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固定化解淀粉芽孢杆菌a—淀粉酶的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
本文对固定化a-淀粉酶进行了初步的研究,固定化酶采用海藻酸钙凝胶球来包埋一定纯度的解淀粉芽孢杆菌a-淀粉酶,并且把固定化酶的特点和性质同游离酶进行了比较。同游离酶相比固定比酶明显提高了酶的耐热性和贮藏稳定性,游离酶的最适作用温度为60℃,而固定化酶最适温度为70℃。 相似文献
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蛋白酶对解淀粉芽孢杆菌α—淀粉酶活力的影响 总被引:5,自引:1,他引:5
目前工业生产α-淀粉酶的主要菌种是解淀粉芽孢杆菌,该菌在培养条件下不但产生α-淀粉酶,同时也产生一定比例的蛋白酶。本文研究了不同来源的蛋白酶对解淀粉芽孢杆菌BF7658和86315α-淀粉酶活性的影响。结果表明发现中性蛋白酶对两种α-淀粉酶活性无显著影响,而2709碱性蛋白酶能使α-淀粉酶活性丧失60%以上。 相似文献
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提高中温α-淀粉酶生产菌株的发酵温度,对减少冷却水消耗降低生产成本有重要意义。本文利用基因删除技术删除了地衣芽孢杆菌CBBD302菌株α-淀粉酶的编码基因(amy L)获得突变株D402。将表达解淀粉芽孢杆菌中温α-淀粉酶基因Ba A的重组质粒p HY-WZX-Ba A转化D402,获得表达中温α-淀粉酶的重组地衣芽孢杆菌D402/p HY-WZX-Ba A。摇瓶发酵实验显示,重组菌最适发酵温度为42℃,比原生产菌株提高8℃,最高产酶水平达到301 U/m L。30 L发酵罐发酵试验,78 h达到最高酶活531 U/m L。重组酶的最适作用温度为60℃,最适作用p H 6.5,在90℃保温20 min可以完全失活,保持了中温α-淀粉酶既能在淀粉糊化温度下保持稳定又便于灭酶的优良性能。 相似文献
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以中温α-淀粉酶生产菌株Bacillus amyloliquefaciens M23基因组DNA为模板。PCR扩增得到了2.0kb α-淀粉酶基因全长序列。该基因由上游启动子220bp,结构基因1544bp和终止序列320bp构成。将无信号肽的α-淀粉酶结构基因amyQ,克隆入表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3),经诱导,测定α-淀粉酶活性。结果表明:α-淀粉酶基因amyQ获得了活性表达,酶活力为2.297U/mL,SDS-PAGE电泳结果显示出分子量约为58kDa特异性蛋白质条带。酶学性质分析表明,重组α-淀粉酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6.5,在60℃保温15min保持85%以上活性,超过15min,酶迅速失活,在pH5.5~10.0环境下稳定。水解产物分析表明:淀粉水解终产物主要为麦芽寡糖和糊精和少量葡萄糖。 相似文献
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巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)AS1.127的淀粉酶基因的全碱基序列已被测定。结构基因由1982bp的单一开读框架组成。由DNA序列推测出的前体酶蛋白由659个氨基酸组成,N-端33个氨基酸为信号肽。成熟酶分子由626个氨基酸组成,分子量为68.676kD。该淀粉酶属糖化型α-淀粉酶。并与枯草杆菌(B.subtilis)168产生的糖化型α-淀粉酶之间有83.3%的同源性。分析发现两种菌产生的酶分子的N-端3/4的同源性为90.4%,而C-端1/4的同源性只有70%。序列排比结果说明在淀粉酶基因的趋异进化过程中,基因突变和遗传重组都曾起过作用。 相似文献
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巨大芽孢杆菌(Bacilusmegaterium)AS1.127的淀粉酶基因的全碱基序列已被测定。结构基因由1982bp的单一开读框架组成。由DNA序列推测出的前体酶蛋白由659个氨基酸组成,N端33个氨基酸为信号肽。成熟酶分子由626个氨基酸组成,分子量为68676kD。该淀粉酶属糖化型α淀粉酶。并与枯草杆菌(B.subtilis)168产生的糖化型α淀粉酶之间有833%的同源性。分析发现两种菌产生的酶分子的N端3/4的同源性为904%,而C端1/4的同源性只有70%。序列排比结果说明在淀粉酶基因的趋异进化过程中,基因突变和遗传重组都曾起过作用。 相似文献
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目的:以地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶基因(amyL)为报告基因,构建含不同启动子的枯草杆菌表达载体,转化枯草杆菌,并对重组菌的酶活进行分析,比较不同启动子对amyL基因在枯草杆菌中表达的影响。方法:以高温α-淀粉酶高产菌株B.licheniformis0204染色体DNA为模板,PCR扩增得到amyL并分别与PQ启动子和P43启动子进行连接构建表达载体pUB-PQ-amyL和pUB-P43-amyL,化学法转化枯草杆菌1A717,筛选得到重组转化子后对重组菌的表达产物进行SDS-PAGE和酶活检测。结果:重组菌摇瓶发酵105h后测定高温α-淀粉酶酶活,B.subtilis1A717(pUB-PQ-amyL)的最高酶活为280.1U/mL,B.subtilis1A717(pUB-P43-amyL)的最高酶活为190.5U/mL。结论:PQ启动子调控的高温α-淀粉酶最高表达水平是P43启动子调控的最高表达水平的1.47倍,说明PQ启动子能使amyL基因在枯草杆菌中更高效地表达。 相似文献
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地衣芽孢杆菌胞外耐高温α-淀粉酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)突变株7902培养液离心后的上清液,于75℃至100℃作用.Α-淀粉酶活力基本上随温度提高呈直线上升。酶液在不加Ca2+和无任何保护剂条件下于90℃处理60分钟,95℃处理20分钟,酶活力均能保留90%以上。培养液经硫酸铵分段沉淀、Sephadex G-50疑胶过滤和制备垂直平板电泳纯化,经PAGE鉴定为一条带,纯酶比活提高49.3倍,淀粉酶法区带定位鉴定证明提纯样品是α-淀粉酶。SDS凝胶电泳测定分子量为68000。金属离子Ca242+、Li+、Mg2+等对酶有激活作用,而AI3+、Ag+、Cu2+、Mn2+和Fe2+等有一定的抑制作用。 相似文献
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耐碱性巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)9-A2经紫外线、甲基磺酸乙酯和硫酸二乙酯等多次诱变处理,获得一株产碱性α-淀粉酶能力较高的变异株L-49。L-49菌株比出发株的产酶能力提高近2.5倍,当以酵母膏为氮源,可溶性淀粉为碳源,初始pH9 ̄10,种龄18h,接种量5%(V/V),30℃培养48h,酶活力可达730μ/ml。 相似文献
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枯草芽孢杆菌(Baeillas subtilis) BF7658产生的a-淀粉酶(EC 3.2.1.1)在免疫学上与解淀粉芽孢杆菌(B.Amyloliquefaciens)产生的液化型一淀粉酶相同。 并且二者的a-淀粉酶的淀粉水解产物的层析谱带相同,分子量相等(约55000道尔顿),等电点相近(5.12和5.28);B.Subtilis Marburg 168a-淀粉酶分子量为64000道尔顿,等电点为6.12。因此,B.subtills BF7658产生的a-淀粉酶是液化型a-淀粉酶。因而建议将B.Subtilis BF7658改名为B.Amylolique]aeiens BF7658。 相似文献
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地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶的组成及光谱学性质 总被引:2,自引:0,他引:2
a-Ⅲ是地衣芽孢杆菌变异株A.4041高温a-淀粉酶中的主要组分,每分子含10个钙原子,氨基酸分析表明:a-Ⅲ富含丝氨酸(17.9%),天门冬氨酸和谷氨酸(包括酰胺)占20.7%,碱性氨基酸占7.7%。紫外光谱的最大和最小吸收分别在278nm和249nm,荧光光谱的最大激发波长和发射波长分别为282nm和340nm。远紫外CD谱显示222nm和219nm的双负峰及208nm和216nm处鼓起的两个负肩,溶液中a-螺旋构象占388%。 相似文献
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地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶(BLA)是淀粉水解与生物加工过程中重要关键酶制剂之一.为了进一步提高地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶生产菌株的生产性能,本研究构建了一种含有地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶编码基因amyL的整合性重组质粒pBL-amyL.将重组质粒pBL-amyL转化入BLA工业生产菌株Bacillus licheniformis B0204,再在卡那霉素存在下介导其B.1icheniformis B0204染色体中的同源整合与高温α-淀粉酶编码基因amyL的扩增,由此获得了携带多个amyL拷贝的转化子.对转化子的amyL拷贝数及其BLA发酵水平分别用荧光实时定量PCR及摇瓶发酵试验进行评价与鉴定.与出发菌株B0204相比,含2~5倍amyL拷贝数的重组菌的BLA的合成水平显著提高.其中,重组菌REBL18生产BLA的水平提高了89.2%. 相似文献
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解淀粉芽孢杆菌研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
解淀粉芽孢杆菌具有广泛的抗菌能力,在环保、种植业、水产养殖业具有广泛的应用前景。本文对近年来关于解淀粉芽孢杆菌的研究与探索,从分离、筛选、鉴定、优化培养、分子生物学鉴别、代谢产物分析及应用研究方面进行了总结。 相似文献