狂犬病疫苗蔗糖密度梯度离心纯化工艺开发

目的:开发冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的连续流蔗糖密度梯度离心纯化工艺。方法:分别比较两种不同初始蔗糖浓度和不同上样速度对纯化效果的影响,初步确定纯化工艺;通过多批次实验确定样品收集范围;比较不同浓缩倍数条件下杂质去除和抗原回收情况,确定合适的收获液浓缩比例;比较不同批次样品纯化后的杂质去除率和重复性,判定本纯化工艺的稳定性。结果:选取60%作为初始蔗糖浓度,在上样速度为150～200ml/min时,可以有效地对10倍浓缩的病毒收获液进行纯化;卵清蛋白、牛血清白蛋白和庆大霉素去除率分别达到99%,95%和95%,且工艺具有极好的稳定性。结论:开发的连续流蔗糖密度梯度离心技术可以作为冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的产业化纯化工艺。     

人用精制Vero细胞狂犬病疫苗纯化方法选择

人用精制Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗为一种安全、有效的新型疫苗,我们在研制该种疫苗时首先比较了密度梯度离心法和凝胶过滤柱层析法,并发现后者最佳。我们选择了以Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＦＦ为介质的凝胶过滤柱层析的工艺,并对该方法的上样量、流速等指标进行了选择,确定了最佳方法,并在研制中使纯化疫苗的杂蛋白去除率达到９９．８％以上,为大规模生产提供了工艺方法。     

柱层析法纯化人用地鼠肾细胞狂犬病疫苗

用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－６Ｂ凝胶层析法纯化原代地鼠肾细胞狂犬病苗,可去除绝大部分杂蛋白,总蛋白含量减少９９．４％以上,纯化后抗原比活性提高２１０倍,单位疫苗剂量中牛血清含量降低１８．７倍以上。方法简单,价廉,适合于工业生产     

HAV病毒液的3种浓缩方法比较

目的:对HAV病毒液的3种常见浓缩方法进行分析比较,为HAV病毒研究及规模化疫苗生产提供参考。方法:使用MILLIPORE PELLICON超滤、PEG 6000沉淀、蔗糖-甘油垫三种方法对纯化HAV病毒液进行浓缩,用ELISA方法对浓缩液进行抗原滴度检测,计算不同浓缩方法的回收率。结果:HAV病毒液经过7次超滤循环浓缩,平均回收率为86%;PEG浓缩方法回收率平均72.5%;蔗糖-甘油离心浓缩方法平均回收率53.3%。结论:蔗糖/甘油超离心法,集纯化浓缩一体,适用于样品量较少,需要高浓度样品的试验;PEG浓缩得率适中,操作简单,应用范围较广;超滤膜浓缩在大规模疫苗生产或样品量较大时适用,但需控制样品浓度及浓缩倍数不能太高,以免样品损失。     

HAV病毒液的3种浓缩方法比较

目的：对HAV病毒液的3种常见浓缩方法进行分析比较,为HAV病毒研究及规模化疫苗生产提供参考。方法：使用MILLIPOREPELLICON超滤、PEG6000沉淀、蔗糖．甘油垫三种方法对纯化HAV病毒液进行浓缩,用ELISA方法对浓缩液进行抗原滴度检测,计算不同浓缩方法的回收率。结果：HAV病毒液经过7次超滤循环浓缩,平均回收率为86％;PEG浓缩方法回收率平均72．5％;蔗糖．甘油离心浓缩方法平均回收率53．3％。结论：蔗糖／甘油超离心法,集纯化浓缩一体,适用于样品量较少,需要高浓度样品的试验;PEG浓缩得率适中,操作简单,应用范围较广;超滤膜浓缩在大规模疫苗生产或样品量较大时适用,但需控制样品浓度及浓缩倍数不能太高。以免样品损失。     

纯化乙型脑炎疫苗的研制

将乙脑P3毒株接种地鼠肾细胞,制备病毒原液,经灭活、浓缩、层析纯化后收集抗原,再经除菌、配制,制备乙脑纯化疫苗。结果表明：病毒浓缩液经纯化后,杂蛋白去除率大于99％,牛血清蛋白残留量也明显降低;纯化疫苗主要指标检定均达到预期效果;效力试验结果显示当纯化原液蛋白含量稀释至15μg/ml时,疫苗效力符合要求。     

重组人尿激酶原纯化中浓缩方法的比较

对尿激酶原纯化中的浓缩方法进行了探索,先后采用了3种不同的方法,即超滤、CM-阳离子柱、疏水色谱柱浓缩。结果表明,超滤只适合于大量样品的浓缩,样品量较小时损失较大,而且机械作用较强会使部分产品分解;CM-阳离子枉浓缩回收率较高,但得到的产品盐浓度高,还需要经过脱盐处理,增加了操作步骤,而疏水柱浓缩方法较为理想,经它浓缩后的产品用SDS-PAGE分析,非还原条件下,纯度在98％以上,还原条件下单链占90％以上,浓缩16倍,尿激酶原浓度达到3mg/ml以上。     

蔗糖梯度离心法纯化Vero细胞乙脑疫苗的纯度分析及与层析法的比较

通过对蔗糖梯度离心法纯化Vero细胞乙脑疫苗的纯化工艺进行分析,发现现行工艺中收取的病毒组分中,不同蔗糖浓度中病毒的纯度是不同的,而呈峰型且与病毒效力峰及蛋白浓度峰不重合。实验结果对今后工艺的改进具有指导意义。另外应用Sephacryl-s-1000凝胶层析法对乙脑病毒进行了纯化研究和分析,发现蔗糖梯度离心法和层析法纯化的病毒的纯度及回收率分别为291．46u／mg、96．01％和309．41 u／mg 65．08％,Sephacryl-s-1000凝胶层析法同样可以获得较高的纯度和收率。     

鲍曼不动杆菌烈性噬菌体的分离与纯化

利用柱层析方法,纯化鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）烈性噬菌体AB1。首先采用聚乙二醇6000沉淀方法,初步分离裂解液中的噬菌体,噬菌体纯度由6.1×1010 pfu/mg提高到37×1010 pfu/mg,噬菌体回收率为58.8%,蛋白质去除率为90.6%;噬菌体粗提样品经Sepharose 4B凝胶过滤层析柱进一步纯化,纯度提高到73×1010 pfu/mg,噬菌体回收率为95.7%,蛋白质去除率为48.1%;收集的噬菌体样品最后经DEAE-52阴离子交换层析柱处理,噬菌体纯度为40×1010 pfu/mg,回收率为50.8%,蛋白去除率15.6%。内毒素分析结果显示,Sepharose 4B凝胶过滤层析纯化的噬菌体样品中,内毒素含量为443.8 EU/mg,而DEAE-52阴离子交换层析纯化的噬菌体样品中,内毒素含量为544.4 EU/mg。实验结果显示,PEG沉淀方法与Sepharose 4B凝胶过滤方法能够有效地提高噬菌体纯度,而DEAE-52阴离子交换层析则不能提高噬菌体的纯度,也无法有效地去除样品中的内毒素。     

应用生物反应器建立人用冻干狂犬病疫苗(Vero细胞)生产工艺的研究

应用15L生物反应器,采用片状载体对Vero细胞进行高密度培养、制备高毒力滴度的狂犬病毒收获液,经纯化后生产人用冻干狂犬病疫苗。采用15L生物反应器对培养方法(批次培养和连续灌流培养)进行试验,收获高毒力滴度的狂犬病毒收获液并制备人用冻干狂犬病疫苗。结果表明:Vero细胞在接种狂犬病毒后可以连续收获病毒液达到25d以上,冻干狂犬病疫苗的效价可以达到5.54IU/剂。本工艺可以用于进行大规模的人用冻干狂犬疫苗的生产。     

六种藓类植物茎的比较解剖学研究

通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一.     

真菌类遗传学分析的知识结构教学

本文以认知结构理论为指导,讨论了真菌类遗传分析与高等动植物遗传分析的内在联系,认为利用这种内在联系进行教学可收到好的效果并说明了作者的具体教学过程。 Abstract:In the paper, the relationship between genetic analysis of Fungi and genetic analysis of high animal and plant was discussed.A good results were obtained when we adopted this method in the teaching.     

医疗机构合理用药评价模型的构建研究

目的 针对医疗机构的合理用药水平进行评价研究。方法 根据医疗机构合理用药的具体要求,构建医疗机构合理用药评价指标体系,采用基于模糊群决策的方法和多指标评价分析法构建医疗机构合理用药评价模型。结果 构建了基于模糊群决策的医疗机构合理用药评价模型,并通过实例分析证明了评价模型的可行性。结论 建立的基于模糊群决策的医疗机构合理用药评价模型能够对医疗机构的合理用药水平进行科学评价,为提高医疗机构合理用药水平奠定基础。     

棉铃虫钙粘蛋白N端多肽多克隆抗体制备及对Bt抗性的初步检测

用重组表达的棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中肠钙粘蛋白N端多肽片段制备兔多克隆抗体,并利用其对Bt抗性进行鉴定。通过RT-PCR方法对棉铃虫中肠钙粘蛋白N端多肽的基因片段Cad285进行PCR扩增,将其克隆到pET-30a原核表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,得到35ku的重组融和蛋白,融合表达的包涵体经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体,获得可溶性纯化蛋白,用纯化后蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA检测其效价高于1∶16000;利用最终获得的多克隆抗体对室内纯合Bt抗/感品系的棉铃虫中肠钙粘蛋白进行Western blot分析,结果显示敏感和抗性品系之间有明显差异,表明其能够应用对Bt抗性进行初步检测。     

Cause of Senescence of Nine Sorts of Flowers

The levels of endogenous phytohormones and respiratory rate in nine sorts of flowers such as Cymbidium faberi Rolfe, Nopalxochia ackermannii Kunth and others were investigated both at full bloom and senescence and meanwhile the effect of exogenous phytohormones on prolonging the blossoms and promoting ethylene production were tested. There is a high content of endogenous ethylene in all the long-lived flowere, about 3–16 folds higer than the short-lived ones. There is a high level of ABA at full blooming flowers of short-lived flowers, in which there is no or only some cytokinins in it, but the ratio of CTK (6BA+zeatin)/ABA is smaller(l.7). The endogenous ABA reached a much higher level at senescence in all nine sorts of flowers, so it is reasonable to consider that it is ABA which plays an important role of regulation in controlling flower's senescence. There is a much higher level of GA3 and zeatin in the long-lived flowers which is not demonstrated in the shortlived ones. The respiratory rate is one of the factors controtling the longevity of flowers, but it does not play a decided role. Application of 6BA and zeatin prolongs distinctly orchid’s longevity, however exogenous IAA through the promotive action on ethylene production, evidently extends the longevity of the flowers of the Nopalxochia ackermannii Kunth.     

青蒿素生物合成机理研究现状

本文总结了目前有关青蒿素生物合成机理方面的研究,主要包括青蒿素生物合成中生理因子的影响,青蒿素生物合成中间体及前体,青蒿素生物合成细胞定位等。指出了存在的一些问题及今后的研究发展前景。     

龙胆科药用植物化学成分的研究现状

龙胆科植物在我国的分布范围很广,且多数为药用植物,其多数种属的药用植物,至今其化学成分尚未被系统研究。综述了目前龙胆科药用植物的化学成分的研究现状及一般提取方法,对近年来发现的环烯醚萜及裂环烯醚萜类化合物进行了总结,为本科药用植物的更深入研究提供了参考。