婴儿肠道细菌及乳杆菌种群多样性研究

目的 对婴儿肠道细菌及乳杆菌组成进行分析。方法 以66例出生1～7d的婴儿为调查对象,用分子生物学的手段,借助肠道细菌DNA指纹图谱和16S rDNA PCR扩增克隆分类（RFLP）技术。结果 婴儿肠道菌群随出生天数增加而变化;乳杆菌特异性引物对PCR扩增结果表明,出生4h后乳杆菌已在婴儿肠道内定植,且定植时间与分娩方式无关;克隆多样性研究则显示婴儿肠道乳杆菌优势菌群为植物乳杆菌（74％）、嗜酸乳杆菌（14％）和约氏乳杆菌（12％）。结论 婴儿肠道中的优势乳杆菌主要为植物乳杆菌。     

产妇阴道微生物群变化与早产风险相关性研究

目的 探讨产妇阴道微生物群与早产风险的相关性。方法 选取2017年6月—2018年6月在大连市妇幼保健院产科出生并在新生儿科住院治疗的早产孕妇133例作为早产组。在早产孕妇分娩后42 d收集产妇阴道分泌物,通过实时荧光定量PCR法检测样本菌群数量。同时,选取同期生产足月新生儿的孕妇130例为足月组。结果 早产孕妇阴道菌群中,普雷沃菌、吲哚嗜胨菌和阴道加德纳菌的数量要明显高于足月生产孕妇,乳杆菌数量低于足月生产孕妇。相关性检验显示,早产组中普雷沃菌、吲哚嗜胨菌、阴道加德纳菌的阳性数要明显大于足月组,具有明显的相关性（均P<0.05）;早产组中乳杆菌的阳性数要明显小于足月组,具有明显的相关性（P<0.05）。结论 阴道菌群失调与早产存在相关性。     

晚期孕妇生殖道感染无乳链球菌与新生儿感染的相关性研究

目的探讨妊娠晚期妇女生殖道感染无乳链球菌（GBS）与新生儿感染的关系。方法在慈溪市妇幼保健院1192例胎膜早破妊娠晚期妇女进行宫颈分泌物培养,同时对其分娩的1196个新生儿进行鼻咽分泌物培养作为观察组,同时选择同期无胎膜早破的妊娠晚期妇女500例作为对照组进行比较。观察胎膜早破合并GBS阳性妊娠晚期妇女与新生儿感染的相关性。结果观察组分离无乳链球菌比例为16．1％（192／1192）,对照组分离无乳链球菌比例为6．0％（30／500）,两组比较无乳链球菌感染与胎膜早破差异有统计学意义（P〈0．05）。早破合并GBS阳性的妊娠晚期妇女新生儿感染率与破膜时间和分娩产程有关,破膜时间〈24h与〉24h的妊娠晚期妇女,其新生儿感染率与破膜时间成正比,产程〈24h的妊娠晚期妇女新生儿感染率明显低于24h以上的妊娠晚期妇女。结论妊娠晚期妇女无乳链球菌感染与胎膜早破有关,从而引起新生儿感染,为了早期预防新生儿感染,应对GBS阳性的妊娠晚期妇女及时治疗,并严格控制早破时间和缩短分娩产程。     

应用qPCR方法快速定量检测阴道分泌物中乳杆菌的研究

目的建立快速、定量检测女性阴道分泌物中乳杆菌的方法。方法合成针对乳杆菌的特异性引物,建立乳杆菌qPCR标准曲线后,进一步对收集得到的健康女性及细菌性阴道病女性阴道分泌物样品中乳杆菌进行定量检测。结果引物仅扩增出乳杆菌特异性DNA条带,qPCR能够检测到各分泌物样本中乳杆菌的数量。结论建立了一种快速、定量女性阴道分泌物中乳杆菌检测方法。     

不同方案阴道乳杆菌活菌胶囊结合抗菌药物治疗混合性阴道炎的临床研究

研究两种阴道乳杆菌活菌胶囊结合抗菌药物对混合性阴道炎的疗效。

选取2015年4月至2020年12月北京大学第一医院收治的混合性阴道炎患者50例。同时符合以下两项即确诊为混合性阴道炎：（1）阴道分泌物真菌检测阳性;（2）阴道分泌物革兰染色积分法评分（Nugent评分）≥7分;（3）阴道分泌物滴虫镜检阳性。入选患者根据乳杆菌胶囊使用方法分为联合组（25例）及序贯组（25例）,联合组在使用抗菌药物的同时使用阴道乳杆菌活菌胶囊,序贯组在使用抗菌药物结束后序贯使用阴道乳杆菌活菌胶囊。评估两组患者病原体转阴率、症状改善及乳杆菌恢复情况。

序贯组患者综合治愈率高于联合组（56.0% vs 28.0%,P＜0.05）。经过治疗后,联合组有12.0%的患者阴道菌群恢复为形态类似乳杆菌的革兰阳性大杆菌,序贯组有32.0%恢复为形态类似乳杆菌的革兰阳性大杆菌,两组差异无统计学意义（P＞0.05）,但序贯组在趋势上高于联合组。

对于混合性阴道炎的治疗来说,抗菌药物治疗后序贯使用阴道乳杆菌活菌胶囊优于抗菌药物治疗同时联合使用阴道乳杆菌活菌胶囊。

     

BV三联法在细菌性阴道病诊断中的应用与评价

目的探讨BV三联法在诊断细菌性阴道病中的临床价值方法用BV三联法（检测患者阴道分泌物中的过氧化氢浓度、唾液酸苷酶、白细胞脂酶）和Amsel法（检测阴道分泌物并对阴道分泌物进行涂片革兰染色镜检）。结果BV三联法与Amsel法结合涂片革兰染色结果差异无显著性（P〈0．05）。结论BV三联法是一种新型、简便、快速的方法,可用于临床辅助诊断细菌性阴道病。     

甲硝唑治疗细菌性阴道病前后阴道菌群的结构变化及其预后相关性

目的研究经甲硝唑规范治疗的细菌性阴道病患者在用药后6~8d随访时的菌群结构与治疗前以及治疗结局之间的关系,探讨治愈人群与治疗失败人群在6~8d这一观察点的阴道菌群多样性的差异,从而为实现细菌性阴道病治疗结局的预测提供理论依据。方法选取2012年9月至2013年7月在北京大学第一医院妇产科门诊诊断为细菌性阴道病的育龄期女性为研究对象,规范使用甲硝唑凝胶治疗,分别采集患者用药前、用药后6~8d、用药后1个月的阴道分泌物,提取细菌组DNA,进行454焦磷酸测序,分析阴道微生物菌群的多样性和丰度差异,探讨细菌性阴道病患者阴道菌群的构成差异与预后之间的相关性。结果共61名患者完成了2次随访,共计183份阴道分泌物样品。对所有采集的标本进行454焦磷酸测序分析,共发现192种细菌。用药后6~8d的革兰染色涂片结果显示所有患者的阴道菌群镜下可分为三种情况:正常菌群、菌群抑制、异常菌群。镜检涂片为正常菌群的治愈率最高,其次是菌群抑制,异常菌群的治愈率最低。454焦磷酸测序分析显示甲硝唑治疗前后菌群的多样性和丰度发生了一定程度的变化,乳杆菌和球菌的含量未受明显影响,而细菌性阴道病致病菌的含量明显减少。结论甲硝唑可以有效减少细菌性阴道病致病菌的数量而不影响乳杆菌的含量,但是对以球菌为主的患者治疗效果差。对高通量测序结果和革兰染色涂片结果的综合分析显示甲硝唑用药后6~8d的阴道菌群对细菌性阴道病1个月后的治疗结局具有预测价值。     

1316例阴道病患者病原体与pH结果分析

目的了解妇女阴道病患者阴道分泌物中几种病原菌的分布情况,揭示各种阴道病病原菌与pH之间的关系。方法对1 316例阴道病患者阴道分泌物标本直接涂片革兰染色镜检、生理盐水湿片镜检及pH测定。结果 1 316例阴道病患者中检出细菌性阴道病384例,阴道pH 4.4~5.6,占29.18%;UU感染阴道病252例,阴道pH 5.0~6.1,占19.15%;MH感染40例,阴道pH 4.7~6.1,占3.04%;CT感染20例,pH 4.7~5.6,占1.52%;念珠菌感染164例pH 4.4~5.0,占12.46%;阴道毛滴虫感染92例,pH 5.0~5.6,占6.99%。结论本研究检出妇女阴道病主要以细菌性阴道病与支原体及衣原体性阴道病较高,且4种常见病原体引起的感染患者pH两两比较差异均有统计学意义(P<0.05),说明pH检测快速、简便,具有一定的诊断价值。     

基于实时定量PCR技术的育龄期细菌性阴道病患者阴道菌群结构分析及其临床应用

目的 探讨育龄期女性细菌性阴道病（bacterial vaginosis,BV）患者阴道优势菌群变化及其与临床指标的相关性。方法 选择本院门诊确诊的育龄期BV患者35例和同期入院体检的健康体检女性37例,无菌拭子采集阴道中段壁分泌物,提取细菌基因组DNA,采用实时定量PCR技术（real-time quantitative PCR,qPCR）进行阴道优势细菌检测,并进行其与临床指标如阴道pH和Nugent评分相关性分析。结果 乳杆菌属细菌及其种水平的细菌如惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌等在BV患者中均显著下降,BV相关阴道致病细菌如加德纳菌属、奇异菌属、埃格特菌属、巨型球菌I型菌属、纤毛菌属和普氏菌属显著升高（P<0.05）。阴道致病菌群与阴道pH和Nugent评分呈显著正相关,而阴道卷曲乳杆菌和惰性乳杆菌与其呈负相关。结论 育龄期BV患者阴道优势菌群显著失衡,并与阴道pH和Nugent评分显著相关,提示阴道优势菌群改变参与BV发生发展。     

先兆早产阴道微生态失衡状况分析

目的 分析先兆早产妇女阴道微生态失衡状况。方法 选择2013—2014年在我科住院的保胎的孕28周~36+6周无明显诱因先兆早产的单胎妊娠期妇女87例。取其阴道分泌物,选用阴道pH值、阴道清洁度、过氧化氢（H2O2）浓度、白细胞酯酶（LE）和唾液酸苷酶（SnaSe）等指标对阴道微生态进行评价。结果 先兆早产妇女阴道微生态失衡发生率为70.1%。阴道分泌物检查清洁度Ⅲ~Ⅳ不正常者61例,乳杆菌均阴性。H2O2阳性率为47.5%,H2O2+LE阳性率为13.1%,显微镜检查出线索细胞+LE+H2O2+SnaSe阳性率共占6.6%,涂片镜检查出滴虫+LE+H2O2阳性率为3.3%,涂片镜检查出酵母样真菌孢子+LE+H2O2阳性率14.8%。结论 先兆早产孕妇阴道微生态失衡率较高,可能是导致早产及足月前胎膜早破的重要原因。     

革兰染色对患者阴道分泌物的检验价值

目的探讨革兰染色对患者阴道分泌物的检验价值。方法选择2015年4月至2017年4月于诸暨市中心医院进行阴道分泌物检验的阴道炎患者为研究对象,共1 600例。采用生理盐水镜检法和革兰染色法对分泌物进行检验,比较两种检验方法对分泌物病变的检出情况,同时比较两种检验方法的特异性和敏感性。结果革兰染色法对分泌物病变的检出率为32.50%,生理盐水镜检法的检出率为28.50%,二者差异有统计学意义(P0.05)。革兰染色法对阴道分泌物检验的准确性、敏感性及特异性分别为95.61%、96.34%、97.87%,均高于生理盐水镜检法,差异有统计学意义(P0.05)。结论阴道分泌物检验是诊断阴道炎最便捷的方法。与常规的生理盐水镜检法相比,革兰染色法具有更高的准确性、特异性和敏感性,对阴道炎的早发现、早治疗具有较高的应用价值。     

抗生素诱导小鼠阴道菌群失衡及乳杆菌调节作用的研究

目的 构建抗生素诱导的小鼠阴道菌群失衡模型,并研究乳杆菌对假丝酵母菌的阴道菌群失调的调整作用.方法 以IRC小鼠为实验对象,用头孢曲松造成阴道菌群失调,并将白假丝酵母接种到小鼠阴道内,造成小鼠阴道白假丝酵母过度增殖模型.对抗生素作用后的小鼠,采用乳杆菌预防、同步、治疗3种方式,阴道接种德氏乳杆菌DM8909菌液(2×108CFU/ml);取其阴道分泌物进行假丝酵母菌及乳杆菌的阴道菌群分析,并同时进行分泌物镜检,取阴道组织标本做病理组织学检查.结果 模型组小鼠阴道内细菌总数显著下降(P<0.01),出现阴道红肿、分泌物涂片镜检查到白细胞及假丝酵母.乳杆菌对小鼠抗生素导致的阴道菌群失衡的调节作用明显,受损小鼠阴道菌群的多样性和数量恢复至正常(P>0.05),其中乳杆菌预防组阴道菌群破坏程度最小(P<0.01);乳杆菌干预后的小鼠都可以显著性清除阴道内的假丝酵母菌(P<0.01),以乳杆菌预防组效果最好.结论 德氏乳杆菌DM8909能阻止白假丝酵母对阴道上皮的黏附作用,能调整阴道的菌群,对阴道黏膜有一定的修复功能.     

甲硝唑治疗细菌性阴道病前后阴道菌群的 结构变化及其预后相关性

摘要：目的 研究经甲硝唑规范治疗的细菌性阴道病患者在用药后6~8 d随访时的菌群结构与治疗前以及治疗结局之间的关系,探讨治愈人群与治疗失败人群在6~8 d这一观察点的阴道菌群多样性的差异,从而为实现细菌性阴道病治疗结局的预测提供理论依据。方法 选取2012年9月至2013年7月在北京大学第一医院妇产科门诊诊断为细菌性阴道病的育龄期女性为研究对象,规范使用甲硝唑凝胶治疗,分别采集患者用药前、用药后6~8 d、用药后1个月的阴道分泌物,提取细菌组DNA,进行454焦磷酸测序,分析阴道微生物菌群的多样性和丰度差异,探讨细菌性阴道病患者阴道菌群的构成差异与预后之间的相关性。结果 共61名患者完成了2次随访,共计183份阴道分泌物样品。对所有采集的标本进行454 焦磷酸测序分析,共发现192种细菌。用药后6~8 d的革兰氏染色涂片结果显示所有患者的阴道菌群镜下可分为三种情况：正常菌群、菌群抑制、异常菌群。镜检涂片为正常菌群的治愈率最高,其次是菌群抑制,异常菌群的治愈率最低。454焦磷酸测序分析显示甲硝唑治疗前后菌群的多样性和丰度发生了一定程度的变化,乳杆菌和球菌的含量未受明显影响,而细菌性阴道病致病菌的含量明显减少。结论 甲硝唑可以有效减少细菌性阴道病致病菌的数量而不影响乳杆菌的含量,但是对以球菌为主的患者治疗效果差。对高通量测序结果和革兰氏染色涂片结果的综合分析显示甲硝唑用药后6~8 d的阴道菌群对细菌性阴道病1个月后的治疗结局具有预测价值。     

巴尔通体分离培养特性观察

从鼠类血液中分离巴尔通体(Bartonella),观察其分离培养特性。被检鼠血为2004年收集自云南省的4个县,采用含5%去纤维兔血脑心浸液琼脂培基置于35℃含5%CO2培养箱中分离培养巴尔通体,进行观察,涂片革兰染色镜检,疑似菌落用巴尔通体属特异性引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增特异基因片段[枸橼酸合酶基因(gltA)的379 bp片段],电泳图中出现目标带即判断为阳性菌株。从397份鼠血分离到巴尔通体47份,分离率为11.8%。阳性菌落长出时间最早为3 d,多数为1~2周,占70.2%(33/47)。阳性菌落形态随培养时间延长而改变,特点多样。PCR阳性的菌经革兰染色,镜下均可见革兰阴性小杆菌。结果可见,可先用涂片革兰染色镜检,对疑似菌落进行初筛,巴尔通体种类多、形态多样,培养时间延长,菌落形态可能发生变异,有待进一步探索。     

不同生理阶段、避孕方式和感染状态对阴道乳酸杆菌影响的研究

目的调查不同生理阶段、避孕方式、感染因素对女性阴道乳酸杆菌数量的影响。方法收集南昌大学第二附院妇产科就诊的176例妇女的主要资料并采用qPCR方法定量分析阴道分泌物中乳酸杆菌数量,分泌物涂片和革兰染色后在显微镜下观察记录其感染状态。结果非绝经期组不同年龄段乳酸杆菌数量差异无统计学意义,绝经期组乳酸杆菌数量减少;不同避孕方式组的阴道乳酸杆菌数量差异无统计学意义;细菌性阴道病和假丝酵母菌感染组阴道乳酸杆菌数量较正常组差异均有统计学意义。结论生理阶段、细菌性阴道病和假丝酵母菌感染是影响女性阴道乳酸杆菌数量的主要因素。     

定菌生调整实验小鼠念珠菌性阴道炎的菌群失调的研究

目的 应用阴道细菌培养与光镜细胞学检查相结合的方法,研究定菌生对阴道念珠菌感染的菌群失调的调整作用。方法 以小鼠为实验对象,用盐酸林可霉素造成阴道菌群失调,并将分离的念珠菌接种到小鼠阴道内,造成小鼠阴道念珠菌感染模型,分别采用定菌生、抗真菌＋定菌生及抗真菌（制霉菌素）治疗1疗程后,取其阴道分泌物进行念珠菌及乳杆菌的菌群分析,并同时进行分泌物镜检,取阴道组织标本做病理组织学检查。结果 模型组小鼠阴道内主要细菌数量乳杆菌显著下降（P〈0．01）．出现阴道红肿、分泌物多呈块状和阴道黏膜充血等念珠菌阴道炎的典型症状,分泌物涂片镜检查到白细胞及念珠菌,而定菌生组和定菌生＋制霉菌素组治疗的小鼠,阴道黏膜与健康对照组的阴道黏膜基本相同,阴道内主要菌群——乳杆菌的数量恢复正常,阴道内念珠菌显著降低,与自然恢复组相比差异有极显著性（P〈0．01）,与制霉菌素处理比差异也有显著性,治疗效果明显好于制霉菌素。结论 定菌生能阻止念珠菌对阴道上皮的粘附作用,能调整阴道的菌群,对阴道黏膜有一定的修复功能,是治疗念珠菌性阴道炎有效的微生态调节剂。     

妊娠足月前妇女阴道微生态失衡分析

目的 分析妊娠足月前妇女阴道微生态失衡状况.方法 选择孕12 ～ 37周健康无症状单胎妊娠期妇女1 900例,取其阴道分泌物,选用阴道pH、阴道清洁度、过氧化氢浓度(H2O2)、白细胞酯酶(LE)和唾液酸苷酶(SnaSe)等指标对阴道微生态失衡进行评价.结果 妊娠足月前妇女阴道pH为3.80±0.23,阴道微生态失衡发生率为50％,阴道分泌物检查清洁度Ⅲ～ Ⅳ不正常者980例,乳酸菌均阴性,H2O2阳性为53％,H2O2+LE均阳性为14％,H2O2+LE+ SnaSe均阳性+显微镜检出线索细胞妇女为10％,H2O2+LE均阳性+涂片镜检出酵母样真菌孢子妇女为19％,H2O2+LE均阳性+涂片镜检出滴虫妇女为2％.结论 妊娠足月前妇女阴道微生态失衡发生率50％.     

妊娠妇女阴道菌群的研究

本文对31例非妊娠健康妇女、31例早期妊娠妇女、31例中期妊娠妇女和31例晚期妊娠妇女的阴道菌群,就乳杆菌、酵母菌、葡萄球菌和肠杆菌进行定性、定量分析,同时测定阴道分泌物的PH。结果表明,妊娠妇女的阴道乳杆菌和酵母菌多于非妊娠妇女,而葡萄球菌和肠杆菌却少于非妊娠妇女。乳杆菌是阴道菌群中最重要的成员,妊娠时的生态优势地位更加突出。乳杆菌在阴道的生物屏障和酸性环境的维持方面起主要作用。乳杆菌可能是预防和治疗产道感染及新生儿感染的理想的生态制剂。     

甲硝唑与乳杆菌活菌制剂对细菌性阴道病患者阴道微生物群影响的对比性研究

目的对300例细菌性阴道病（Bacterial Vaginosis,BV）患者随机使用甲硝唑（100例）、乳杆菌活菌制剂定君生（100例）及甲硝唑联合定君生（100例）,观察乳杆菌在阴道内定植情况及用药前后阴道内微生物多样性的变化,为临床治疗细菌性阴道病提供实验依据。方法分别提取300例BV患者用药前和用药后的阴道微生物总基因组DNA,以德氏乳杆菌16SrDNA特异性引物进行PCR,检测患者用药后德氏乳杆菌在阴道内的定植情况。以细菌16SrRNAV3区通用引物进行PCR,扩增产物进行变性梯度凝胶电泳（DGGE）,对所得指纹图谱进行分析,研究用药对微生态变化的影响状况。结果甲硝唑治疗组用药前后均没有德氏乳杆菌检出;定君生治疗组用药后德氏乳杆菌检出率为54％;甲硝唑联合定君生治疗组用药后德氏乳杆菌检出率为76％。甲硝唑治疗组用药后微生物多样性显著降低,微生物群结构失衡;定君生治疗组用药后微生物多样性有所降低,微生物群结构无显著差异;甲硝唑联合定君生治疗组用药后微生物多样性降低,但较前两组有所增加,微生物群结构差异无统计学意义。结论甲硝唑显著降低BV患者阴道微生物多样性,引起微生态失衡;定君生对BV患者阴道微生态的影响明显小于甲硝唑;定君生的使用有利于甲硝唑f预后阴道微生物多样性的恢复和微生态平衡的重建。     

乳杆菌泡腾片治疗细菌性阴道病

目的观察10例BV患者采用了信谊制药总厂生产的阴道嗜酸乳杆菌泡腾片1个疗程(7 d)后阴道菌群的变化。方法采用7种选择或非选择培养基对阴道分泌物的细菌总数、乳杆菌等7个指标进行检测。结果治疗后阴道中乳杆菌显著增多,厌氧革兰阴性杆菌显著减少(两者P<0.001)。细菌总数、肠杆菌、酵母菌和阴道加德纳菌均减少(P<0.01)。结论信谊阴道嗜酸乳杆菌泡腾片具有较好的调整阴道微生态平衡的作用。