珍稀濒危植物香果树种质离体保存技术的研究

以香果树(Emmenopterys henryiOliv.)带芽茎段为外植体,以MS为基本培养基,采用正交实验和单因子实验方法研究了培养温度、无机盐水平、蔗糖、甘露醇和植物生长抑制剂PP333对香果树试管苗离体保存的影响。结果表明,香果树带芽茎段在9℃低温下保存于附加2.0 mg.L-1KT、2.0 mg.L-16-BA、0.1 mg.L-1NAA、50 g.L-1蔗糖和10 g.L-1甘露醇的1/2MS培养基上,180 d后其成活率可达80%。PP333对香果树的离体保存也有显著影响,其中最适合的PP333浓度为6 mg.L-1,180 d后其成活率可达95%以上。离体保存后的试管苗经形态指标和生理生化指标测定以及RAPD分析检测没有发生遗传变异。本实验结果为珍稀濒危植物香果树的种质保存提供了一条简单有效的途径。     

5种植物生长抑制剂对香果树种质离体保存的影响

以香果树带芽茎段为外植体,采用单因子实验法研究了5种植物生长抑制剂在不同温度、不同光照条件下对香果树试管苗离体保存的影响。结果表明,在25℃条件下,香果树种质离体保存的最佳CCC、MH、B₉、S3307和ABA浓度分别为4、4、2、1和4 mg/L;在9℃条件下,香果树种质离体保存的最佳CCC、MH、B₉、S3307和ABA浓度分别为2、1、1、0.5和2 mg/L。在光照和黑暗条件下,香果树种质离体保存的最佳CCC、MH、B₉、S3307和ABA浓度分别为4、4、2、1和4 mg/L。与常温条件相比,低温条件下5种植物生长抑制剂的成活率更高,最佳浓度普遍降低。与光照培养比较,在黑暗条件下5种植物生长抑制剂的成活率也更高,但处理的最佳浓度相同。离体保存后的试管苗没有发生遗传变异。     

剑叶龙血树组织培养与快速繁殖的研究

用剑叶龙血树的腋芽、顶芽或茎段作外植体,构建了剑叶龙血树组织培养再生体系。试验结果如下:剑叶龙血树腋芽、顶芽或茎段诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率达95%;选择MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L的蔗糖+8g/L琼脂培养基有利于芽的分化和增殖,在1/2MS+NAA 0.2mg/L+IBA0.4mg/L+活性炭的培养基中诱导生根效果最好。     

‘红皮’马铃薯试管苗培养和微型薯诱导

以‘红皮’马铃薯块茎上的芽为材料进行试管苗诱导、增殖及试管微型薯诱导研究。结果表明：在MS + 6-BA 0.5 mg/L +活性炭0.17% + 蔗糖20 g/L培养基中培养30 d,试管苗增殖系数达8.6;MS + 6-BA 0.5 mg/L +活性炭0.17% +蔗糖100 g/L培养基中试管微型薯诱导效果较好,30 d后诱导率达62.5%,试管薯平均直径为4.2 mm。     

叶下珠组培快繁体系研究

以叶下珠Phyllanthus urinaria带节茎段为外植体,研究生长调节剂浓度、培养基对茎段诱导芽的影响,再以叶下珠无菌芽为材料,开展丛生芽增殖培养、生根培养和炼苗移栽技术研究。结果表明,适合叶下珠茎段诱导芽的培养基为1/2MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+IBA 0.2 mg·L~(-1)+琼脂7.5 g·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)+活性炭0.5 g·L~(-1)(pH 5.8~6.0),诱导率达100%;适合叶下珠芽增殖的培养基为1/2MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+IBA 0.2 mg·L~(-1)+琼脂7.5 g·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)(pH 5.8~6.0),平均增殖倍数为3.8;生根适宜培养基为1/2MS+IBA 0.5 mg·L~(-1)+琼脂7.5 g·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)(pH 5.8~6.0),生根率达100%;最佳炼苗时间为闭盖2 d后开盖3 d,移栽成活率86.6%。     

鱼腥草组织培养研究

以鱼腥草带侧芽茎段为外植体进行组培快繁研究。结果表明,初代培养以MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L为最佳,30d侧芽诱导率可达66.7%;MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.2mg/L+NAA 0.2mg/L对芽苗的继代增殖效果最好,40d芽苗的增殖倍数可达7.4,且芽苗较高;以MS+6-BA3.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L+NAA0.1mg/L对芽苗的继代增重效果最好,40d芽苗鲜重为7.358g;以沙和蛭石(1:1)为基质瓶外生根效果最好,30d芽苗生根率可达84%。     

玉竹的组织培养与快速繁殖

以玉竹[Polygonatum odoratum (Mill.) Druce]根状茎、叶片和茎段为外植体,于附加不同激素配比的MS培养基中诱导愈伤组织、不定芽和不定根,探讨增殖培养和植株再生的条件.结果表明,叶片和茎段外植体诱导愈伤组织和芽的分化率很低;而根状茎外植体易于培养,有较高的诱导率和增殖倍数,其愈伤组织、不定芽和不定根的诱导率分别可达87%、90%和99%以上.适宜根状茎外植体愈伤组织诱导的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,有利于增殖和丛生芽分化的培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA和MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,而1/2MS+3.0～5.0 mg/L NAA适宜诱导试管苗生根培养.试管苗的移栽成活率可达85%以上.     

罗汉果组培繁殖的技术要点

报道罗汉果组培繁殖的各项主要技术要点,包括组培条件、培养基的配制、外植体的选取与消毒、接种与培养、种源保存、炼苗与移栽、苗木包装与运输等。提出了5种培养基参考配方,即茎段诱导培养:MS+BA0.5～1.0mg/L+IAA(NAA)0.05～0.1mg/L+白糖3%+琼脂4.5g/L,pH5.8;茎尖诱导培养:MS+BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.1mg/L+椰子水100mL+白糖3%+琼脂4.5mg/L,pH5.8;继代培养(丛生芽方式):MS+BA0.3～0.7mg/L+NAA0.05/IAA0.1mg/L+白糖3%+琼脂4.5mg/L,pH5.8;继代培养(微型扦插方式):MS+BA0.1mg/L+IAA0.3mg/L+活性炭0.07g/L+白糖3%+琼脂4.5mg/L,pH5.8;生根培养:MS+BA0.07mg/L+IBA0.15mg/L+IAA0.1mg/L+活性炭0.1g/L+白糖3%+琼脂4.5mg/L,pH5.8。分析了外植体培养过程中可能出现的不良状况的原因并提出预防措施,明确了炼苗移栽的适宜条件并制定出相应的管理方法。形成了一套较为完整的罗汉果组培苗繁殖生产技术规程。     

芥蓝组织培养研究

以登峰芥蓝为试材,取无菌苗的茎段、下胚轴为外植体分别进行组织培养研究。结果表明:MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L为下胚轴最适诱导培养基,MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L为带腋芽茎段最适诱导培养基;最适宜的不定芽增殖培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L;试管苗在1/2MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L培养基中进行生根培养效果最好;经炼苗后组培苗移栽成活率达96.6%。     

米槁组织培养不定芽发生与继代增殖

该研究以米槁的带腋芽茎段为实验材料,建立米槁不定芽诱导及增殖培养体系,探究不同消毒时间、取材时间及不同激素种类和浓度配比条件对米槁带芽茎段不定芽诱导及增殖的影响。结果表明：(1)外植体最适消毒方式为75%酒精30 s + 0.1% HgCl₂ 6.5 min,11月为外植体取材进行消毒的最佳时期。(2)最适不定芽诱导培养基为MS + 3.0 mg/L 6 BA + 0.3 mg/L IBA + 6.5 g/L琼脂+ 30 g/L蔗糖,不定芽诱导率可达到81.24%;6 BA和NAA均能促进米槁不定芽的增殖,且NAA是不定芽增殖的主要影响因素。(3)最适不定芽增殖培养基为MS + 0.1 mg/L 6 BA + 1.0 mg/L NAA + 0.3 g/L AC + 6.5 g/L琼脂 + 30 g/L蔗糖,不定芽平均增殖系数达到2.79。该研究基本建立了米槁不定芽诱导及增殖培养体系,为其深层次的资源开发、利用及快速繁殖提供了一条新的路径。     

强德勒红心柚离体培养与植株再生体系的建立

以强德勒红心柚（Citrus grandis Osbeckcv. Chandler）种子萌发的无菌苗为材料,选取子叶、子叶节段、上胚轴、带芽的茎段进行离体培养研究。结果表明：子叶节段是诱导丛生芽的最佳外植体,诱导率100%;诱导丛生芽的最佳培养基为MS＋6-BA2.0mg/L＋NAA0.05mg/L＋蔗糖30g/L＋活性炭0.4g/L,丛生芽增殖可达11.2倍;最适生根培养基为1/2MS＋NAA0.5mg/L,生根率达100%,移栽15d后成活率100%。     

三叶半夏种质资源扩繁及保存研究*

目的:通过对三叶半夏扩繁和保存方法的研究,为三叶半夏种质资源的保育和开发利用提供技术支撑。方法: 首先,通过灭菌条件筛选、愈伤诱导及丛生芽诱导等进行扩繁条件探索;其次,通过设置不同基本培养基、蔗糖浓度、不同温度和光照强度等条件探索合适的种质保存条件;最后,探索了休眠块茎唤醒方式和丛生芽再诱导方法,为种质资源再扩繁提供基础。结果: 以叶柄为外植体,升汞灭菌12 min后,接种至添加2,4-D的培养基中可诱导疏松愈伤组织。外植体接种至MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+蔗糖30 g/L +琼脂6.0 g/L,pH 5.8中可进行丛生芽诱导。合适的种质保存基本培养基为MS和N6培养基;合适的蔗糖浓度为30 g/L,过低或过高均不利于种质保存;在丛生块茎诱导时需要提供足够的温度和光照,低温及避光条件不利于种质保存。待丛生芽自然倒苗休眠后可进行长达1~2年的离体保存。对休眠块茎进行唤醒诱导时可采用切割块茎后再接种的方式。萌发出来的叶柄直接进行丛生芽诱导增殖,而块茎则接种至MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L,pH 5.8中进行再分化诱导丛生芽。诱导出来的丛生芽进行规模化扩繁或继续进行离体保存。结论: 通过对三叶半夏的种质扩繁,筛选合适的条件得到休眠丛生块茎,可对三叶半夏进行长时间的离体保存,而后唤醒和再次诱导的相关研究,为其种质资源保存、利用提供技术基础。     

丽格海棠叶片离体培养与工厂化育苗体系的建立

利用丽格海棠叶片进行离体培养,建立工厂化育苗体系,B₅培养基适合于叶片诱导分化丛芽。丛芽在B₅+BA 0.5mg/L+IBA 0.05mg/L培养基中,增殖系数达6.06;B₅+IBA 0.5mg/L中,生根率达100%,平均根数4.5条。生根前无生长调节剂壮苗是获得健壮植株的有效方法。培养基中附加低浓度蔗糖对维持植株正常形态起关键作用。     

烯效唑对马铃薯试管苗的壮苗效应

烯效唑能有效地延缓马铃薯试管苗的生长,使苗矮化,茎增粗,单株鲜重增加,叶增绿,同时促进不定根发生,根数多且粗,苗健壮。烯效唑使用浓度以0.003mg/L壮苗效果最好;0.005mg/L浓度过高,严重抑制茎生长,苗过于矮化。     

枇杷种质资源的离体保存研究Ⅱ生长抑制剂的影响

在枇杷种质资源离体保存中,加入植物生长抑制剂可以延缓枇杷试管苗的生长速度,延长保存时间。实验结果表明,有利于枇杷种质保存的3种生长抑制剂浓度分别是:多效唑(PP₃₃₃)2~5mg/L、矮壮素(CCC)25mg/L、脱落酸(ABA)10mg/L;其中浓度为5mg/L的多效唑效果最为理想。高浓度的甘露醇(>5g/L)对试管苗会造成毒害,不利于枇杷种质的保存;5g/L甘露醇保存效果较好     

氯通道在葛根素注射液致溶血反应中的作用

目的：观察阻断和激活氯通道对葛根素注射液致家兔溶血反应的影响,探讨氯通道在葛根素注射液溶血反应中的作用。方法：将不同浓度的葛根素注射液（0.75、1.5、3、6、12 mg/ml）与家兔红细胞悬液共孵育6 h,使用细胞图像记录系统观测葛根素注射液是否诱导红细胞溶血,酶标仪、流式细胞仪检测红细胞溶血率,并观测激活和阻断氯通道对葛根素注射液溶血作用的影响。结果：葛根素注射液可引起家兔红细胞体外溶血,在所观察的1.5 mg/ml~12 mg/ml范围内,溶血效应呈浓度依赖性增强（n=3,P<0.01）。氯通道阻断剂Tamoxifen （20 μmol/L）、ATP （10 mmol/L）可有效抑制葛根素注射液的溶血作用（n=3~5,P<0.01）;而使用低浓度ATP （50 μmol/L）激活氯通道,则显著增强葛根素注射液的溶血作用（n=4,P<0.01）。结论：葛根素注射液的体外溶血效应呈浓度依赖性,氯通道激活与葛根素注射液诱导的溶血反应密切相关。     

非洲菊小花托的离体培养

非洲菊无性系小花托外植体的离体培养结果发现,小花托的大小直接影响愈伤组织上芽的分化,其中直径为0.5~0.7 cm的花托小切块效果最好,随着直径的增大,芽的分化诱导率降低。在不同激素成分的MS培养基中,以6-BA(6-苄氨基嘌呤)10 mg/L诱导的效果最佳,而在IBA(吲哚丁酸)0.3 mg/L的(1)/(2) MS培养基中,幼苗的生根效果最佳。     

柑桔实生苗大量增殖研究

将枳和酸橙的实生试管苗上、下胚轴和子叶切割成若干段分别进行离体培养,结果表明,枳的各个切段在添加10^-4或5×10^-5摩尔BA的MS培养基中,不定芽形成率最高,平均每个外植体不定芽发生总量分别达41个和33.5个,其中以上胚轴发生的不定芽最多,占全部不定芽总量的66.6%。在上、下胚轴中,则以第一切段发生的不定芽最多。添加KT的所有处理,不定芽均较少,形成不定芽最多的处理也仅及N₀B₁处理的四分之一。发根量则以添加10^-5摩尔NAA的培养基最多。将枳的不定芽扦插于添加5×10^-6或10^-6摩尔NAA的MS培养基中,15-20天即可发根成苗。在完全相同的各个处理中,酸橙的不芽定形成量明显少于枳。     

转抗虫基因欧美黑杨离体快繁技术研究

以抗虫欧美黑杨的叶,带腋芽茎段为外植体进行离体快繁技术研究。最佳接种时间为8月份,新芽生长迅速。基本培养基为MS,较适初培养基为MS＋6－BA0.5mg/L（以下单位同）＋NAA0.01mg/,附加30g/L,蔗糖,7g/L琼脂。愈伤组织诱导并同时分化出新芽培养基为MS＋6－BA1.5 NAA0.3,附加40g/L蔗糖,6g/L琼脂。继代增殖培养基为MS 6-BA1.0 NAA0.1 GA2.0,附加30g/L蔗糖,5g/L琼脂。生根培养基为MS＋IBA2．0。     

不同浓度活性炭对墨兰离体培养的影响

以墨兰(Cymbidium sinense)地下根状茎段为外植体,探讨不同浓度活性炭对其离体培养的影响。结果表明,在MS+NAA 2.0 mg/L+10%椰汁的培养基中加入1.0 g/L活性炭对原球茎诱导效果最好;MS+BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+4.0 g/L活性炭适合于不定芽分化;在1/2 MS+NAA 1.0 mg/L+BA 0.5 mg/L+10%椰汁的培养基中加入0.5~3.0 g/L活性炭有利于提高成苗率。