国产多孔钽材料修复兔胫骨缺损的实验研究

摘要 目的：研究国产多孔钽材料能否在兔胫骨缺损模型中顺利实现骨长入,用于修复胫骨缺损。方法：在36只新西兰大白兔双侧胫骨骨干处建立骨缺损模型,每只动物左右侧缺损随机分组,分别进入实验组(植入多孔坦材料)和对照组（不植入多孔坦材料）。植入后4周、8周和12周取材,通过X线检测以及硬组织切片苏木精伊红染色,检测多孔钽材料与骨界面的骨整合情况。采用推出实验检测多孔钽材料与骨界面的结合强度。结果：将术后不同时间点取得的胫骨标本作X射线拍片分析,4周时,骨缺损端与材料结合部位有骨质生成,在8周时材料表面有骨形成现象,逐渐完全覆盖材料表面,在12周时骨量继续增加,形成覆盖材料并桥接骨缺损断端的骨痂。样本行硬组织切片并行HE染色后检测,植入4周后实验组材料两端被新生骨所覆盖,材料深部的孔隙中也可见少量骨组织长入;植入8周后发现实验组材料与骨组织生长良好,多孔钽材料表面和两端材料孔隙内均有骨组织长入,材料孔隙与组织紧密连接,有骨小梁长入;植入12周时两端骨组织长入深度没有明显变化,但材料表面骨组织继续长入,并完全嵌入圆柱体材料内。材料植入后4周与8周比较差异无统计学意义（P＞0.05）,材料植入后8周与12周比较差异有统计学意义（P<0.05）。将植入4周、8周和12周后含材料样本置于动态疲劳试验机上进行推出实验,随时间延长所需推出力明显增加,植入后4周和8周相比,虽然后者所需推力较大,但两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）,而8周和12周比较则差异有统计学意义（P<0.05）。结论：国产多孔坦材料能在胫骨缺损中实现与骨整合,能用于皮质骨缺损修复。     

γ-PGA/HEMA/PEG聚合物晶胶支架修复兔眼眶骨折缺损的实验研究

目的 近年来,眶骨骨折发生率逐年增加,其治疗关键旨在修复缺损的眶骨,聚（γ-谷氨酸）/2-羟乙基甲基丙烯酸酯/聚（乙二醇）（γ-PGA/HEMA/PEG）聚合物晶胶是一种具有互连多孔结构的新型支架材料,研究旨在检验其在眼眶骨折缺损修复中的骨修复效果。方法 采用低温凝胶技术制备了γ-PGA/HEMA/PEG聚合物晶胶。制备了兔的眼眶骨缺损模型,根据植入支架材料的不同分为3组,空白对照组、聚合物晶胶组（Gel组）、矿化聚合物晶胶组（M-gel组）。植入后8周和16周标本取材进行大体观察,通过影像学和组织学检查观察其血管生成和成骨效果。结果 影像学检查结果表明,支架材料能有效促进眶骨缺损的修复,缺损区被骨组织完全替代。组织学结果表明,支架材料可以增加Runt相关转录因子2（Runx-2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）和血小板内皮细胞黏附分子1（CD31）的表达,这表明支架材料植入后血管生成和成骨能力增强。结论 矿化聚合物晶胶是一种良好的眼眶骨折缺损修复的支架材料。     

不同脱钙条件下三种脱钙液脱钙效果的比较

目的探讨在常温和加温脱钙条件下,甲酸混合液、Alexander硝酸甲醛液及Jenking脱钙液的脱钙效果和染色结果。方法取小鼠膝关节骨组织分为6份,根据脱钙条件和脱钙液的不同,分为常温脱钙组合加温脱钙组两组。常温脱钙组:三种脱钙液常温(25℃)脱钙48h并石蜡切片HE染色;加温脱钙组:三种脱钙液70℃温箱脱钙6h并石蜡切片HE染色,并分别观察骨组织在不同脱钙液及脱钙条件下的脱钙效果及染色结果。结果常温(25℃)脱钙组标本中,经甲酸混合液脱钙的骨组织较难切片,染色较差;经Alexander硝酸甲醛液脱钙的骨组织较易切片,染色较差;经Jenking脱钙液脱钙的骨组织较易切片,染色较好。加温脱钙组标本中,经甲酸混合液脱钙的骨组织较易切片,染色较好;经Alexander硝酸甲醛液脱钙的骨组织较易切片,染色一般;经Jenking脱钙液脱钙的骨组织较易切片,染色较好。结论不同的脱钙液种类及脱钙条件对脱钙及染色结果有较大的影响,标本经三种脱钙液加温脱钙后,使脱钙时间大大缩短,减少了酸对组织的破坏,在脱钙效果及染色结果方面,均要优于常温脱钙,而Jenking脱钙液无论在常温和加温条件下的脱钙和染色效果均要优于其它两种脱钙液,有一定的应用价值。     

胶原蛋白/BMP复合材料的制备和成骨性能研究

以胶原膜(含87.5 mg I型胶原蛋白)为载体, 复合3.5 mg rhBMP-2(人基因重组骨形成蛋白-2), 制备胶原蛋白/BMP复合材料。复合材料首先在兔背阔肌中埋置, 预构新生骨组织, 并采用ALP染色、Von Kossa染色和HE染色等观察复合材料的成骨过程和组织形态。然后将形成的新骨组织游离移植修复自体下颌骨体部洞穿性缺损; 并设以胶原为载体的rhBMP-2复合骨修复材料直接修复为对照组, 骨缺损不修复组为空白组。采用X线、抗压强度、硬组织切片、四环素荧光染色、骨形态计量检查, 观察复合材料修复骨缺损的质量和效果。结果表明, 胶原蛋白/BMP复合材料在兔背阔肌中4～6周成骨, 胶原材料于3～5周降解; 成骨过程为是以软骨成骨为主的方式, 新骨形态为编织骨, 可见明显的微血管分布; 游离移植修复自体下颌骨缺损, 6周缺损区为骨性愈合, 与对照组在抗压强度(P = 0.041)、新骨量(P = 0.034)均有显著性差异。胶原蛋白/BMP复合材料在骨骼肌中形成的新生骨组织可作为供骨修复一定范围的骨缺损。     

胶原蛋白/BMP复合材料的制备和成骨性能研究

以胶原膜(含87.5 mg I型胶原蛋白)为载体, 复合3.5 mg rhBMP-2(人基因重组骨形成蛋白-2), 制备胶原蛋白/BMP复合材料。复合材料首先在兔背阔肌中埋置, 预构新生骨组织, 并采用ALP染色、Von Kossa染色和HE染色等观察复合材料的成骨过程和组织形态。然后将形成的新骨组织游离移植修复自体下颌骨体部洞穿性缺损; 并设以胶原为载体的rhBMP-2复合骨修复材料直接修复为对照组, 骨缺损不修复组为空白组。采用X线、抗压强度、硬组织切片、四环素荧光染色、骨形态计量检查, 观察复合材料修复骨缺损的质量和效果。结果表明, 胶原蛋白/BMP复合材料在兔背阔肌中4～6周成骨, 胶原材料于3～5周降解; 成骨过程为是以软骨成骨为主的方式, 新骨形态为编织骨, 可见明显的微血管分布; 游离移植修复自体下颌骨缺损, 6周缺损区为骨性愈合, 与对照组在抗压强度(P = 0.041)、新骨量(P = 0.034)均有显著性差异。胶原蛋白/BMP复合材料在骨骼肌中形成的新生骨组织可作为供骨修复一定范围的骨缺损。     

玻璃化法与低温冷冻法保存兔关节软骨异体移植的实验对比研究

目的:观察玻璃化法保存同种异体软骨移植修复兔关节软骨缺损的效果,并与低温冷冻法作比较.方法:18只健康成年日本大白兔,其中6只用于异体骨软骨柱的制备,另外12只随机分成2组,每组各6只.软骨移植物标本取材后,采用低温冷冻法和玻璃化法保存2w.同种异体骨软骨移植物相应复温后移植于兔膝关节软骨缺损模型的相应软骨缺损区.移植术后12w处死动物,移植区软骨组织后固定、切片、脱钙及石蜡包埋.采用苏木精-伊红染色及蕃红-O染色后进行组织学观察及Mankin评分.结果:玻璃化组软骨移植区颜色与周围正常软骨组织基本一致,软骨完整,无坍陷及裂纹;镜下观察可见其组织深层透明软骨样组织,浅层软骨区可见纤维样软骨组织,细胞成熟,大量分泌软骨基质.低温冷冻组软骨移植区表面欠光整,存在裂隙及轻度坍陷;镜下观察可见少量纤维样软骨组织,大部分为纤维结缔组织,细胞排列相对紊乱,软骨基质分泌量少.两组的组织学Mankin评分分别为9.6± 2.4和3.0± 1.0,低温冷冻组显著高于玻璃化组(t=2.014,P=0.000).结论:采用玻璃化法保存兔同种异体软骨移植物是一种可行的方法.相比低温冷冻法,玻璃化法保存的同种异体软骨其移植术后,软骨修复区的组织更接近正常软骨.     

雌激素受体、环氧化酶-2在卵巢癌患者中的表达及临床意义

摘要 目的：探讨雌激素受体（ER）、环氧化酶-2（COX-2）在卵巢癌患者中的表达及临床意义。方法：选取经病理手术确诊的120例患者的石蜡卵巢组织切片标本,其中卵巢癌54例,卵巢良性肿瘤66例。采用免疫组化检测ER、COX-2的表达情况。结果：ER和COX-2在卵巢癌组织中的阳性表达率明显高于良性卵巢肿瘤组织（P＜0.05）。Ⅳ期卵巢癌组织中ER阳性表达率明显高于Ⅰ期（P＜0.05）,其余病理分期比较无差异（P>0.05）;不同病理分期的COX-2阳性表达率比较无差异（P>0.05）。不同组织学分级卵巢癌组织中ER阳性表达率组组比较均无差异（P>0.05）。Ⅱ级卵巢癌组织中COX-2阳性表达率明显高于Ⅰ级（P<0.05）,其余病理分级比较无统计学意义（P>0.05）。伴有转移卵巢癌组织中ER阳性表达率明显高于无转移（P<0.05）;伴有转移卵巢癌组织中COX-2阳性表达率与无转移比较无统计学意义（P>0.05）;伴有转移卵巢癌组织中ER、COX-2表达免疫组织化学评分法（IHS）评分均高于无转移（P＜0.05）。结论：ER和COX-2在卵巢癌组织和卵巢良性肿瘤组织中的表达逐渐上调,且在卵巢癌组织的表达高于卵巢良性肿瘤组织;ER的表达与卵巢癌病理分期和转移相关,COX-2与组织学分级相关,二者对卵巢癌病情的预测具有互补性,可作为生物学指标,对卵巢癌恶性程度进行判断评估。     

Bmi1过表达通过促进增殖、抑制凋亡纠正活性维生素D缺乏引起的骨量降低

摘要 目的：探索B淋巴瘤Mo-MLV插入区1（B cell-specific MLV integration site-1, Bmi-1）过表达能否通过促进增殖、抑制凋亡改善1,25-二羟基维生素D (1,25-dihydroxy vitamin d,1,25(OH) ₂D)缺乏引起的小鼠骨质骨量丢失。方法：取8月龄Bmi-1 ^Tg 、Bmi1 ^Tg 1α(OH)ase^+/-与 1α(OH)ase^+/-小鼠以及同窝野生型（wild type, WT）小鼠椎骨组织,通过流式细胞术及TUNEL染色检测间充质干细胞周期变化及凋亡水平,通过PCNA染色及免疫组织化学染色检测小鼠椎骨组织中Bcl-2、Caspase-3等指标的变化,通过Western blot检测小鼠椎骨中Caspase-3、CDK4、CDK6、OPN、OCN等蛋白表达量的差异,通过ALP染色检查成骨细胞骨形成水平。结果：在骨髓间充质干细胞中过表达Bmi1可以通过促进增殖,抑制凋亡、增加成骨细胞骨形成来纠正1α(OH)ase^+/-小鼠的骨量降低。结论：Bmi1是1,25(OH) ₂D的关键下游靶点,在防止1,25(OH) ₂D缺乏引起的骨丢失方面起着至关重要的作用。     

交联I型胶原复合生物玻璃在兔股骨远端缺损中的成骨作用

摘要 目的：评价交联度不同的I型胶原复合生物玻璃后作为人工骨移植物在兔股骨髁部骨缺损中的修复作用,以研究一种成骨性能优秀,降解速度令人满意,且具有可塑性,便于术中使用的新型人工骨移植材料。方法：本研究设置实验组及对照组,实验组为交联度70%的高交联I型胶原复合生物玻璃以及交联度为45%的低交联I型胶原复合生物玻璃。对照组为普通未交联I型胶原复合生物玻璃。于9只新西兰大白兔双下肢股骨髁部制备动物骨缺损模型,将随机分组后的三种骨移植物分别植入股骨髁部骨缺损模型中。术后6周取材行组织学分析研究,比较3种骨移植物在骨缺损中的新骨生成率。结果：组织学分析结果显示,高交联组的新骨生成率为5.23 0.87%,其成骨性能显著低于低交联组13.23 1.13%以及未交联组的12.63 0.92%（P<0.05）。而低交联组的新骨生成率与未交联组之间无统计学差异（P>0.05）。结论：交联度为45%的低交联I型胶原复合生物玻璃具有更好的成骨能力,作为骨移植材料在临床应用中具有更广阔的发展前景。     

胎盘脱细胞基质作为组织修复材料的初步研究

目的 制备胎盘脱细胞基质并评价其生物相容性，探讨其作为组织修复材料的可行性。方法 利用分娩废弃物胎盘组织，进行病毒灭活、脱细胞处理、冷冻干燥得到胎盘脱细胞海绵状基质材料，HE染色观察脱细胞效果及扫描电镜观察材料微观结构。同时，选取健康雄性SD大鼠39只，体质量120～150 g，随机分为实验1组、实验2组及对照组。对构建的基质材料进行大鼠皮下植入实验，实验1组植入基质材料，实验2组植入基质材料及脐带间充质干细胞，对照组为假手术组。于手术后第3、5、7天进行动物血常规检测，分析淋巴细胞、粒细胞等炎性细胞数量；于手术后第1、2、4、8、9周取材料植入处及周围组织样本进行HE染色分析。结果 构建的胎盘脱细胞基质肉眼观呈乳白色海绵状，HE染色未见细胞残留，电镜观察材料内部空隙比较明显，材料交联度较好，总孔隙率为（77.54±2.53）%。皮下植入之后，切口处愈合良好，血常规结果未见明显的炎性细胞增多；术后7 d植入材料切片HE染色即可见血管形成，且脐带间充质干细胞的加入能够加快材料与机体的融合，促进细胞的深入生长及血管化。结论 胎盘脱细胞海绵基质材料具有良好的生物相容性，可作为组织工程材料的理想来源。     

A method for immunohistochemical detection of osteogenic markers in undecalcified bone sections

To evaluate the osteogenic potential of novel implant materials, it is important to examine their effect on osteoblastic differentiation. Characterizing the tissue response at the bone-biomaterial interface in vivo at a molecular level would contribute significantly to enhancing our understanding of tissue integration of endosseous implant materials. We describe here a new technique that overcomes difficulties commonly associated with performing immunohistochemistry on undecalcified sawed sections of bone. Sheep mandible specimens were fixed in an ethanol based fixative to maintain adequate antigenicity of the tissue. As a result, it was possible to omit antigen retrieval at high temperature for recovery of antigenicity, and detachment of sections from the slides was avoided. Following dehydration and infiltration, the specimens were embedded in a resin composed of polymethylmethacrylate and polybutylmethacrylate. Polymerization was achieved by adding benzoylperoxide and N,N-dimethyl-toluidine. This resin was selected because it maintained the antigenicity of the tissue, provided adequate properties for cutting 50 µm thick sections, and it facilitated deacrylizing the sawed sections. Acid-resistant acrylic slides were glued to the blocks using an epoxy resin based two-component adhesive to avoid detachment of the slides during the deacrylation procedure. Samples were stained for alkaline phosphatase, type I collagen, osteonectin, osteopontin, osteocalcin and bone sialoprotein. The EnVision + ™ dextran polymer conjugate two-step visualization system was applied for immunohistochemical detection of these bone matrix proteins. This procedure yielded positive staining for the osteogenic markers in cells and matrix components. The protocol described here facilitates the use of immunohistochemistry on resin embedded sawed sections of bone and provides a convenient and reliable method that can be used routinely for immunohistochemical analysis of hard tissue specimens containing implant materials.     

脂肪干细胞的诱导分化及其来源的研究

目的:通过组织块培养法得到脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),探讨其诱导分化潜能,并初步研究ADSCs的来源。方法:用脂肪组织块培养法培养原代人ADSCs。第三代ADSCs进行成脂和成骨诱导分化,分别用油红O和茜素红S染色进行鉴定。脂肪组织块培养七天后取脂肪组织进行Hematoxylin-eosin Staining(HE)染色观察ADSCs组织分布。结果:用脂肪组织块培养法成功培养出原代人ADSCs。ADSCs传代到第8代,依然保持着良好的增殖能力和细胞形态。ADSCs能成功诱导成脂肪细胞和骨细胞。通过对培养七天后的脂肪组织块进行HE染色,发现ADSCs主要分布在脂肪组织的间质血管和结缔组织周围。结论:用脂肪组织块培养出来的ADSCs具有成脂和成骨分化的潜能。ADSCs主要定位于间质血管和结缔组织周围。     

Evaluation of improved zirconyl hematoxylin compared to the classical pH 2.5 Alcian blue method for demonstrating acid mucins

Abstract

Acid mucins have diagnostic significance for many pathological conditions, especially in certain tumors. We compared the classical pH 2.5 Alcian blue method to a new, improved zirconyl hematoxylin (IZH) method for demonstrating acid mucins using two fixatives: Bouin`s solution and 10% neutral buffered formalin (NBF). We used rabbit small intestine, large intestine and trachea. Specimens were fixed in Bouin`s solution and NBF. A total of 160 paraffin sections were prepared and stained with pH 2.5 Alcian blue and IZH. The stained acid mucins were assessed using digital image analysis software. Stained mucins were quantified for each staining procedure and fixative. No important differences were observed in acid mucin staining by either method after either fixative. The IZH method provides results as good as pH 2.5 Alcian blue and can be used to obtain reliable staining for acid mucins.     

椎体加椎间植骨融合术在腰椎爆裂性骨折患者中的应用效果与安全性探究

目的:探讨椎体加椎间植骨融合术在治疗腰椎爆裂性骨折患者中的临床效果及安全性。方法:选取2016年12月～2017年10月我院骨科收治的腰椎爆裂性骨折患者90例,按照手术方式将患者分成研究组和对照组,每组45例。研究组给予后路内固定术联合椎体加椎间植骨术治疗,对照组给予后路内固定术联合后外侧植骨术治疗。比较两组患者的手术时间、手术出血量以及术后3个月和12个月的椎体Cobb角、患者术后骨折愈合情况、内固定有效情况。结果:研究组手术时间、术中出血量、术后3个月和12个月椎体Cobb角明显短于或低于对照组,但骨折愈合率、内固定有效率显著高于对照组,组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论:椎体加椎间植骨融合术治疗腰椎爆裂性骨折的临床综合效果显著优于后路内固定术联合后外侧植骨术治疗,且安全性较好。     

多种特殊染色法在骨关节炎组织形态学研究中的应用比较

目的探讨多种特殊染色法在骨关节组织中的染色规律及其在骨关节炎形态学研究中的应用价值。方法 6月龄健康新西兰大白兔20只,随机分为正常组和造模组各10只,根据改良Hulth法造模,6周后膝关节取材。对标本固定、脱钙后进行石蜡包埋和切片。分别采用HE、番红-固绿、AB-PAS、甲苯胺蓝、Van Gieson染色和Mallory染色,观察骨关节组织的形态学变化,并对几种染色方法进行比较。结果 HE染色显示关节一般组织形态结构,可见模型组关节软骨和软骨下骨发生骨性关节炎病理变化;番红-固绿染色法中软骨和软骨下骨的界限（黏合线）以及潮线显示清晰,软骨基质中糖胺聚糖含量减少,纤维成分增多;AB-PAS染色显示骨关节炎软骨基质糖胺聚糖尤其是酸性糖胺聚糖含量减少;甲苯胺蓝染色显示骨关节炎软骨的酸性糖胺聚糖减少;Van Gieson染色和Mallory染色可显示骨关节组织中的胶原纤维,但组织结构界限不够清晰。结论在骨性关节炎的组织形态学研究中,通过常规HE染色,结合番红-固绿染色法和AB-PAS染色法,能较客观全面地获得关节组织形态学相关信息。     

骨髓间充质干细胞复合支架材料的骨组织工程研究进展

近年来,组织工程技术飞速发展,将种子细胞与支架材料相复合的骨组织工程研究已成为热点,并日趋走向成熟。这一全新的治疗方案将成为解决临床上各种原因造成的骨组织缺损的最有效途径之一。骨组织工程技术包括种子细胞、支架材料和生长因子三个方面。其中,BMSCs因具有多向分化能力、强大的增殖能力以及低免疫源性被认为是最理想的种子细胞,而支架材料的种类有很多种,目前对支架材料的选择也尚有分歧。如何找到理想的支架材料是骨组织工程研究中亟待解决的重要问题。本文就组织工程中与骨髓间充质干细胞(BMSCs)相复合的各类支架材料的研究现状进行综述,这些支架材料的研究将为骨组织工程支架材料的选择提供有效依据。     

Localization of mRNAs and Proteins in Methyl Methacrylate�Cembedded Tissues

Precise localization of proteins and mRNA in histological sections is necessary for evaluating spatial gene expression patterns. Here we report sensitive detection of the gene products in fish tissues by immunohistochemistry (IHC) and in situ hybridization (ISH) assays on sections of whole specimens and vertebra embedded in methyl methacrylate (MMA) resin. This plastic resin favors easy preparation of various specimen types and enables preparation of large sections with well-preserved cell morphology. IHC analysis of the muscle regulatory factor MyoD in transverse sections of juvenile cod revealed MyoD-positive cells in the dorsolateral parts of the adaxial muscle. ISH revealed less spatially restricted signals of the bone morphogenic protein bmp4 in muscle and brain. To assess the applicability of ISH on sections of bony tissue, col1a1 and col2a1 expression was investigated in non-decalcified vertebra sections of Atlantic salmon. The former was identified in both chondrocytes and osteoblasts, whereas the latter was mostly evident in chondrocytes. We conclude that MMA resin offers easy preparation of large and problematic tissues and the possibility of carrying out both IHC and ISH analyses using standard protocols. (J Histochem Cytochem 57:825–830, 2009)     

Comparison of verdeluz orange G and modified Gallego stains

Tumors of the oral cavity include combinations of hard and soft tissues that may be difficult to identify using routine hematoxylin and eosin (H & E) staining. Although combination stains can demonstrate hard and soft tissues, trichrome stains, such as VanGieson and Masson, cannot differentiate dental hard tissues, such as dentin, cementum and osteoid. Modified Gallegos (MGS) and verdeluz orange G-acid fuchsin (VOF) stains can differentiate components of teeth. We used 10 tissue sections of decalcified bone and 10 pathologic tissue sections that contained different calcified tissues including peripheral ossifying fibroma, odontoma, central ossifying fibroma and cemento-ossifying fibroma. Sections were stained with H & E, VOF or MGS. H and E stained both hard tissues pink. VOF stained bone purple-red, cementum red and collagen blue. MGS stained bone green-blue, cementum red and collagen blue. VOF staining intensity and differentiation was better than MGS staining. VOF staining demonstrated hard tissue components distinctly and exhibited good contrast with the surrounding connective tissue. VOF also is a simple, single step, rapid staining procedure.     

正常新西兰白兔阴茎组织超声成像特征的实验研究

目的:明确正常新西兰白兔阴茎组织超声成像特征。方法:性成熟健康新西兰白兔3只(月龄4-5月),猝死后将阴茎切除放入4%中性福尔马林中固定24小时。将阴茎标本置入纯净水中,进行超声成像,扫查切面选择阴茎横截面。将阴茎标本横断面制成病理切片,进行HE染色观察。结果:超声成像清晰显示:阴茎包皮及皮下软组织、阴茎海绵体白膜、阴茎海绵体、尿道海绵体,这些结构的空间位置关系与阴茎标本和组织病理切片完全一致;同时,利用二维超声图像显示的白膜边界进行阴茎海绵体内径的测量,测值与组织病理切片基本一致。结论:利用二维超声可以观察和测量新西兰白兔阴茎组织结构,超声成像可以作为新西兰白兔阴茎疾病模型研究的一项影像学检测方法。