乙型肝炎病毒4种基因型与干扰素治疗应答的关系

目的:在细胞水平上比较乙型肝炎病毒(HBV)基因型A,B,C,D对干扰素治疗的不同应答反应,进而探讨基因型对干扰素治疗效果的影响。方法:利用脂质体法将前期构建好的HBV基因型A,B,C,D质粒分别转染入Hep G2细胞系中,并在转染细胞上清中加入干扰素-α2a(IFN-α2a)。ELISA方法用来检测上清中HBV抗原,荧光定量PCR方法检测上清中HBV DNA,通过比较加药前后上清中HBV抗原和DNA水平的变化,反应HBV基因型对IFN-α2a的治疗反应。结果:HBV 4种基因型对IFN-α2a治疗的应答反应存在差异,其中A和B基因型对IFN-α2a的应答明显高于C和D基因型;而基因型A和B之间、以及基因型C和D之间对IFN-α2a的反应无统计学差异。结论:HBV基因型能影响干扰素的治疗效果,其中A和B基因型对IFN-α2a的治疗反应优于C和D基因型,在临床上应开展HBV基因分型检测,用以指导临床用药的选择。     

乙型肝炎病毒的分型研究

乙型肝炎病毒(HBV)可按两种方法分型:血清型和基因型,目前国内外分型研究表明HBV的基因型具有一定的地域分布特点,并且临床表现、预后、治疗效果与基因型的关系密切。对HBV分型的研究,有利于了解HBV分布传播的规律、探讨HBV的致病机制、提示预后等,是目前乙肝研究的热点之一,本文将对国内外乙型肝炎病毒的分型研究进行综述。     

阿德福韦酯抗病毒治疗1a后乙肝病毒基因型变化情况的观察

观察阿德福韦酯抗病毒治疗1 a后慢性乙肝患者体内HBV基因型变化情况.随机选择152例慢性乙肝患者作为研究对象,其中52例患者作为抗病毒治疗组,口服阿德福韦酯进行抗病毒治疗,另外100例患者作为对照组,口服护肝片进行护肝治疗,2组病人治疗周期均为1 a,分别在用药后第3、6、12个月进行随访,随访内容包括患者的依从性和不良反应、HBeAg/HBeAb、肝功能、HBV DNA定量检测,并采用多对型特异性引物巢武PCR基因分型技术动态监测治疗期间HBV基因型的变化情况.治疗1 a后,抗病毒治疗组中有1例患者体内HBV基因型发生改变,由治疗前的B型变为B/C混合型,并且病情出现反弹和加重.对照组未发现HBV基因型改变.2组HBV基因型变化率(1.9％和0％)之间没有显著性差异(P＞0.05).慢性乙肝患者体内HBV基因型可发生改变,而且1 a内即可发生,抗病毒治疗可能是促进HBV基因型改变的相关因素.HBV基因型转变可导致患者病情反弹和加重.     

部分肝病患者和健康人血清中HBV基因型分析

确定了内蒙古海拉尔地区乙型肝炎病毒 (HBV)感染者HBV基因型的分布情况。采用基因型特异引物的巢式聚合酶链式反应方法对 38例无症状HBV携带者 ,3例急性肝炎 ,41例慢性肝炎 ,3例肝硬化 ,3例肝癌患者和38例健康人血清中HBV基因型进行分析。结果显示 ,12 6例中有 91例检测到HBVDNA ,其中 ,HBVB型 ,C型分别为 11例 ( 12 .1% )和 6 8例 ( 74.7% ) ,同时检测到B型和C型者有 8例 ( 8.8% ) ,有 4例 ( 4.4% )尚未确定基因型别。可见 ,在海拉尔地区HBV感染同时存在HBVB型和C型 ,而且C型是这一地区流行的主要基因型。     

应用系统发育树分析DDBJ基因库中HBV基因序列的基因型

为了充分利用核酸库中的HBV序列信息,探讨DDBJ核酸库中HBV基因序列的基因分型,采用Clustal X（1.8）软件比较HBV基因序列前S区序列差异并产生系统发育树。通过对下载的1471条HBV基因序列进行系统分析。获得了228条前S/S区完整的HBV基因序列,其中有66条序列的基因型已被各种方法所证实。利用软件分析绘制了基于228条HBV前S区基因序列的系统发育树。66条已知基因型HBV基因序列在系统发育树上的分型与其原有基因型完全吻合。在228条HBV基因序列中,有207条序列分别属于A、B、C、D、E、F和G等7个基因型,但另外21条序列不能归属于上述7个基因型的任何一种,而且它们又分为彼此相互独立存在的两群,暂分别称之为未分型I和未分型Ⅱ,经比较未分型I、Ⅱ和其他7个基因型前S区核苷酸序列,发现未分型I、Ⅱ和D型前S区都有33个核苷酸缺失,但三者基因缺失片段的位置和形式各不相同,但其它六型前S区无大片段基因缺失。结果说明采用基于前S区的系统发育树基因分型分析方法正确可靠,除了现已证实的7个基因型外,尚可能存在另外两个新的HBV基因型。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV基因分型

为了解长春市慢性乙型肝炎患者血清中的乙型肝炎病毒(HBV)基因型情况及其与临床特点的相关性,应用型特异性引物进行巢式PCR方法对长春市69例慢性乙型肝炎患者血清HBV进行基因分型检测。在69例血清标本中,B型10例(占14.5%);C型41例(占59.4%);B C混合型8例(占11.6%);未分型的患者共10例(占14.5%)。C基因型患者的HBV-DNA定量、HBeAg阳性率明显高于B基因型患者(HBV-DNA:P<0.01;HBeAg:χ2=3.98,P<0.05),C基因型患者肝功检查指标谷丙转氨酶(ALT)和总胆红素(TB IL)均较B基因型患者高(P<0.01)。长春地区存在HBV B基因型、C基因型、B C混合基因型及未分型,C基因型为优势基因,引起的肝脏活动性炎症较B基因型明显。     

乙型肝炎病毒基因型与免疫复合物型治疗性乙肝疫苗应答相关性的研究

目的 研究对免疫复合物型治疗性乙肝疫苗不同应答乙肝患者的乙肝病毒基因型有无差别。方法 收集67例经60 ug HBsAg-HBIG (YIC) 治疗的慢性乙肝患者血清, 用S基因聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法对其进行HBV基因分型,并结合患者对YIC治疗的不同应答进行分析。结果67例感染乙肝病毒（HBV）患者中,HBV B基因型22例,C基因型43例,未确定者2例。感染HBV B, C 两种基因型的患者对YIC免疫治疗的病毒学与HBeAg的血清转换应答差异无统计学意义. 结论HBV B或C基因型不影响慢性乙肝患者对YIC的治疗应答。     

内蒙古地区乙型肝炎病毒的基因分型及临床意义

为了探讨乙型肝炎病毒在内蒙古地区的基因分型,为本地区乙型肝炎的临床治疗、病情进展和发病机制等方面研究提供有益的实验依据。2013年7月至2014年7月本研究在内蒙古自治区人民医院、内蒙古医科大学第一附属医院、通辽市医院的门诊及住院病例中随机选取已感染乙型肝炎病毒的253例。以荧光定量PCR法检测HBV基因分型和HBV病毒基因载量,Elisa法检测血清标志物HBeAg,全自动生化分析仪检测ALT、AST、TBA、TBIL和ALB。实验发现,内蒙古地区253例患者HBV基因分型结果以B型(49例,19.37%)、C型(188例,74.31%)为主,且C基因型显著多于B基因型(p<0.05);HBeAg阳性率为67.59%,且C基因型HBeAg阳性率高于B基因型;高载量病例中B型占31例(63.27%),而C型占162例(86.17%),C基因型组中HBV DNA载量显著高于B基因型组(p<0.01);B基因型与C基因型TBA、TBIL和ALB结果比较差异无统计学意义(p>0.05),但C基因型的ALT和AST这两项生化指标均显著高于B基因型组(p<0.05)。本研究结果初步说明,内蒙古地区HBV感染以B型和C型为主,尤以C型居多;且C型病毒的复制较活跃,致病力较强,HBV感染者更易转成严重肝病。     

反向斑点杂交法快速检测HBV基因型反应条件的优化和建立*

利用反向斑点杂交技术,设计出特异性基因分型探针,并将探针固定在带正电荷的尼龙膜上,与PCR扩增带有地高辛标记的临床血清样本进行杂交。通过优化杂交反应条件,建立起简单、快速、特异地检测HBV基因型的方法。利用该方法对重庆地区临床样本进行分型检测,并与直接测序结果比较。结果表明新建的HBV基因分型方法可对拷贝数在103以上的血清样本准确分型,特异性达到96.67%。重庆地区感染HBV主要以B型为主。     

汉族和维吾尔族乙型肝炎病毒耐药基因的相关临床研究

目的:利用基因芯片技术研究伊犁地区汉、维两个民族乙型肝炎病毒(HBV)耐药基因的差异性。方法:收集2014年1月-2015年12月我院收治的汉族及维吾尔族(以下简称"维族")慢性HBV感染患者各50例,患者均经基因芯片技术筛选确诊存在天然HBV耐药基因(耐核苷酸类药物),观察HBV耐药基因分型特点及对核苷酸类药物的耐药突变位点的情况。结果:汉族HBV感染患者的耐药基因型集中于B、C型,且以C型为主,而维族以D型为主,两组各基因型比较,差异均有统计学意义(P0.05)。汉族患者在rt204位点变异明显,而维族在rtn236t、rta181v/t+rtn236t位点变异明显,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:在新疆伊犁地区天然HBV病毒耐药基因患者中,汉族及维族耐药基因分型及耐药基因突变位点均存在显著差异,临床可通过基因芯片技术筛选变异靶点,选择合适的敏感药物。     

血液透析患者输血传播肝相关病毒感染的调查

使用PCR结合微板杂交-ELISA及DNA序列分析技术,分别研究了维持性血液透析患者输血传播性HBV、HCV、HDV、HGV、TTV感染状况,并对HBV、TTV进行基因分型、TTV基因变异状况进行分析.除HDV外,发现血液透析患者中存在多重感染.HBV基因型以C型为主,B型次之.TTV分离株中,G1型为主,G2型次之.TTV基因变异可达39.7%.     

建立快速、特异检测ApoE4基因型方法

目的:建立快速、特异检测载脂蛋白E(ApoE)基因型的方法.方法:采用碱裂解法抽提漱口水来源的颊粘膜上皮细胞的基因组DNA;优化各种改善高GC含量的的添加剂种类和浓度,包括二甲亚枫、甘油、甲酰胺、甜菜硷等,PCR产物进行HhaI酶切并DNA垂直电泳从而分析个体的ApoE基因型.结果:漱口水来源的基因组DNA能替代外周血DNA进行PCR扩增.甜菜碱、甲酰胺、甘油等对于ApoE4基因的扩增效果并不明显,而5%DMSO能显著提高ApoE4基因的扩增效率,并显著提高PCR扩增的特异性.结论:无创的简单的ApoE4基因分型被建立,极大易化了对ApoE4相关疾病的分子流行病的研究,对于其它基因的基因型研究提供有益的线索.     

乙型肝炎病毒RT 区变异及其与基因型分布的关系

目的:探讨大样本乙型肝炎病毒(HBV)感染患者RT区耐药位点变异的流行情况,及各耐药位点变异与HBV基因型的关系。方法:采用P区测序法对1117例慢性乙型肝炎患者的血清病毒进行P区测序、进化树分型。结果:RT区耐药位点变异发生率与基因型关系密切,在基因型C患者中的变异发生率远远高于基因型B患者(P=0.000)。Rt180、rtM204V、rtM204I、rt181、rt213位点变异均与基因型C有关(P<0.05)。主要的三种变异类型rt180+rtM204V、rtM204I、rt180+rtM204I间基因型分布存在显著差异(P=0.003)。不同HBeAg状态下,耐药变异的发生有显著差异(P=0.020),特别是rt181和rt236位点变异。结论:HBV基因型影响RT区耐药变异发生率及变异类型,且耐药变异发生率也与HBeAg状态有关。     

等位基因特异PCR技术的研究与应用

生物的单核苷酸多态性(Single-nucleotide polymorphism,SNP)具有数量多、分布广、易于分型、稳定性强等优点,很适合于用做分子标记.等位基因特异PCR(Allele-specific PCR,AS-PCR)是根据SNP位点设计3'末端与SNP位点碱基互补或错配的特异PCR引物,通过凝胶电泳等方法检测PCR扩增产物的有或无,从而检测基因型中SNP的一种技术.经过不断地改进与完善,基于SNP的等位基因特异PCR标记已逐渐成为一种快速、简便、低成本、可靠、高通量的检测基因型SNP的方法.本文应用等位基因特异PCR技术,根据小麦TaDREB1基因在旱选10和鲁麦14的120(C→A)SNP成功地开发了一个SNP分子标记,证明了该方法的有效性和可行性.     

内蒙古敖汉旗地区乙肝患者HBV基因型分布研究

目的:了解内蒙古赤峰市敖汉旗地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型、血清型的分布特征。方法:收集2014年在赤峰市敖汉旗医院住院治疗的慢性乙型肝炎患者,采集血清标本,巢式PCR方法扩增HBV S区,测序后应用Mega6.0构建系统发育树确定该地区乙型肝炎病毒主要基因型、血清型,并分析HBV S基因a决定簇变异情况。结果:在72例HBV患者中,B基因12例(16.7%),C基因型40例(55.65%),D基因型20例(27.8%)。不同性别患者的基因型分布差异有统计学意义(P0.01)。血清亚型分析结果显示:adw2血清亚型15例(20.8%)、adrq+血清亚型37例(51.4%)、ayw2血清亚型20例(27.8%)。HBV S基因"a"抗原决定簇突变率为34.7%。结论:内蒙古赤峰市敖汉旗地区HBV基因型以C型为主,其次是D型和B型,血清型主要为adrq+,有34.7%患者携带HBV S基因a决定簇变异株。     

湖北咸宁地区乙型肝炎病毒基因型的调查

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是引起急性和慢性肝炎的最主要的病原[1].目前根据HBsAg的共同抗原决定簇"α"和两对相互排斥的抗原决定簇将HBV分为ayw1,ayw2,ayw3,ayw4,ayr,adw2,adw2,adw4,adrq+和adrq- 9种不同的血清学亚型,1988年Okamoto[2]等根据HBV基因组核苷酸的差异又提出了HBV基因型的概念,并以全基因组核苷酸差异≥8%,定为基因型分型标准.     

鲍曼不动杆菌IRS-PCR基因分型研究

目的 用低频限制性位点聚合酶链反应(IRS-PCR)对鲍曼不动杆菌进行基因分型,分析基因型与鲍曼不动杆菌耐药谱的关系,并初步探讨其在分子流行病学中的作用.方法 随机收集2008年8月至2009年8月临床分离的73株鲍曼不动杆菌,采用K-B法进行药物敏感试验确定鲍曼不动杆菌耐药谱;同时利用IRS-PCR对此73株鲍曼不动杆菌进行基因分型;并分析IRS-PCR分型与鲍曼不动耐药谱的关系;结合IRS-PCR分型结果与73株鲍曼不动杆菌感染病例的临床资料,分析在此时间段鲍曼不动杆菌在我院流行感染的情况.结果 药物敏感试验将73株鲍曼不动杆菌菌株分为A1(19株全耐药型)和A2 ～ A31(54株耐药谱型)31个药敏谱.IRS-PCR法将其分为A～W共23个基因型,其中A、C、B、D和E型为5种优势菌株,分别为14、11、10、8和6株.对比研究发现A1型菌株(15/19)主要集中在基因型A、C、D内,而基因型B包含A15型耐药菌株9株(69.2％),基因型E包含A3型耐药菌株3株(42.9％).A基因型在院内特别是ICU中心引起2次爆发流行,而C和D型主要在呼吸内科引起感染.结论 IRS-PCR基因分型与药敏分型有较高的一致性,且IRS-PCR基因分型在早期发现和预防感染暴发流行方面优于药敏分型.     

随机扩增多态性DNA分析院内感染的铜绿假单胞菌

目的 运用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型技术监测铜绿假单胞菌(PA)的医院感染情况,了解耐药表型与RAPD基因型关系,为确定院内交叉感染发生及院感控制提供依据.方法 对10例ICU患者连续多次采样分离出的48株PA进行RAPD基因分型和药物敏感性试验.结果 48株PA共分出9个基因型.6例患者为单一RAPD型PA菌株感染,4例患者检出2种RAPD 型,有3组患者分别检出同型RAPD.耐药性最高的是环丙沙星(75%),其次是左氧氟沙星(73%),耐药性最低的为美洛培南(31%).结论 耐药表型与RAPD基因型之间不存在相关性;RAPD分型快速简单,对于流行病学调查确定院内交叉感染或流行具有重要意义.     

湖北咸宁地区乙型肝炎病毒基因型的调查

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是引起急性和慢性肝炎的最主要的病原[1]。目前根据HBsAg的共同抗原决定簇“α”和两对相互排斥的抗原决定簇将HBV分为ayw1, ayw2, ayw3, ayw4,ayr, adw2, adw2, adw4, adrq 和adrq-9种不同的血清学亚型,1988年Okamoto[2]等根据HBV基因组核苷酸的差异又提出了HBV基因型的概念,并以全基因组核苷酸差异≥8%,定为基因型分型标准。目前从世界不同地区分离的乙型肝炎病毒分离株已被分为A、B、C、D、E、F、G、H等8种不同的基因型[3~5]。包括中国、日本和东南亚在内的亚洲地区主要流行B、C两种基因…     

应用TaqMan探针荧光定量PCR技术鉴定Lepr~(db/+)小鼠子代基因型

目的建立一种高效的应用Taq Man探针荧光定量PCR技术对Lepr~(db/+)小鼠子代基因分型的方法。方法提取228例Lepr~(db/+)小鼠子代鼠尾DNA,针对Lepr基因的突变位点(rs1801133)设计1对PCR引物和2条Taq Man探针。设定条件进行实时荧光PCR扩增,用SDS软件对SNP位点进行分型。通过2月龄动物的肥胖表现型验证并进行Hardy-Weinberg平衡检验。结果用建立的Taq Man探针荧光定量PCR方法对228份样本进行检测,其中GG基因型64份,基因型频率为0.1929;GT基因型123份,基因型频率为0.5395;TT基因型41份基因型频率为0.2807。Taq Man探针荧光定量PCR方法分型结果与通过肥胖表现型分型结果比较,灵敏度为97.56%,特异度为99.47%。结论应用Taq Man探针荧光定量PCR技术可实现对Lepr~(db/+)小鼠子代基因位点的早期分型检测,方法简便,高效。