斑马鱼整体原位杂交的技术改良

斑马鱼整体原位杂交技术广泛应用于基因表达谱、基因间相互关系和突变体筛选等方面,是研究斑马鱼发育相关基因功能的重要技术。本文从杂交探针的制备、浓度的选择和洗脱以及胚胎的脱色、蛋白酶K消化、底物显色等方面进行了摸索、改进及简化,获得了背景低、着色清晰、特异性高的实验结果,预示了简单实用、成本低廉的斑马鱼整胚原位杂交技术平台的成功建立。     

荧光原位杂交技术及其应用

荧光原位杂交技术(FISH)始于70年代后期,曾多用于染色体异常的研究,近年来随着FISH所应用的探针种类的不断增多,特别是全Cosmid探针及染色体原位抑制杂交技术的出现,使FISH技术不仅在细胞遗传学方面,而且还广泛应用于肿瘤学研究,如基因诊断、基因定位等。本文对FISH探针标记、信号处理等有关技术特点以及在细胞遗传学研究、基因图谱绘制、基因扩增检测等方面的应用做了具体的 综述。     

microRNA原位杂交技术影响因素的探讨

目的探讨miRNA原位杂交技术的多种影响因素,以完善miRNA原位杂交分析方法。方法选择不同组织来源、保存时间、切片厚度的常规病理组织切片进行U。探针的原位杂交分析;选择不同浓度的蛋白酶K对组织切片与MDA-MB-23l爬片细胞进行U。探针的原位杂交分析;实时定量RT-PCR方法和爬片细胞原位杂交对BT549、T47D细胞株进行miR_375的表达分析。结果不同组织来源、保存时间、切片厚度的石蜡标本均能显示细胞核内的u。表达;组织切片原位杂交实验中,乳腺组织切片20μg／ml的蛋白酶K作用组较其他组的原位杂交效果好;肝脏组织切片200μg／ml的蛋白酶K作用组的显色最好;爬片细胞原位杂交实验中,2μg／ml的蛋白酶K作用组的显色更深;U6与miR-375的原位杂交最适浓度分别为lng／ml和l00ng／ml;实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交结果均显示,BT-549的miR-375表达明显低于T47D。结论miRNA原位杂交操作能在常规固定并长期保存的石蜡组织标本上操作;蛋白酶K与探针的浓度应当依据病理标本类型等多因素预实验摸索;细胞水平的实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交分析结果的比对为确定miRNA探针的特异性提供了帮助。     

核酸原位杂交技术及其发展

在核酸分子杂交基础上产生的染色体核酸原位杂交技术(in situ hybridization of nuclear acids),是目前动植物及人类医学细胞遗传学研究中新发展起来的,能够对待测核酸进行定性、定位或相对定量的一项遗传分析技术,它的应用与发展将使动植物及人类染色体上的基因定位和杂种鉴定由细胞水平进入到分子生物水平,因此,业已引起了人们的极大关注与重视。     

染色体原位杂交技术

原位杂交技术是重复ＤＮＡ序列和多拷贝基因家族物理作图、低拷贝及单拷贝ＤＮＡ序列定位的常规方法,也是检测种间杂种染色体易位、重组的有效手段。可应用于分析染色体的结构和异源多倍体物种的进化,与染色体显带技术结合使用可精确而有铲地进行染色体图谱构建和细胞遗传学鉴定。     

染色体原位杂交技术与植物显微技术实验探索

染色体原位杂交技术作为植物分子细胞遗传学研究的重要手段被广泛地应用于基因定位、染色体结构变异、物种的起源、进化和亲缘关系分析,物理图谱的构建,转基因植物的鉴定等多个方面。在植物显微技术实验中,以研究生的科研选题与兴趣为主导选材进行石蜡切片、显微摄影直至获得照片;同时合理安排木材切片、压片技术、花粉在柱头上萌发和花粉管伸长、染色体原位杂交技术等多个其他实验,有的放矢、因人施教能够激发学生自主学习的兴趣,收到良好的教学效果。     

植物染色体原位杂交技术的发展与现状

本文主要介绍植物染色体原位杂交技术的发展历史,评述适用于不同研究目的的各种主要原位杂交技术的基本原理和方法,并介绍该技术在植物细胞遗传学领域的应用和发展。 Abstract：In this paper,we briefly introduce the development of in situ hybridization of plant chromosome. The fundamental principle and method of many main kinds of in situ hybridization have been reviewed for different research purposes,and their application and development on plant cytogenetics also been recommended.     

荧光原位杂交技术在植物学中的应用

荧光原位杂匀技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）是80年代末才发展起来的一种非放射性原位杂交技术。作为一种新型的细胞分子遗传学技术,目前已广泛应用于细胞遗传学、分子生物学等领域。本文简要综述了该技术的基本原理与特点及其在植物学中的应用,包括在异源染色质的鉴定、染色体物理图谱的构建和染色体RNA及植物基因组进货中的应用。     

荧光原位杂交技术在染色体结构研究中的应用

1969年 Gall和 Pardue首先用同位素标记的 RNA探针定位特定的靶 DNA序列 ,开创了原位杂交技术 ,但同位素探针的高背景限制了它对靶序列的精确定位 ,随后发展了一系列非同位素方法 ,最初有生物素探针 ,用荧光素标记亲合素 ,酶联反应或胶体金检测 ,其他包括乙酰氨基荧光素 ( AAF) ,汞 ,地高辛 ( DIG)和 2 -三硝基酚等。荧光原位杂交 ( fluorescence in situ hybridiza-tion FISH)技术就是指将 DNA探针用特殊修饰的核苷酸分子标记 ,通过原位杂交与靶染色体或 DNA上特定的序列结合的方法学 ,靶染色体通常固定在载玻片上 ,杂交结果用荧…     

荧光原位杂交技术在植物学中的应用

荧光原位杂交技术（fluorescence 〖WTBX〗in situ 〖WTBZ〗hybridization, FISH）是80年代末才发展起来的一种非放射性原位杂交技术。作为一种新型的细胞分子遗传学技术,目前已广泛应用于细胞遗传学、分子生物学等领域。本文简要综述了该技术的基本原理与特点及其在植物学中的应用,包括在异源染色质的鉴定、染色体物理图谱的构建和染色体RNA及植物基因组进化中的应用。     

RNA原位杂交技术的一些应用技巧

目的:检测基因在动物组织或细胞中的时空表达模式。方法:转录反义RNA探针;利用RNA原位杂交技术检测人和小鼠牙原基中若干基因的表达。结果与结论:通过优化条件,转录出完整的反义RNA探针,并成功地利用RNA原位杂交技术在组织中检测到基因的表达;分析了一些在RNA原位杂交的过程中可能碰到的问题及其解决方法。     

多彩色荧光原位杂交技术原理及其应用

多彩色荧光原位杂交是一门新兴的分子细胞遗传学技术,它用几种不同颜色的荧光素单独或混合标记的探针,进行原位杂交,同时检测间期细胞或中期细胞中的几个特异核酸序列,为分析癌症遗传不稳定性提供了一种简便、快速、可靠的方法,并广泛应用于物理图谱绘制、致突变研究、肿瘤病理学和产前诊断.     

植物染色体原位杂交技术的发展与应用

植物染色体原位杂交技术的发展与应用奇文清,李懋学（北京大学生命科学学院北京１００８７１）ＴＨＥＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴＡＮＤＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳＯＦＩＮＳＩＴＵＨＹＢＲＩＤＩＺＡＴＩＯＮＴＥＣＨＮＩＱＵＥＩＮＰＬＡＮＴＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＳ￥ＱｉＷ...     

DNA纤维上的原位杂交技术

ＤＮＡ纤维上的荧光原位杂交（Ｆｉｂｅｒ－ＦＩＳＨ）技术是一种非重要的分子细胞遗传学技术。对于高分辨物理图的绘制、基因组和染色体结构的研究、致病基因的定位克隆等都有很大作用,本文介绍了该技术的基本操作和应用,以及与引物原位ＤＮＡ合成（ＰＲＩＮＳ）等技术相结合进行更精确基因定位的潜力。     

原位杂交技术及其在果树研究中的应用

原位杂交技术是近年来快速发展起来的一门新技术,本文介绍了原位杂交技术的基本原理、方法及其发展前景,以及该技术与其它生物学技术相结合而形成的一些新技术。综述了这些技术在果树研究中的应用情况。     

荧光原位杂交技术的研究进展

荧光原位杂交(FISH)是在染色体、间期细胞核和DNA纤维上进行DNA序列定位的一种有效手段。近年来,围绕提高检测的分辨率和灵敏性,不断将免疫染色、量子点和微流控芯片等物理化学技术引入到荧光原位杂交中,促进了它的快速发展。本文主要综述了荧光原位杂交的基本原理和发展历程,重点介绍了免疫染色-荧光原位杂交(immuno-FISH)、量子点-荧光原位杂交(QD-FISH)和微流控芯片-荧光原位杂交(FISH on microchip)等多种新技术及其检测特点,如快速、灵敏、动态、多样化等。随着荧光原位杂交技术的不断完善与发展,将在细胞遗传学、表观遗传学及分子生物学等领域发挥更加重要的作用。     

细胞内RNA的原位杂交

本文介绍用原位杂交方法测定细胞内的RNA。该方法特异性较高,能保持细胞曲完整性。我们测定了不同细胞的rRNA基因的转录和原癌基因c-myc,c-H-rgs的转录,取得了较满意的结果。RNase处理细胞或质粒pBR322作探针,细胞中显影颗粒很少。本文对原位杂交方法学进行了初步的讨论。     

麦类作物体细胞基因组原位杂交(GISH)效果影响因素的分析

以八倍体小滨麦、八倍体小黑麦、八倍体小偃麦、小麦-中间偃麦草双体异附加系为实验材料对影响麦类作物体细胞GISH技术实验效果的因素进行分析,研究结果表明:细胞分裂相多、染色体分散良好、无杂质影响的高质量的染色体制片是取得理想实验效果的基础;探针DNA浓度与封阻DNA浓度的比例及杂交后洗脱条件的控制是取得理想实验效果的关键。此外,还对麦类作物体细胞基因组原位杂交实验中出现的染色体丢失、外源染色体无杂交信号、杂交信号的强弱、杂交信号过多(杂交背景重)或过少、噪音信号及杂交污点产生的原因进行了分析,并提出了相应的解决方法或注意事项。