高原地区非淋菌性泌尿生殖道炎支原体感染及药敏分析

了解昆明地区支原体引起非淋菌性泌尿生殖道炎的感染状况以及为其治疗提供敏感的抗生素,采用法国生物梅里埃公司的ＭｙｃｏｐｌａｓｍａＩＳＴ试剂盒对７３例非淋菌性泌尿生殖道炎患者分泌物进行支原体培养鉴定及体外药敏试验,结果检出２０株解脲支原体和６株人型支原体;８例为两种支原体混合感染。     

泌尿生殖道支原体感染检测及药敏试验

目的了解本地区泌尿生殖道解脲脲原体（Uu）和人型支原体（Mh）感染状况及药物敏感性,指导临床医生合理应用抗生素。方法应用法国生物梅里埃公司提供的IST试剂盒进行支原体鉴定及9种药物敏感检测,并对结果进行统计分析。结果1210例门诊患者检出支原体阳性683例,总感染率为56.4%,其中Uu单独感染占628例（占51.9%）,Mh单独感染14例（占1.2%）,Uu和Mh混合感染41例（占3.4%）。交沙霉素和原始霉素敏感率最高,对Uu分别为98.5%和97.0%,对Uu和Mh混合感染率都为100%;氧氟沙星敏感率最低,分别为1.5%和0.0%。结论泌尿生殖道系统感染主要由解脲支原体引起,交沙霉素和原始霉素敏感率最高,氧氟沙星敏感率最低。临床应选用培养敏感的抗菌药物,提高治疗效果。     

肺炎支原体液体培养法检测的实验评价

目的比较液体培养法和固体培养法平行检测肺炎支原体结果的一致性;评价液体培养法检测肺炎支原体的可靠性。方法采用液体培养基和固体琼脂培养基平行检测1 648份临床标本的肺炎支原体,比较同一份标本在2种培养基上的检测结果。结果液体培养法阳性296例,阳性率为18%;固体培养法阳性244例,阳性率为14.8%;液体培养法阳性而固体培养法阴性57例;固体培养阳性而液体培养法为阴性5例。2种方法的阳性检出率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺炎支原体快速液体培养法与固体培养有较好的一致性,具有方便、简单、准确且可以用于早期检测等优点,适合临床大批量标本筛查。需结合患者临床症状等排除真菌和耐药菌造成的假阳性。     

实验用小型猪呼吸道支原体检测及方法比较

目的通过常用的三种不同方法对支原体的检测,了解实验用小型猪支原体感染情况,为今后实验用小型猪支原体检测方法国家标准的制定提供参考。方法采用培养法、PCR和ELISA方法分别对20头小型猪的气管、肺和血清进行检测。结果三种检测方法中,PCR方法支原体阳性检出率为15%,ELISA方法为20%,而培养法结果均为阴性。结论目前在普通级小型猪中存在支原体的感染。检测方法中PCR和ELISA方法较培养法更省时,敏感性更高。     

龟甲DNA检测试剂盒的研制与评价

研制一种集DNA提取与PCR鉴定为一体的龟甲检测试剂盒,考察试剂盒的特异性、敏感性、重复性及稳定性。通过优化DNA提取和PCR检测方法,将所需试剂组合成试剂盒,用其提取龟甲正品及伪品mtDNA,进行PCR鉴定。试剂盒提取龟甲正品及伪品mtDNA的OD260/OD280为1.80±0.05,正品龟甲在335bp和410bp出现两条清晰条带,伪品龟甲则无条带出现,试剂盒特异性为100%,检测限为0.025 g,经反复冻融20次后依然有效,3次重复性检测均重现相同结果。龟甲DNA检测试剂盒特异性强、灵敏度高、稳定性好,适用于龟甲药材的快速检测。     

对液体尿素支原体培养方法的改进

目前对于支原体的培养多采用液体尿素培养基 ,此培养基仅含尿素和精氨酸两个生化反应 ,结果模棱两可 ,难以准确判断。为了提高支原体鉴定的准确性 ,我们对广东珠海浪峰公司的支原体试剂的操作方法进行了改进。现报道如下。1　材料与方法1.1　标本来源　 16 7例标本取自 2 0 0 0年 5月～ 2 0 0 1年 2月期间临床拟诊为非淋菌性泌尿生殖道炎 (Non- goncoccolureathritis,NGU)病人的泌尿生殖道 ,规范采集 ,其中男性10 8例 ,女性 5 9例 ,年龄在 2 0～ 6 0岁之间。1.2　支原体试剂盒　广东珠海浪峰生物技术有限公司生产的支原体试剂盒 ,支原体固…     

女性泌尿生殖道支原体感染及耐药性观察

目的了解女性泌尿生殖道感染患者解脲支原体(Uu)和人支原体(Mh)感染及耐药情况,指导临床合理应用抗菌药物。方法采用法国梅里埃公司生产的IST2支原体培养及药敏试剂盒,对932例女性泌尿生殖道感染患者进行培养及药敏试验。结果 932例患者中支原体阳性426例,总检出率45.7%,其中Uu阳性354例(37.9%),Mh阳性14例(1.5%),Uu+Mh阳性58例(6.2%);药敏结果表明,Uu与Mh对多西环素、交沙霉素、四环素较为敏感,Uu对环丙沙星、氧氟沙星耐药率较高,而Mh对克拉霉素、红霉素、阿奇霉素耐药率较高。结论女性泌尿生殖道支原体检出率较高,主要以Uu为主,Uu和Mh对多种抗菌药物耐药,应引起临床重视。     

绍兴地区男女泌尿生殖道支原体感染特点及药敏差异分析

目的 了解绍兴地区男女泌尿生殖道支原体属感染的特点,比较男女两性对几种抗菌药物的耐药情况的差异.方法 应用法国生物梅里埃公司MycoplasmaISI试剂盒对2010年1月至201 1年10月男女两性泌尿生殖道标本进行支原体培养及药敏试验,统计解脲脲支原体和人支原体的检出率及耐药情况.结果 共1722例泌尿生殖道感染病例中,支原体属阳性869例,总阳性率50.46％,其中单纯解脲脲原体(Uu)感染702例,单纯人型支原体(Mh)感染29例,Uu及Mh混合感染138例;714例男性中支原体阳性190例,阳性率26.61％,1008例女性中支原体阳性679例,阳性率67.36％;男性单纯Uu感染耐药率较高的主要是:环丙沙星(80.50％)、氧氟沙星(63.60％),女性单纯Uu感染耐药率较高的主要是:环丙沙星(91.97％)、氧氟沙星(73.72％)、红霉素(47.81％).男女两性单纯Uu感染对红霉素、阿奇霉素、克拉霉素和交沙霉素的敏感性差异有统计学意义(P＜0.05).结论 男女两性泌尿生殖道支原体感染以Uu为主,且两者对多种抗菌药物的敏感性具有显著性差异,临床应根据药敏结果合理选取使用抗菌药物.     

肺炎支原体ELISA检测试剂盒的临床应用

目的评价肺炎支原体ELISA检测试剂盒在临床应用的效果。方法用肺炎支原体ELISA检测试剂盒检测呼吸道感染患儿的咽拭子标本,并以肺炎支原体快速检测培养基试剂做同步盲法对照试验,分析该试剂盒的准确性及批内、批间产品的稳定性。结果在100例呼吸道感染患儿咽拭子标本中,肺炎支原体ELISA检测法阳性率为38%,肺炎支原体快速检测培养基法阳性率为37%,两种方法阳性结果符合率为97%。同步盲法试验结果显示,肺炎支原体ELISA检测试剂盒批内、批间产品阳性结果的一致率均为100%。结论该试剂盒具有较好的准确度和特异性,并且操作简便、快速,临床可推广应用。     

对不同液体支原体培养基的使用评价

解脲脲原体（Uu）和人型支原体（Mh）是引起非淋菌性泌尿生殖道炎（NGU）的主要病原体。对支原体的测定用固体培养基生长缓慢,而采用聚合酶链反应（PCR）的方法测定没有药敏,所以目前对支原体测定多采用集培养、鉴定、计数、药敏于一体的试剂盒。笔者先后使用了法国生物梅里埃、广东中山、珠海银科、珠海浪峰的产品,都存在着一个共同的弊病,即在液体支原体培养基中的抗生素不能完全杀灭除支原体以外的其它细菌,造成假阳性明显提高,使药敏结果的敏感性降低。偶然的机会使用了珠海黑马生物工程有限公司的产品,彻底解决了上述厂家存在的共同弊病,获得了较满意的结果,现将结果综合回顾性分析后反馈给临床及厂家,供同行借鉴。     

通用引物PCR检测临床常见致病菌的实验研究

通用引物可一次性扩增18种临床常见致病菌和耐药菌株的DNA,扩增片段长度在220bp左右,18种特异性探针分别与18种标准菌株的PCR扩增产物杂交结果显示探针都具有高度特异性;5种37例经法国梅里埃API细菌鉴定系统确定的临床分离菌株进行杂交鉴定,鉴定结果与分离株一致,表明设计的探针具有高度特异性及准确性。80例临床标本分别用法国梅里埃API细菌鉴定系统及PCR杂交法进行检测,阳性率分别为(52.5%)和(67.5%),表明PCR结合寡核苷酸杂交法比传统的生物学培养法更为灵敏,值得推广。     

泌尿生殖道支原体三种检测方法的评价

目的 评价三种检测方法对非淋菌性尿道炎(NGU)检测解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)的效果.方法 对我院2011年7月~2012年6月妇科、皮肤性病科门诊患者的分泌物标本采用PCR检测方法、液体培养基方法、免疫性检测法对解脲支原体和人型支原体进行检测,并对三种方法的检测结果进行分析.结果 PCR检测方法和液体培养基方法对非淋菌性尿道炎检测具有临床诊断意义.结论 PCR检测支原体灵敏度高、特异性强,适用于对非淋菌性尿道炎的诊断.     

表皮生长因子受体基因突变检测方法改进及初步临床验证

目的:改进现有的检测表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的荧光PCR法并开发出新的试剂盒,将其与直接测序法和ARMS法进行对比,验证该试剂盒用于临床诊断的敏感性、特异性和准确性。方法:收集2013年6月至2015年8月手术确诊的141例非小细胞肺癌(NSCLC)的石蜡包埋组织标本。采用盲法分别使用直接测序法、ARMS法和新试剂盒检测EGFR突变,比较新试剂盒与其他两种检测方法的差异,结果不一致时采用三种方法分别重复检验一次。结果:三种方法检测成功率均为100%,新试剂盒与直接测序法测得结果完全一致的比率达75.9%(107/141),在直接测序法测得的96例突变阳性中,92例在新试剂盒检测中得到验证(95.8%)。而直接测序法显示突变阴性的45例中,新试剂盒检测发现了23例突变阳性,两种检测方法的结果存在统计学差异(x2=40.745,P0.05)。与直接测序法进行比较,新试剂盒检测EGFR突变的敏感性、特异性分别为95.8%、48.9%,阳性预测值、阴性预测值分别为80.0%、84.6%,检测准确度为80.9%。以ARMS检测法为金标准,新试剂盒测得结果完全一致的比率达84.4%(119/141),两者的一致性比较好(K=0.749,P0.05),敏感性、特异性分别为94.1%、86.4%。结论:改进后EGFR基因突变检测的试剂盒在技术上较好地控制了检测结果的假阳性和假阴性,该检测方法较直接测序法具有更好的敏感性和准确性,与现有的ARMS法一致性较高。     

女性泌尿生殖道支原体感染患者药敏状况

目的探讨女性泌尿生殖道感染患者中支原体的感染状况及其对不同药物的敏感性,为临床合理用药提供参考。方法对516例女性泌尿生殖道拭子进行支原体培养,并对阳性菌株进行10种常用抗生素药敏试验。结果 516例患者中,支原体培养阳性263例,检出率为50.97%,其中解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)为237例(45.93%),人型支原体(Mycoplasma hominis,MH)仅9例(1.74%),UU+MH 17例(6.46%);三种类型感染均对交沙霉素、强力霉素、美满霉素比较敏感。结论 UU为沈阳医学院附属第二医院泌尿生殖道支原体感染的主要病原体,交沙霉素、强力霉素及美满霉素可作为治疗的经验用药,其中交沙霉素为首选抗生素。     

支原体检测多重定量PCR方法的建立及应用

目的:建立一种快速、准确的方法检测支原体,这不仅可以有效地减少和预防支原体污染,还能为科研工作者提供一定的指导价值。方法:利用荧光定量PCR(TaqMan探针法)检测支原体,反应体系中同时存在标记两种颜色TaqMan探针及相关引物,分别检测支原体DNA和参考基因模板。根据支原体16S核糖体RNA保守区和参考基因TOP3A保守区设计引物和探针。通过对引物浓度、探针浓度和退火温度等反应条件的优化,建立了TaqMan探针多重定量PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了验证。结果:建立的双色荧光探针定量PCR方法的标准曲线相关系数r2和扩增效率分别为0.995和113.36%;该方法最低检测限为10 copies/μL;组内及组间变异系数均小于1%,证明该检测方法高效。利用该方法对随机挑选90例细胞抽提DNA样本进行检测,结果有60例为支原体阳性样本,阳性率67%,阳性率与相关研究报道一致。检测3个细胞培养上清样本,结果 1例支原体阳性,2例支原体阴性。从检测的样本中随机选择3个阳性样本及2个阴性样本使用普通PCR支原体检测试剂盒检测,结果一致;将其测序,测序结果比对正确。结论:本研究建立的多重定量PCR支原体检测方法能够应用于细胞抽提DNA及细胞培养上清的支原体检测,可以实现高效、快速检测支原体污染。     

Dot-ELISA法检测血液及唾液HIV抗体的应用评价

评价人类免疫缺陷病毒1+2型抗体检测试剂盒(Dot-ELISA法)检测血清和唾液样本的临床性能。采用对照试验研究,选取背景清晰的研究对象200例,采集同一研究对象的血清和唾液样本,应用万泰生物药业公司生产的人类免疫缺陷病毒1+2型抗体检测试剂盒作为考核试剂,法国生物梅里埃公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(ELISA法)作为参考试剂,考核试剂检测结果与参考试剂及研究对象背景进行比较分析。考核试剂检测血清HIV抗体与参考试剂相比较,阳性符合率100%,阴性符合率100%,总符合率100%,Kappa值1.00,一致性为最强;考核试剂检测唾液HIV抗体与参考试剂检测结果相比较,阳性符合率98.78%,阴性符合率100%,总符合率99.50%,Kappa值0.99,一致性为最强。Dot-ELISA法人类免疫缺陷病毒1+2型抗体检测试剂盒对血清及唾液样本检测性能优越,适合HIV抗体快速筛查。     

四种方法检测乙型肝炎病毒基因型的比较

目的比较四种方法检测乙型肝炎病毒基因型的差异性。方法对36例乙型肝炎患者的血清分别采用测序技术,荧光定量PCR技术,恒温扩增技术,基因芯片技术进行乙肝病毒基因型的检测。结果36份血清以测序技术为金标,观测荧光定量PCR技术特异性100%,敏感性83%,恒温扩增技术特异性100%,敏感性89%,基因芯片技术特异性100%,敏感度92%。结论目前临床采用的四种方法检测乙型肝炎病毒基因型的特异性相同,敏感度以测序为金标准,基因芯片技术最灵敏,其次为恒温扩增技术,最后为荧光定量PCR技术。     

免疫渗滤法检测血液及尿液HIV抗体的应用评价

评价免疫渗滤法人类免疫缺陷病毒1+2型抗体诊断试剂盒检测人血浆和尿液样本的临床性能。采用对照试验研究,选取背景清晰的研究对象200例,采集同一研究对象的血浆和尿液样本,应用万泰生物药业公司生产的人类免疫缺陷病毒1+2型抗体诊断试剂盒作为考核试剂,法国生物梅里埃公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(ELISA法)作为参考试剂进行检测,考核试剂检测结果与参考试剂及研究对象背景进行比较分析。考核试剂检测血浆HIV抗体与参考试剂相比较,阳性符合率100.00%,阴性符合率100.00%,总符合率100.00%,Kappa值1.00,一致性强度为最强;考核试剂检测尿液HIV抗体与参考试剂检测结果相比较,阳性符合率68.29%,阴性符合率100.00%,总符合率87.00%,Kappa值0.72,一致性强度为高度。免疫渗滤法人类免疫缺陷病毒1+2型抗体诊断试剂盒对血浆、尿液样本检测性能优越,适合临床快速诊断。     

检测HIV的蛋白印迹和ELISA检测方法学比较

为了寻找一种适合大批量标本测定且具有高敏感性、高特异性的艾滋病临床实验室检测方法。比较了艾滋病检测的蛋白印迹实验和酶联免疫吸附实验两种方法,并采用不同厂家生产的不同代酶免试剂和对已确诊为阴性和阳性的标本进行比较测定。结果科华一代、二代、三代和四代酶免试剂盒的功效率分别是83．7、92．13、97．50和85.3;万泰一代、二代、三代和四代功效率分别是83．5、95．88、97．10和84．2;蛋白印迹实验的功效率是99．5。所以酶联免疫吸附实验更适合大批量标本的检测,而第三代酶免试剂具有更高的特异性和敏感性。     

2010-2011年泌尿生殖道感染性病原体分布状况及支原体体外药物敏感性调查

目的 分析2010-2011年绍兴人民医院暨浙江大学绍兴医院泌尿生殖道感染患者病原体(细菌、真菌、支原体)分布状况及支原体药物敏感性分析,为临床准确诊断和合理地进行抗感染治疗提供参考依据.方法 采用法国生物梅里埃公司产VTYEK-AMS全自动微生物鉴定仪及配套鉴定卡对病原菌进行鉴定,其中支原体鉴定用Mycoplasma IST2支原体鉴定及药敏试剂盒进行检测.结果 2010-2011年共3 779例标本中病原体培养阳性株数1128株(520株、608株),总检出率为24.0％;病原体以支原体检出为首,占总检出病原体的80.7％(75.2％、85.4％),以解脲(Uu)、人型(Mh)及Uu+ Mh混合支原体感染为主;其次革兰阴性细菌占9.0％,以淋病奈瑟球菌为主;再次为真菌占5.9％,以白色假丝酵母菌为主.支原体感染男、女患者阳性率分别为38.3％和70.8％;淋病奈瑟球菌感染男、女患者阳性率分别为18.1％和11.1％,两种病原体男女比较差异均有统计学意义(P＜0.01);患者主要集中在20～40岁年龄段.药敏结果显示,不同类型支原体的药物敏感性不同,单纯Uu阳性对原始霉素敏感率最高为99.2％,对强力霉素、四环素、交沙霉素和克拉霉素敏感率分别为96.8％、91.3％、85.5％和68.7％.单纯Mh阳性、Uu合并Mh阳性对抗生素的耐药率要高于单纯Uu阳性.结论 泌尿生殖道感染以支原体为主,次为淋病奈瑟球菌,女性支原体感染率明显高于男性,而淋病奈瑟球菌感染男性明显高于女性,支原体对各种抗菌药物已产生一定的耐药性,对泌尿生殖道感染患者应及时进行病原体培养及药敏试验,指导临床对不同病原体合理用药,以有效提高治愈率和控制耐药菌株的产生.