脑内皮细胞与神经干细胞共培养促进神经干细胞的迁移

近些年来,人们发现神经发生和血管发生间有着密切的联系,并逐渐开始关注内皮细胞对神经干细胞（NSCs）的影响。人们发现内皮细胞对NSCs的自我更新、分化、迁移有着重要的调节作用,而NSCs对内皮细胞也有促血管形成的作用。有研究报道,内皮细胞具有分泌VEGF、BDNF、SDF-1等因子的功能,内皮细胞是否通过其分泌的因子对NSCs的迁移进行调节,     

炎症介质通过延迟嗜中性粒细胞凋亡促进内皮细胞的损伤

本研究采用分离纯化的人外周血NTP,以LPS/TNF激活后5:1和10:1与内皮细胞共同培养或隔离培养,加或不加10ng/ml IL-6、10%(v/v)烧伤血清,24h后观察NTP凋亡对体外培养内皮细胞损伤程度的影响及其关系。结果表明激活的NTP对内皮细胞没有明显损伤,但是加入IL-6和烧伤血清后,NTP凋亡延迟,内皮细胞受到损伤,表现为发生坏死,并且NTP对内皮细胞的损伤需要两种细胞的直接接触。     

炎症介质通过延迟嗜中性粒细胞凋亡促进内皮细胞的损伤

本研究采用分离纯化的人外周血NTP,以LPS／TNF激活后5：1和10：1与内皮细胞共同培养或隔离培养,加或不加10ng/ml IL-6、10％（v/v）烧伤血清,24h后观察NTP凋亡对体外培养内皮细胞损伤程度的影响及其关系。结果表明激活的NTP对内皮细胞没有明显损伤,但是加入IL－6和烧伤血清后,NTP凋亡延迟,内皮细胞受到损伤,表现为发生坏死,并且NTP对内皮细胞的损伤需要两种细胞的直接接触。     

阿魏酸在缺氧条件下促进人脐静脉内皮细胞血管形成的实验研究

目的:研究阿魏酸(ferulic acid,FA)在缺氧条件下对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移和管腔样结构形成的影响。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,在缺氧实验条件下,细胞被分为7组,即1个对照组和6个实验组。对照组采用1%酒精处理,实验组用不同浓度(1×10~(-8)、1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)、1×10~(-4)及1×10~(-3) mol/L)的阿魏酸处理。分别采用MTS法、划痕法、Matrigel法分析不同浓度阿魏酸处理对人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移和管腔样结构形成的影响。结果:缺氧条件下,浓度为1×10~(-6)~1×10~(-4)mol/L的阿魏酸处理能明显促进HUVECs的增殖(P0.05),以1×10~(-5) mol/L处理的效果最好(P0.01);与对照组相比,1×10~(-6)mol/L(P0.05)、1×10~(-5) mol/L(P0.01)及1×10~(-4) mol/L(P0.01)阿魏酸处理均能明显促进HUVECs横向迁移,以1×10~(-5) mol/L处理迁移的细胞数量最多;1×10~(-8)~1×10~(-4) mol/L阿魏酸处理能不同程度地促进HUVECs管腔样结构的形成,以1×10~(-5) mol/L处理形成管腔样结构的数量最多(P0.01)。结论:阿魏酸在缺氧条件下能促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移和管腔样结构形成。     

内质网应激条件下血管内皮细胞生长因子在人脑微血管内皮细胞中的表达

为观察内质网应激条件下血管内皮细胞生长因子的表达情况,用不同浓度的衣霉素处理体外培养的人脑微血管内皮细胞,建立内质网应激模型,采用RT—PCR、蛋白质免疫印迹以及免疫细胞化学的方法检测了细胞内血管内皮细胞生长因子的表达。结果发现血管内皮细胞生长因子在人脑微血管内皮细胞中存在一定的表达;内质网应激可诱导血管内皮细胞生长因子表达升高,随着衣霉素浓度的增高,血管内皮细胞生长因子的表达逐渐增加,与mRNA水平相比,血管内皮细胞生长因子蛋白量的增加更明显。实验结果提示人脑微血管内皮细胞中存在血管内皮细胞生长因子自分泌,血管内皮细胞生长因子可能是内质网应激的靶基因。     

胎盘间充质干细胞促进高糖条件下人角质形成细胞增殖与迁移

通过体外模拟糖尿病患者高血糖环境研究胎盘间充质干细胞(placenta mesenchymal stem cells, PMSCs)促进角质形成细胞的增殖和迁移能力,这对阐明PMSCs促进糖尿病足等皮肤创伤修复的作用具有重要意义。该研究分离培养人角质形成细胞(human keratinocytes, hKCs),添加50～100 mmol/L葡萄糖,建立高糖损伤模型。利用CCK-8检测损伤hKCs与PMSCs共培养前后的增殖情况,流式细胞术检测细凋亡胞数量,细胞划痕愈合实验检测细胞迁移速度,免疫荧光染色和Western blot检测细胞骨架蛋白波形蛋白(vimentin)的表达,以反映细胞的形态和运动能力。结果发现,原代hKCs为大小均一的铺路石样细胞,在模拟高血糖环境(50 mmol/L、100 mmol/L D-葡萄糖)时,细胞出现扁平、增大、增殖能力下降等衰老特点,角质形成细胞增殖率低,迁移区域稀疏。与对照组相比, PMSCs共培养组在高糖条件下hKCs生长速度快,增殖率高,凋亡率低,迁移覆盖面积较大,波形蛋白表达明显增强,形态发生间质样转变。以上结果说明, PMSCs不仅能够抑制高糖引起的人角质形成细胞凋亡,同时促进其增殖和迁移,为间充质干细胞促进皮肤创面愈合的基础与临床研究提供了新证据。     

低氧条件下大鼠血管内皮细胞的形态观察

原代培养大鼠血管内皮细胞,将培养箱内通入5%CO2-95%N2混合气体（氧分压为18.3 mmHg）并培养大鼠血管内皮细胞12、24h,使用MTT法、LDH活力测定及细胞骨架染色对低氧细胞模型鉴定,研究大鼠血管内皮细胞低氧模型的建立条件及其形态学特点。在低氧12h条件下,血管内皮细胞存活率降低、LDH释放增加,但细胞骨架保持完整;在低氧24h条件下,血管内皮细胞存活率降低、LDH释放增加,细胞骨架破碎。结果表明在低氧（氧分压为18.3 mmHg）24h条件下,可以建立大鼠血管内皮细胞低氧模型。     

CCL2促进大鼠原代心肌微血管内皮细胞血管形成

本文旨在探讨趋化因子CCL2在成年大鼠原代心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cell, CMEC)血管形成中的作用。分离原代大鼠CMEC,用CD31和VIII因子免疫染色鉴定,观察不同时间点基质胶(Matrigel)上CMEC血管形成情况,用real-time RT-PCR和ELISA分别检测在血管形成过程中CCL2的表达和分泌情况。结果显示:(1)大鼠原代CMEC分离成功,该细胞具有形成血管能力,成网数和节点数在Matrigel处理后4 h显著增加;(2) CMEC血管形成过程中CCL2和CCR2的表达量显著上调,并且CCL2的分泌量明显增加;(3) CCL2阻断抗体和CCR2拮抗剂均可显著降低CMEC血管形成能力。上述结果提示,大鼠原代CMEC在血管形成过程中可分泌CCL2,并且CCL2-CCR2信号通路促进了CMEC血管形成。     

急性低氧条件下大鼠循环血中内皮细胞及肺小动脉内皮细胞的改变

目的:探讨急性低氧对血管内皮细胞(VEC)和循环血液中内皮细胞(CEC)的影响.方法:用光镜观察急性低氧情况下血中CEC的形态并记数,用组织化学染色和显微分光光度计对血中年轻型CEC及肺小动脉VEC的乳酸脱氢酶(LDH)活性进行定量分析.结果:与低氧前相比,低氧后各组VEC的LDH活性均下降,且随低氧时间延长,LDH活性下降越明显.而低氧前后各组年轻型CEC的LDH活性是一致的,且明显低于各组VEC的LDH活性.低氧前CEC多为衰老型,低氧后CEC数量增多且多为年轻型,随低氧时间延长年轻型CEC增多越明显.结论:CEC的形态和数量的变化可以反映血管的损伤情况;VEC的LDH活性可以反映VEC向CEC转化的进程;年轻型CEC的LDH活性可以反映VEC脱落时的损伤程度.     

巨噬细胞炎症蛋白1α促进6T-CEM细胞穿过人脑微血管内皮细胞单层

有研究表明,T细胞可能参与阿尔茨海默氏病(AD)免疫过程,但T细胞如何穿过血脑屏障内皮细胞紧密连接,到达脑内还不清楚。我们研究曾发现,AD病人外周血T淋巴细胞穿过人脑微血管内皮细胞(HBMEC)单层能力高于同龄正常人,其T淋巴细胞巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)表达明显增高。为进一步在体外研究促使T淋巴细胞穿过HBMEC单层的机制,选取重组人MIP-1α(rhMIP-1α)作用于HBMEC,同时选用高表达MIP-1α的人急性白血病T淋巴细胞(6T-CEM)作为模式细胞,与HBMEC共同温育。发现rhMIP-1α可促进6T-CEM细胞穿过HBMEC单层,并使HBMEC单层紧密连接结构发生改变。在6T-CEM细胞或rhMIP-1α与HBMEC单层单独温育过程中,均引起HBMEC单层CCR5表达变化。提示MIP-1α可能通过与HBMEC单层上CCR5相互作用介导T淋巴细胞穿过HBMEC单层。     

跨通道迁移及其认知神经机制

跨通道迁移是指将在一种感觉通道获得的知识应用于另一感觉通道的能力。跨通道迁移的相关研究探索了大脑表征不同感觉通道信息的方式,为减少重复学习、提高认知加工效率提供了新的见解。为较好地概括跨通道迁移的特点和机制,本文首先介绍了在物体识别、类别学习和时间知觉等不同领域对跨通道迁移效应的实验研究,之后介绍了支持跨通道迁移的表征类型和相关理论,梳理了跨通道迁移产生的理论及采用事件相关电位（ERP）和功能磁共振成像（fMRI）等技术探讨跨通道迁移神经机制的研究进展,并指出了影响跨通道迁移的因素。最后,对目前跨通道迁移研究成果及其潜在应用进行了总结,并对这一领域未来的研究问题进行了展望。     

肿瘤条件培养基对人脐静脉内皮细胞增殖、黏附、迁移能力的调节

本文旨在研究肿瘤条件培养基(tumor conditioned medium,TCM)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖、黏附和迁移能力的影响.采用MTT法测定TCM作用24 h后内皮细胞的增殖水平,实验设对照组、TCM原液(TCM stoc...     

低氧条件下大脑皮层微血管平滑肌细胞内皮细胞中[Ca^2]i变？…

目的和方法 本研究采用离子探针Ｆｕｒａ－２／ＡＭ结合计算机图象分析技术,并通过施加ＮＯ合酶抑制剂Ｌ－ＮＮＡ和ＮＯ的作用靶－－鸟苷酸环化酶（ＧＣ）的抑制剂美兰（Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｂｌｕｅ;ＭＢ）,观察经培养的大鼠大脑皮层微血管内皮细胞和平滑肌细胞中的〖Ｃａ＾２＋〗ｉ在低氧作用后的变化以及与有关血管舒张因子ＮＯ和ｃＧＭＰ之间的关系。结果 低氧时大脑微血管内皮细胞和平滑肌细胞内的Ｃａ＾２＋浓度有下降,     

缺氧环境下MSCs促进血管内皮细胞增殖和血管形成

目的 探讨成人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)在体外缺氧环境下对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖和血管形成能力的影响及其可能机制.方法密度梯度离心法收集分离成人骨髓血MSCs并进行体外培养扩增,传代至4代进行实验,流式细胞仪鉴定MSCs表面标志.BMSCs缺氧培养0h(对照组)、12h、24h和48h后,RT-PCR检测SDF-1和VEGF基因表达,ELISA法检测细胞上清液中SDF-1和VEGF蛋白含量.HUVECs传代培养后分成三组进行实验:对照组、BMSCsCMN-HUVECs组,BMSCsCMH-HUVECs组,MTT检测三组细胞增殖能力,体外血管形成实验分析三组细胞在Matrigel上管腔样结构形成情况.结果 (1) BMSCs呈旋涡状长梭形即纤维母细胞样生长;(2) 人BMSCs阳性表达CD29、CD44和CD90,而CD34、CD45和CD106为阴性;(3) BMSCs缺氧培养后SDF-1和VEGF在mRNA和蛋白水平表达均较常氧培养显著增高(P均<0.05);(4) BMSCsCMH明显提高HUVECs增殖能力(P<0.05),显著增加HUVECs在Matrigel上形成管腔样结构的能力(P<0.05).结论 人BMSCs在缺氧环境下通过旁分泌SDF-1和VEGF提高血管内皮细胞增殖和管腔样结构形成能力,促进血管新生.     

内皮细胞条件培养液诱导单核细胞分化为内皮细胞的实验研究

目的研究ECV-304条件培养液诱导单核细胞分化为内皮细胞的可能性.方法贴壁法分离培养外周血单核细胞并进行鉴定.用购买的ECV-304细胞株制备条件培养液和M-CSF诱导单核细胞分化,观察细胞形态变化,收集细胞,用免疫组化与异植物血凝素结合试验鉴定.结果获得的单核细胞具有CD14阳性细胞占84.3%;刺激一周后的单核细胞形态发生改变并且Ⅷ因子、异植物血凝素结合试验阳性.结论 ECV-304条件培养液能诱导单核细胞分化为内皮细胞,提示内皮细胞来源的一条途径.     

低氧条件下大脑皮层微血管平滑肌细胞内皮细胞中[Ca~(2 )]_i变化的研究

目的和方法：本研究采用离子探针Ｆｕｒａ２／ＡＭ 结合计算机图象分析技术,并通过施加ＮＯ合酶抑制剂ＬＮＮＡ和ＮＯ的作用靶———鸟苷酸环化酶（ＧＣ）的抑制剂美兰（Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｂｌｕｅ;ＭＢ）,观察经培养的大鼠大脑皮层微血管内皮细胞和平滑肌细胞中的［Ｃａ２＋］ｉ 在低氧作用后的变化以及与有关血管舒张因子ＮＯ和ｃＧＭＰ之间的关系。结果：低氧时大脑微血管内皮细胞和平滑肌细胞内的Ｃａ２＋ 浓度有所下降,变化幅度的大小与低氧的程度及低氧作用的时间有关,且可以被ＬＮＮＡ和ＭＢ所抑制。结论：低氧时大脑微血管的舒张反应与ＮＯ的产生有关,ＮＯ通过细胞内的多种机制,最终使得胞内Ｃａ２＋ 下降而导致血管舒张     

信号转导和转录活化因子3通过趋化因子CX3C配体1促进血管内皮细胞增殖迁移

信号转导和转录活化因子3 (STAT3)与趋化因子CX3C配体1 (Fractalkine/CX3CL1)在血管炎症和损伤中起重要作用,为了探讨STAT3是否通过CX3CL1促进血管内皮细胞增殖和迁移,在血管内皮细胞(HUVEC)中过表达或敲降STAT3,通过quantitative real-time PCR、Western blotting实验确定STAT3对CX3CL1表达的影响。构建含有STAT3结合位点及突变STAT3结合位点的CX3CL1启动子荧光素酶报告基因质粒,利用荧光素酶活性分析实验研究STAT3对CX3CL1启动子转录活性的作用。利用MTT实验检测过表达或敲降STAT3或CX3CL1对血管内皮细胞增殖率的影响。利用划痕实验检测过表达或敲降STAT3或CX3CL1对血管内皮细胞迁移率的影响。结果显示,过表达STAT3可以促进CX3CL1表达,敲降STAT3可以使CX3CL1表达下调。STAT3可以直接结合到CX3CL1的启动子促进其转录激活,其促进作用依赖于CX3CL1启动子上的GAS位点。敲降STAT3可以抑制血管内皮细胞的迁移,过表达CX3CL1拮抗该抑制作用。总结得出,STAT3通过结合到CXCL1启动子促进CX3CL1转录与表达进而促进血管内皮的增殖与迁移。     

气候变化条件下山西翅果油树适宜分布区的空间迁移预测

气候变化对生物多样性的影响及其适应性直接关系着生物多样性保护的成效,预测未来气候变化条件下受威胁物种适宜生境的空间变化趋势对生物多样性保护具有重要的理论和实践意义.本文选取我国特有濒危植物翅果油树为研究对象,在区域尺度上预测气候变化条件下的物种适宜分布区,进而通过空间分析模拟不同气候变化情景下其适宜分布区的空间变化和迁移趋势.最大熵(Maxent)物种分布模型预测结果显示: 翅果油树的两个适宜分布区在未来气候变化情景下呈现不同的迁移趋势,吕梁山适生区呈现出纬度方向上的轻微波动,而中条山适生区则呈现出向高海拔地区迁移的趋势.适生区空间格局变化分析表明,翅果油树当前适生区的边界存在明显变化区域,包括新增适生区(零星分布在两个适生区的边缘地带,新增率为9.1%～20.9%)和丧失适生区(集中分布在吕梁山适生区北缘和中条山适生区东南部,丧失率为16.4%～31.2%),且两者对气候变化的响应较为敏感.利用分类统计工具Zonal计算得出,在未来气候变化条件下吕梁山适生区的中心点呈现向南迁移的趋势,最大迁移距离为7.451 km;中条山适生区的中心点则呈现出向西北迁移的趋势,最大迁移距离为8.284 km.表明山西翅果油树的分布对气候变化的响应较为剧烈.     

IGHMBP2过表达促进食管鳞癌细胞的侵袭和迁移

IGHMBP2(Immunoglobulin mu binding protein 2)基因编码一种解旋酶,参与DNA的复制和修复,并且作为转录调节因子在基因转录中发挥重要作用。IGHMBP2基因定位于11q13.2,该染色体区段在食管鳞癌中扩增频率较高。为了探讨IGHMBP2基因在食管鳞癌中的扩增情况及其在食管鳞癌中的作用,文章对本实验室前期报道的59例食管鳞癌原发肿瘤array-CGH数据进行分析,结果显示IGHMBP2基因扩增频率为28.9%(17/59)。进一步利用荧光原位杂交(FISH)和Western blot技术,发现食管鳞癌细胞系KYSE30、KYSE180、KYSE510和KYSE150中存在IGHMBP2基因扩增/增益以及蛋白高表达。敲降IGHMBP2后,KYSE30和KYSE150细胞的侵袭迁移能力明显降低(P<0.001),侵袭迁移相关蛋白E-cadherin的表达水平升高;敲降后转染IGHMBP2质粒,回复其蛋白表达后,细胞的侵袭迁移能力又得以恢复(P<0.01)。上述结果表明,IGHMBP2过表达可能通过降低E-cadherin的表达从而增强食管鳞癌细胞的侵袭迁移能力。     

Ⅲ型固有淋巴细胞在炎症性疾病中的作用

Ⅲ型固有淋巴细胞(group 3 innate lymphoid cells, ILC3)是近十年才被定义的一群新型免疫细胞,属于固有淋巴细胞家族。ILC3包括多种表型和功能差异的细胞亚群,主要分布于肠道、肺及皮肤等屏障组织,在机体免疫调节、组织修复和淋巴组织形成中起重要作用。然而,在多种炎症性疾病中,ILC3出现数量和功能异常,可通过分泌白介素(interleukin, IL)-17、IL-22、γ-干扰素(interferon γ, IFN-γ)及粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)等致炎性细胞因子调控其他免疫细胞和诱导异位淋巴结构形成,从而促进疾病的发生和进展。因此,深入探究ILC3的表型及功能对拓展炎症性疾病的认识和寻找新的治疗靶点具有重要意义。本文就ILC3的表型特点、生物学功能及其在炎症性疾病中的研究进展进行综述。