婴幼儿毛细支气管炎的病毒病原学研究

1．从1974年冬—1976年春对北京地区婴幼儿毛细支气管炎80例患儿的咽拭子标本进行了病毒分离工作,结果共分离出合胞病毒12株,阳性率占15％。 2．以65例患儿的双份血清中和试验结果证明：其恢复期对合胞病毒{倍中和抗体升高的有39例,阳性率占56．5名。首次确证了北京地区婴幼儿毛细支气管炎和合胞病毒的病原关系。 3．北京地区农村于1976年春首次分离出合胞病毒,其双份血清恢复期中和抗体4倍升高的阳性率为75％。初步证明合胞病毒也是北京地区农村婴幼儿毛细支气管炎的重要病原。 4．对北京地区合胞病毒新分离株进行了一些培养特性和分离特性的研究,为今后中西医结合防治本病提供了一定的依据。     

婴幼儿肺炎的病毒病原学

1．1976年冬—1978年春对北京地区临床诊断疑似病毒性肺炎22l例患儿的咽拭标本进行了病毒分离,结果分离到合胞病毒29株,阳性率占13．1％。腺病毒42株,阳性率占19％。单纯癌疹病毒8株,阳性率占3,6％。血球吸附病毒2株,阳性率占0.9％。 2．对155例同上患儿的双份血清检查结果表明,其恢复期对合胞病毒Lon株≥4倍中和抗体升高的有68例,阳性率占43.9％。首次证明了北京地区婴幼儿病毒性肺炎和合胞病毒的病原关系。从155例同上患儿的双份血清血凝抑制试验结果证明,恢复期对腺病毒≥4倍血凝抑制抗体升高的有20例,阳性率占12.9％。145例婴幼儿病毒性肺炎患儿的双份血清检查结果表明,恢复期对流感病毒4倍血凝抑制抗体升高的阳性率占16．5％。恢复期血清对副流感病毒4倍血凝抑舒抗体升高的阳性率占13．1％。     

1987、1988年春南京地区婴幼儿呼吸道病毒感染病原研究

1987、1988年春南京地区婴幼儿呼吸道病毒感染明显增多,出现两次流行高峰,患儿90％在6个月龄内,3月龄内占65％,临床主要表现为细支气管炎、肺炎。本报告是从门诊及住院117名患儿采集咽分泌物及血液标本,分别进行病毒分离及间接免疫酶组化染色检查,确定两次流行均主要由呼吸道合胞病毒(RSV)感染所致。117份咽分泌物标本,接种Hep—2细胞共分离出29株病毒(阳性率24.8％)。经中和试验鉴定为呼吸道合胞病毒24株(82.8％),3型腺病毒4株(13.8％),腮腺炎病毒1株(3.4％)。29株病毒中25株于接种标本后12天内即出现明显的特征性细胞病变(CPE),最短的仅4天。117例患儿血清标本,酶染色阳性为32侧(阳性率27.4％),与病毒分离比较,两者均阳性者22例,均阴性者83例,符合率89.7％,病毒分离阳性,酶染色阴性者2例(均为发病后第二天入院抽血患儿)。酶染色阳性,病毒分离阴性者10例,表明酶染色法敏感性明显高于病毒分离。     

呼吸道合孢病毒在类淋巴传代细胞内繁殖的形态学研究

将从上海市婴幼儿下呼吸道疾病患者中分离到的呼吸道合胞病毒(RSV),接种在国內“建株”的类淋巴传代细胞(SL)上,证实该株细胞对RSV敏感,病毒在细胞内繁殖可迅速形成广泛典型的融合细胞病变,特征明显,易于观察。但对RSV在SL细胞内繁殖所致的细胞病变情     

患下呼吸道疾病的婴幼儿合胞病毒的分离

1．国内建株的类淋巴传代细胞(简称SL)分离证实对呼吸道合胞病毒敏感。其敏感性从病毒分离阳性率、病毒增殖滴度和融合细胞病变出现的天数看,与HeLa细胞相似。 2．呼吸遒台胞病毒在SL上所致的细胞病变,为易于辨认的折光性较强的融合病变。融合细胞经染色,胞浆内有典型包涵体,核可由几个至几十个不等。 3．1977年11月到1978年3月从上海市区及郊区县的105例肺炎及气管炎患儿中分离到35株呼吸道台胞病毒。28例症状疑似患儿双份血清,有4倍及4倍以上抗体增长的共15例。     

抗呼吸道合胞病毒(RSV)单克隆抗体的制备及其对RSV病毒株抗原性的分析

用呼吸道合胞病毒R6(武汉地方株)活毒滴鼻加用戍二醛固定的病毒感染的Hela细胞免疫BALB/C鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤SP_2/0细胞融合,培育出分泌抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞13株,这些细胞的染色体数为94至104条,其分泌的抗体分别属于鼠IgC_1、IgG_(2a)、IgG_(2b)亚类。腹水荧光抗体滴度为1:10000～1:100000。其中五株单抗有中和病毒作用,尤其是两株中和放价达1:128。应用免疫转印法证实了这些单抗分别能识别RSV6种主要结构蛋白,用7株识别不同病毒结构蛋白的单抗对12株合胞病毒进行抗原性分析,可将这些病毒区分为二个血清型,即A亚型和B亚型。     

新型冠状病毒荧光定量PCR的Ct值与病毒分离的结果分析

为探究利用SARS-CoV-2的ORF1ab基因和N基因作为靶标进行荧光定量检测的Ct值与SARS-CoV-2病毒分离阳性率之间的关系。本研究对广州入境的新型冠状病毒肺炎输入病例临床样本进行荧光定量PCR检测和用Vero细胞进行病毒分离,统计病毒分离率与荧光定量PCR检测Ct值之间的关系,再通过logistics回归模型用Ct值来预测病毒分离率;同时对收集到的临床样本进行三代测序及进化树的构建。结果显示,在160例新型冠状病毒肺炎输入病例临床样本中,分离到74株新型冠状病毒,分离阳性率为46.25%,分离到包括20株Alpha、9株Beta、2株Delta等VOC毒株和2株Epsilon、1株Eta等VOI毒株,其他变异株42株;病例样本荧光定量PCR检测ORF1ab基因Ct值为16.12～39.00,N基因的Ct值为17.82～39.41;病毒分离率与样本荧光定量PCR检测的ORF1ab基因和N基因的Ct值均呈负相关,在Ct值>31时,分离率仅9.10%(6/66),而当Ct值<23.1时,病毒分离阳性率可超过95%,分离到新冠病毒的病例样本荧光定量PCR检测的ORF1a...     

呼吸道合胞病毒的分离及其生物性状的研究

我们使用33℃旋转培养法,用HeLa细胞与原代人胚肾细胞,对34份急性呼吸道感染的婴儿进行了病毒分离,分出呼吸道合胞病毒6株。同时,对呼吸道合胞病毒生长性状与保存条件做了研究,发现其在HcLa细胞中用旋转法培养较静置法敏感,且融合性病变亦较明显。     

扫描电镜研究呼吸道合胞病毒的融合细胞病变

1977—1979年我们使用国内建株的类淋巴传代细胞(SL)分离培养呼吸道合胞病毒(RSV),证实该株细胞对RSV敏感,可形成广泛典型的融合细胞病变。近几年来又将其使用于RSV的分离培养及中和试验等工作中。1979年曾对     

婴幼儿呼吸道合胞病毒主动免疫的新进展

在婴幼儿中,呼吸道合胞病毒是最重要的呼吸道感染病毒之一。本文讨论该病毒候选疫苗的研制和开发,包括PFP-1、PFP-2和BBG2Na亚单位疫苗以及冷传代／热敏感突变株等。     

170例婴幼儿中毒型肺炎的病毒分离与血清学试验结果分析

1. 1960年11月至。1961年3月从170例婴幼儿中毒型肺炎患者的咽拭中分离出64株腺病毒,分离阳性率为37．6％。其中42株为3型,18栋为7型,其他4株不能为3型和7型血清所中和。。1961年的特点为3型多于7型。 2. 从10例咽拭分离腺病毒阳性的中毒型肺炎病例的粪便中分离出同型病毒4株,并有1例从咽拭、粪便及结膜拭子均分离出同一型病毒。 3．从同期采集的18例麻疹肺炎病例的咽拭分离出3袜腺病毒,其中2株为7型,1株不能为3型和7型血清所中和。 4．111例患儿双份血清中对腺病毒补体结合抗体有4倍以上增长者43例,阳性率为38．7％。 5．从抗体增长4倍以上的37例中,分离出病毒者24例,分离阳性率为64．8％。病毒分离阳性的33例中,补体秸合抗体增长4倍以上者占24例,血清学阳性率为72．7％。二者结果在多数病例中是符合的。 6. 97例病毒分离与血清学试验综合结果,确定为腺病毒感染者有47．4％,血清学疑阳性者27．8％,另有24．8％确定为阴性。     

2021-2022监测年度枣庄市乙型流感病毒Victoria系全基因组测序分析

为了解山东省枣庄市2021-2022监测年度乙型流感病毒Victoria系的流行情况,分析病毒全基因组遗传特征,了解病毒进化变异特点,分析与疫苗株的相似程度,为流感的防控提供参考依据。从枣庄市流感监测网络实验室分离的流感毒株中随机选取10株B/Victoria系毒株,以WHO推荐的B/Victoria流感疫苗株B/Washington/02/2019(2020-2022北半球疫苗代表株)为参考进行全基因序列测定,利用生物信息学软件构建进化树,并分析分子进化特征。2021年4月-2022年3月,枣庄市流感病毒监测阳性率为17.03%(202/1186),均为B/Victoria系流感。将枣庄市分离的10株B/Victoria系毒株序列与北半球疫苗代表株B/Washington/02/2019相比血凝素（Hemagglutinin,HA）基因核苷酸同源性为99.5%～100%,HA基因氨基酸同源性为99.7%～100%;HA进化树分析中,该10株B/Victoria系毒株与疫苗代表株B/Washington/02/2019同属于1A分支;但发现已有5处抗原表位突变,均发生在120-loop...     

牛副流感病毒3型的分离鉴定

从黑龙江省某牛场患有呼吸道疾病的病牛鼻液中分离到1株病毒, 该病毒能在MDBK细胞上增殖并产生特征性细胞病变, 对分离毒株进行理化特性、RT-PCR鉴定及序列测定与分析, 结果发现该病毒为RNA病毒, 具有血凝性, 对乙醚、氯仿极其敏感, 不耐热, 对酸的抵抗力差; 分离株与GenBank中已发表的病毒株N基因片段的同源性为82.6%~99.1%, 结果表明分离的病毒为牛副流感病毒3型毒株, 命名为BPIV3 DQ1株。根据GenBank上发表的牛副流感病毒3型核衣壳蛋白N基因序列, 设计合成了一对特异性引物, 能扩增704 bp的目的片段, 可以检测出10个 TCID50/100 μL病毒核酸。     

人轮病毒的细胞培养分离及其血清型的鉴定

<正>本轮报导从73份轮状病毒阳性粪便中,用MA-104细胞或非洲绿猴(AGMK)原代细胞培养方法分离到39株人轮状球毒。用噬斑抑制试验和中和试验法鉴定结果可分为4个血清型,其中3个型别以前已报导过。 病毒分离方法,取10％粪便悬液,先经10μg/ml胰酶处理37℃1小时,接种细胞后吸附37℃1小时,洗一次,加入含0.5μg/ml胰酶的MEM,其中含DEAE-dext-     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因与消毒剂抗性的研究

摘要：目的 了解临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐消毒剂基因携带状况及其对消毒剂抗性水平。方法 采用聚合酶链反应（PCR）法和体外抗菌试验方法进行实验室检测。结果 10株临床分离的MRSA中,检出4株携带qacA/B基因,检出率为40.0%。含氯消毒剂对4株qacA/B基因阳性MRSA的MIC值均高于标准菌株。戊二醛消毒剂对2株MRSA基因阳性MRSA的MIC值和1株MRSA基因阳性MRSA的MBC值高于标准菌株,其他均与标准株相同。结论 临床分离的MRSA qacA/B基因阳性率较高,携带qacA/B基因阳性的MRSA对含氯消毒剂有产生抗性的趋势。     

小鼠诺如病毒分离鉴定及病毒衣壳蛋白基因序列分析

目的了解广东地区小鼠诺如病毒（murine norovirus,MNV）的分子遗传特征和进化来源。方法采用小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞对RT-PCR检测为阳性的小鼠样本进行病毒分离,通过细胞病变、RT-PCR、间接免疫荧光试验、测序方法对病毒分离株进行鉴定。应用RT-PCR技术针对15株MNV分离株的VP1基因的1626个核苷酸片段进行基因扩增,将扩增产物连接在pMD18-T载体后转化到大肠杆菌中进行克隆。通过氨苄青霉素平皿筛选,将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定及序列分析。将这15株MNV分离株与从GenBank获得的19株MNV参考株进行序列比较分析,基于VP1基因的1626核苷酸片段构建系统发生进化树,一起进行分子流行病学研究。结果从80个小鼠样本中分离到了15株MNV病毒,通过细胞病变试验、RT-PCR试验、间接免疫荧光试验和测序分析鉴定确认分离到的病毒为MNV。序列分析结果显示MNV分离株的VP1蛋白基因全长均为1626个核苷酸,广东地区15株MNV分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别在89.7%~100%和94.8%~100%之间,15株MNV分离株与其他19株MNV参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别在87.5%~92.9%和92.4%~98.2%之间。进化树分析表明来自设施A和设施D的13株病毒之间的亲缘关系较近,同属一个进化分支。来自设施B的ZD-1毒株和设施C的ZYY-163毒株与来自广东（K162）、日本（S7-P2、S7-PP3）、韩国（K4）和德国（Berlin/04/06/DE、Berlin/05/06/DE）同属另一个进化分支。结论成功分离到15株MNV病毒。遗传进化分析表明广东地区的MNV分离株来源并不相同,来自设施B和设施C的MNV分离株与国外分离株的亲缘关系较近,而来自设施A和设施D的13株MNV分离株可能是本地固有的毒株。     

三株柯萨奇A10型候选疫苗株生物学特性及免疫原性研究

近年来CV-A10已成为手足口病的最主要的病原体之一。本研究对3株不同CV-A10毒株进行生物学特性及体液免疫原性比较分析，筛选最适的CV-A10灭活疫苗候选株。将2014年荆州（JZ）分离株CV-A10-L12、2019江苏沛县（PX）分离株CV-A10-195和CV-A10-300，作为候选疫苗株经10层Vero细胞工厂培养，蔗糖垫底离心、蔗糖梯度离心、氯化铯等密度梯度离心后收获病毒颗粒。对不同候选毒株的滴度、病毒实心颗粒（FP）和空心颗粒（EP）的产量和比例、氯化铯密度、形态及结构蛋白等生物学特性进行比较分析。将纯化后病毒颗粒经甲醛灭活后，免疫Balb/C小鼠评价免疫原性。三株CV-A10候选疫苗株细胞工厂培养、纯化后，收获了高纯度、含病毒结构蛋白、形态完整的EP、FP颗粒。按照细胞培养自然EP和FP比例混合后，免疫6周龄Balb/C小鼠。以同源和非同源的四株CV-A10毒株作为中和毒种，测血清中和抗体滴度，评价3个疫苗候选株的体液免疫原性。CV-A10-195/PX/2019株病毒颗粒产量及免疫原性高于CV-A10-300/PX/2019株，高于CV-A10-L12/JZ/20...     

河北省石家庄市手足口病流行中健康人肠道病毒带毒情况及病原分析

为了解河北省石家庄市健康儿童中肠道病毒带毒情况及血清型构成,对2010~2012年石家庄市的3个县区1 223例0~6岁的健康儿童及406名监护人(健康成人)采集咽拭子和粪便标本进行核酸检测鉴定肠道病毒血清型,并进行分子流行病学分析,为肠道病毒感染相关疾病的防控和治疗提供基础资料。1 223名健康儿童的标本检测结果中,肠道病毒(Enterovirus,EV)阳性的283例,阳性率为23.14%(283/1 223)。其中,以非肠道病毒71型非柯萨奇病毒A组16型的EV(Other-Enterovirus,other-EVs)阳性为主,占EV阳性的62%(175/283),而引起手足口病常见的EV病原体肠道病毒71型(Enterovirus A71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)阳性率较低,分别占19%(55/283)和18%(51/283);将结果为other-EVs阳性的175名健康儿童的标本全部进行病毒分离鉴定,共分离到25株病毒,分离率为14.29%(25/175),其中柯萨奇病毒B组5型(Coxsackievirus B5,CVB5)分离率最高,为40%(10/25)、柯萨奇病毒B组13型(Coxsackievirus B3,CVB3)分离率为24%(6/25)、埃可病毒21型(Enteric cytopathic human orphan virus 21,ECHO21)分离率为16%(4/25)、其他EV株分离率为20%(5/25)。提示,应加强对CVB3和CVB5等other-EVs的监测。     

10株水痘带状疱疹病毒的分离鉴定与生物学特性

用Vero-E6细胞从12例水痘及带状疱疹病人水疱液中分离到10株病毒,分离阳性率为83.3%.10株病毒均具有使感染细胞圆缩、融合、脱落等典型的VZV局灶性细胞病变(CPE)特点,CPE随着传代次数增加而加快.用带状疱疹恢复期病人血清作间接免疫荧光染色镜检,可见典型的感染细胞核内荧光块.10株病毒感染细胞制成的抗原片,检测5例带状疱疹病人急性期及恢复期血清,荧光抗体滴度均有4倍以上增高.VZV对Vero细胞敏感;对沙鼠肾,胎兔肾,胎豚鼠肾、肺、脾原代单层细胞不敏感;对乳小白鼠不敏感.毒种在-20℃保存一周内死亡;但在30%脱脂牛奶、20%小牛血清及10%山梨醇Eagle's液中,液体或真空冷冻干燥-100℃可保存二年以上.     

人偏肺病毒在传代细胞和人呼吸道上皮细胞中分离和鉴定

人偏肺病毒（Human metapneumovirus,HMPV）是2001年鉴定出的新发呼吸道病毒,婴幼儿、老人和免疫抑制人群易感,引起上呼吸道和下呼吸道感染,目前尚无疫苗和特异性治疗方案。为获得北京地区HMPV临床流行毒株,本研究将经荧光定量PCR检测为HMPV阳性的鼻咽抽吸物样本分别接种LLC-MK2、Vero-E6和分化良好的人呼吸道上皮细胞（Human Airway Epithelium,HAE）,观察细胞病变、检测免疫荧光、电镜观察病毒形态、测定病毒滴度及分析复制特点,对分离获得的HMPV分离株进行鉴定。结果表明,HMPV感染LLC-MK2细胞可形成合胞体,但在Vero-E6中多呈单个细胞感染;经免疫荧光检测,HAE、LLC-MK2和Vero-E6细胞均可见绿色荧光;电镜结果可见病毒为近似球型的颗粒,有包膜和刺突,直径约在150nm～200nm之间;HMPV在HAE和LLC-MK2两种细胞上的复制特点基本相同。本研究成功建立了临床样本在LLC-MK2、Vero-E6和HAE分离培养HMPV的方法,分离并鉴定了HMPV临床分离株,为HMPV感染机制的研究奠定基础。