (3)鳜血糖含量在0.5h显著性降低(P<0.05); (4)激活了鳜肝脏mTOR信号通路, 促使下游分子核糖体蛋白S6磷酸化(P<0.05)。结果表明: 异亮氨酸能够激活鳜肝脏mTOR信号通路, 介导氨基酸代谢, 提高鳜氮代谢基因的转录水平, 促使氨氮排泄增多。     

禁食与胰岛素处理对鳜血糖和leptin-A基因表达的影响

为研究硬骨鱼类leptin基因表达与血糖之间的关系, 研究在禁食与胰岛素处理后, 检测鳜血糖和肝脏、肠道和脂肪组织leptin-A基因表达水平。在禁食实验中, 鳜被禁食10d, 并分别于禁食后0、4h、2d、6d和10d取样。禁食后6d鳜血糖开始降低, 禁食后10d鳜血糖显著降低。同时, 禁食后6d鳜肝脏leptin-A基因mRNA表达水平显著升高, 禁食后4h鳜肠道和脂肪组织leptin-A基因mRNA表达水平均显著升高。在胰岛素处理实验中, 分别于注射后12h和36h取样。腹腔注射胰岛素后12h, 鳜血糖显著降低, 而鳜肝脏、肠道和脂肪组织leptin-A基因mRNA表达水平无明显变化。腹腔注射insulin后36h, 鳜肠道leptin-A基因mRNA表达水平显著升高。研究结果表明, 长期禁食或胰岛素处理均能够降低鳜血糖水平, 且影响消化器官和脂肪储存器官leptin-A基因表达。     

翘嘴鳜病原嗜水气单胞菌分子特征及LAMP检测方法的建立

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是一种危害鳜鱼养殖生产的重要病原细菌, 为进一步明确该病原菌的分子特征及建立快速检测技术, 实验对引起翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)暴发性死亡的病原嗜水气单胞菌进行了致病性、菌株毒力特征研究, 同时以嗜水气单胞菌气溶素基因aerA为分子靶标设计引物, 利用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)建立了病原嗜水气单胞菌的快速检测方法。结果表明, 本次引起翘嘴鳜暴发性死亡的病原嗜水气单胞菌半致死浓度为1.6×106 CFU/mL, 携带aerA等14种毒力基因, 此14种毒力基因可用于其致病性分析及分子检测。以气溶素基因aerA设计引物进行的环介导恒温扩增, 结果显示可扩增出阶梯状条带, 加入SYBR Green I染色后呈现绿色的阳性反应, 而对照组均未出现任何扩增条带且反应体系呈现橙色, 表明LAMP检测方法对于嗜水气单胞菌检测具有很好的特异性; 灵敏度检测的最低检测限为4.6×101 CFU/mL; 10种经人工感染的淡水养殖鱼虾组织匀浆增菌液, 提取DNA后进行LAMP方法检测, 结果均可获得阳性扩增结果, 而对照未染菌组呈阴性, 表明该方法具有较好的应用性, 可应用于嗜水气单胞菌引起的水生动物疾病的检测。     

鳜春季、夏季和秋季按季节人工繁育模式的研究

为满足不同地区、不同季节鳜(Sinierca chuatsi)养殖需要, 实现均衡上市的苗种供应要求, 研究通过对两批亲鱼在不同季节各进行4次交替人工催产, 按月建立苗种繁育模式。结果显示, 池塘中自然培育的亲鱼, 卵巢成熟系数出现2个峰值, 而网箱中培育的亲鱼, 经过4次人工催产, 出现4个成熟系数峰值, 产卵量和出苗量与成熟系数峰值正相关。以二繁的成熟系数、产卵量和出苗量最高, 显著高于其他三次(P<0.05), 二繁、三繁和四繁的受精率、孵化率和苗种培育成活率均较高, 显著高于一繁(P<0.05), 温度是影响一繁受精率、孵化率和苗种培育成活率的主要因素。产后亲鱼成活率随人工繁殖次数增加而下降, 其中以一繁的成活率最高, 达93.33%, 显著高于三繁和四繁(P<0.05)。综上结果表明, 通过按季节分梯次人工繁育模式解决鳜苗种生产的均衡供应是可行的。这为转变鳜的养殖方式提供了科学依据, 也为其他鱼类苗种的均衡生产提供了借鉴意义。     

硝化细菌对加州鲈池塘水质影响及底质净化作用

为研究有益菌硝化细菌(Nitrifying bacteria)对加州鲈(Micropterus salmoides)高密度养殖池塘水质及底质的影响,在模拟加州鲈高密度养殖池塘单独施用硝化细菌,通过检测养殖水体pH、氨氮(NH4+-N)、亚硝酸盐氮、总氮(TN)及总磷(TP)等水质指标,底质沉积物中有机物、全氮及全磷等指标以及池塘浮游动植物量,以评价硝化细菌处理对加州鲈高密度养殖水体水质影响及底质净化作用。结果表明,硝化细菌能够稳定养殖水体pH,降低水体亚硝酸盐氮浓度,减缓养殖水体TN浓度上升,去除底质沉积物中有机物及全磷含量,有机物去除率达54.17%,全磷去除率达43.34%。硝化细菌处理前期浮游动植物总量高于对照池塘,后期逐渐减少并趋于稳定。     

THE EFFECT OF PHENYLALANINE AND ITS METABOLITES ON GLUCOSE UTILIZATION IN DEVELOPING BRAIN

Abstract— High concentrations of phenylalanine, o -tyrosine, and phenylpyruvic acid do not modify the ability of immature rabbit brain to utilize glucose for support of respiration or for oxidative decarboxylation.     

PRODUCTION AND UTILIZATION OF GLUCOSE 1-PHOSPHATE IN THE EGGS OF THE SEA URCHIN ANTHOCIDARIS CRASSISPINA

Concentrations of G1P, G6P, UDPG, UTP and PPi were measured in the eggs of the sea urchin, Anthocidaris crassispina. Activities of phosphorylase a (EC 2.4.1.1), phosphoglucomutase (EC 2.7.5.1), UDPG pyrophosphorylase (EC 2.7.7.9) and pyrophosphatase (EC 3.6.1.1) were also estimated. Levels of G1P and G6P increase following fertilization, but concentrations of UDPG and UTP in unfertilized eggs are very similar to those in fertilized eggs. PPi is undetectable. In unfertilized and fertilized eggs, the G1P level is very low as compared with the G6P level and is far less than that expected from the equilibrium constant in a reaction catalyzed by phosphoglucomutase. Since the phosphoglucomutase activity is higher by about 20 times than the phosphorylase a activity, G1P is probably produced in the reverse reaction, catalyzed by phosphoglucomutase, rather than in the reaction catalyzed by phosphorylase. The G1P thus produced seems to be utilized thoroughly in the reaction catalyzed by UDPG pyrophosphorylase. The reaction seems to be irreversible and tends to go to UDPG production in sea urchin eggs, since the PPi level is negligible due to high pyrophosphatase activity. The utilization of G1P in the reaction catalyzed by UDPG pyrophosphorylase seems to keep the G1P level low.     

编码日本血吸虫抱雌沟蛋白及肌动蛋白的基因性别间的表达差异性

研究了所克隆的日本血吸虫两个基因的性别间的表达差异性。分别将所克隆到的编码日本血吸虫抱雌沟蛋白的cDNA(SjGCP1)和肌动蛋白的cDNA(SjAct)制成DNA探针,利用Southern blotting,Northern blotting和斑点印迹法对其相应基因性别间的表达差异性进行了研究。结果显示,日本血吸虫抱雌沟蛋白的基因在雄虫中转录而雌虫中不转录,血吸虫肌动蛋白基因在雄虫中转录量高于雌虫,表现出转录量的差异。证明这两个基因转录具有性别间的表达差异性。