3′-甲基二甲基氨基偶氮苯诱发大鼠肝癌及癌前期肝内色氨酸吡咯酶底物及激素诱导的抑制

本文对大鼠肝癌及癌前期肝内TP的底物诱导和激素诱导作了比较研究。在3′-MeDAB诱发的肝癌中,TP活性很低,且不因注射色氨酸或氢可地松而升高,而癌周组织则仍保留对底物和激素诱导的能力。喂3′-MeDAB 13天、28天、90天大鼠肝内TP的底物诱导效应都较对照组为低。急性注射3′-MeDAB25小时,以100毫克/100克体重的L-色氨酸进行诱导,TP的诱导效应亦较对照组为低。氢可地松诱导的结果与底物诱导的相似,无论在喂或急性注射3′-MeDAB的情况下,TP的诱导效应都受到抑制。但在相同条件下,非致癌物,2-MeDAB,对TP的底物诱导和激素诱导(慢性的或急性的实验)也有相似的作用。诱导后肝癌组织或喂偶氮染料的肝组织中都未发现有TP的抑制物或狗尿酸酶的激活物。微粒体及正铁血红素与上清液的加合实验表明:(1)肝癌微粒体几乎完全不具有激活TP的活力;癌前期(3′-MeDAB组)肝微粒体已部分失去此种生化功能,但2-MeDAB组微粒体则否。3′-MeDAB对肝微粒体中辅助因子(正铁血红素)的结构并无破坏,而可能使辅助因子的含量减少。(2)微粒体对激活上清液TP的效果较自由的正铁血红素差,即使加入过量微粒体亦不能使TP活性增高到加入正铁血红素的水平;微粒体对3′-MeDAB组上清液的激活不如对2-MeDAB组及对照组上清液(底物或激素诱导)的激活显著,而正铁血红素对三组上清液都有显著激活。(3)肝癌细胞上清液只合有极少量的TP蛋白,且不因注射色氨酸或氢可地松而增加;癌前期肝细胞上清液的TP蛋白因底物或激素诱导而增加的量都较对照粗低。2-MeDAB组也有相似现象。以上结果表明,肝癌及癌前期肝内TP诱导的受损,主要是由于诱导后TP蛋白的缺少,而不是由于辅助因子(如正铁血红素)的不足,或非酶蛋白的增多。     

3′-甲基奶油黄诱癌过程中大鼠肝凝集素活性的变化

 <正> 近年来,人们甚为重视细胞表面成分在肿瘤形成过程中的变化。许多文章报道肿瘤细胞膜的组成、结构、功能与正常者有明显的差别。 哺乳动物的肝凝集素(HL)也是一种细胞膜成分。它专一性地与末端为β-半乳糖苷的糖蛋白及糖脂结合。在体内它介导许多去唾液酸糖蛋白的内香,然后在肝细胞内降解。肝凝集素也可能参与肝细胞间的粘着,并与肿瘤肝转移的形成相关。     

鸟氨酸氨基甲酰移换酶的研究 Ⅱ.四氯化碳中毒及喂3’-甲基-4-二甲基氨基偶氮苯大白鼠肝脏的鸟氨酸氨基甲酰移换酶活力

(1)本文报导大白鼠经四氯化碳中毒及用3′-甲基-4-二甲基氨基偶氮苯诱发肝癌过程中肝脏鸟氨酸氨基甲酰移换酶活力的变化。(2)四氯化碳中毒及摄食3′-Me-DAB大白鼠,均可导致动物肝脏的OCT活力显著降低,后者比前者的影响更为显著,而两者的综合处理又比单独使用四氯化碳或3′-Me-DAB为显著。(3)停止摄取3′-Me-DAB后,酶的活力似有恢复上升的趋势。(4)对3′-Me-DAB引起动物肝脏OCT活力降低的机制作了讨论。     

肝癌的生化研究 Ⅰ.3’-甲基-4-二甲基氨基偶氮苯引起大白鼠肝癌癌变过程中核酸嘧啶化合物代谢酶系的变化

肿瘤组织的核酸代谢和正常组织有所不同,已有不少工作证实,Skipper,Bennett等观察到肿瘤组织利用甘氨酸、甲酸等小分子化合物合成核酸嘌呤的能力较正常组织强,而利用嘌呤碱、嘌呤核苷及嘌呤核苷酸的能力则不如正常组织。de Lamirande等发现核酸嘌呤化合物代谢酶系活力在大白鼠Novikoff肝癌组织和正常组织中有明显区别,如黄嘌呤氧化酶和尿酸酶活力在肿瘤组织中完全不能测到。但有关核酸嘧啶化合物在癌组织中代谢的报导则较少,Reichard和Skold曾报告艾氏腹水癌尿嘧啶核苷磷酸     

高灵敏显色降解试剂4-N，N-二甲氨基偶氮苯-4′-异硫氰酸酯(DABITC)在蛋白质顺序分析中的应用

一、序言 Edman降解是蛋白质顺序分析最有效的方法。它由三步反应组成,首先,异硫氰酸苯酯(PITC)在碱性pH下与肽或蛋白质的N-端氨基酸反应生成苯基氨荒酰(PTC)衍生物,然后在酸性pH下生成比原先的肽少一个氨基酸的肽与苯基噻唑啉酮(PTZ)衍生物,后者在酸性     

癌变过程中酪氨酸转氨酶(TAT)和5′-核苷磷酸二酯酶(5′-NPDase)的变化

本文测定了大鼠及人体胚胎发育和癌变过程中TAT和5′-NPDase活力变化,所得结果表明: (一)5′-NPDase快速同工酶区带在甲胎蛋白(AFP)阴性肝癌患者血清中阳性率较高。(二)TAT,5′-NPDase和AFP也许可作为研究癌、胚以及肝癌癌变过程中基因表达的三个互补生化指标。     

抗肿瘤活性化合物谷氨酰胺衍生物研究 Ⅰ.3-(p-甲基苯磺酰)氨基-2,6-哌啶二酮的合成及其晶体结构和分子结构研究

将谷氨酰胺与对甲苯磺酰氯缩合,经加热脱水环合,合成了抗瘤酮A10的类似物3—(p-甲基苯磺酰)氨基-2,6-哌啶二酮。采用X-射线单晶衍射研究了它的晶体和分子结构。     

二乙基亚硝胺(DENA)诱发大鼠肝癌过程甲胎蛋白变化的定性和定量观察

在我国,甲胎蛋白已广泛应用于原发性肝细胞癌的诊断(上海市肿瘤防治研究协作组,1973)。为了建立一株甲胎蛋白阳性的肝癌大鼠模型,我们于1973—1974年用DENA诱发大鼠肝癌,并对诱癌过程的甲胎蛋白变化作了定性和定量观察,本文将主要结果作一简报。至于所诱发的甲脂蛋白阳性肝癌已在我所建成一株移植型大鼠肝癌(强家模等,1978)。     

白木香3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶(AsHMGS)基因的克隆与表达分析

以白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg)茎cDNA为模板,采用反转录PCR及RACE技术分离得到HMGS基因cDNA全长。序列分析表明该基因序列全长1 831 bp,共编码465个氨基酸,推导的蛋白质分子量为51.4 kD,理论等电点6.25,命名为AsHMGS。推导的AsHMGS蛋白质序列具有植物HMGS酶的典型结构,并预测出HMGS酶的活性中心。系统进化树分析表明,AsHMGS蛋白与拟南芥、琴叶拟南芥、芥菜的相应蛋白相似度最高,其次为人参、喜树和野茶树。荧光定量PCR结果显示,茉莉酸甲酯能诱导白木香AsHMGS的表达。     

免疫酶技术及其对副流感病毒(仙台株)抗原的定位观察

采用辣根过氧化物酶标记抗体的方法,对副流感病毒(仙台株)抗原在组织细胞内的繁殖部位进行了光学显微镜和电子显微镜的观察。在受病毒感染的小鼠肺切片上,多数细支气管上皮细胞及部分肺泡细胞胞浆内呈明显阳性;在体外实验中,受感染的单层人胚肾细胞的胞桨膜、胞浆膜表面的病毒颗粒以及部分胞浆均可见阳性反应。此外,本文还对结果的特异性,酶标记技术中抗原的固定,酶与免疫球蛋白的结合以及酶标记抗体进入组织细胞等方法学问题进行了一些探讨。     

4-N，N-二甲胺基偶氮苯-4′-异硫氰酸酯(DABITC)用于多肽微量氨基酸顺序的测定

前文曾介绍一种高灵敏度DABITC方法,今已成功地应用于微量多肽激素的氨基酸顺序测定,所取样品为猪胰岛素-B链、促黄体生成素释放激素及未知顺序的蝮蛇毒舒缓激肽增强因子等。样品量仅为8—30毫微克分子(nmol)。一、实验部分 1.材料和试剂猪胰岛素-B链,促黄体生成素释放激素(LRH)分别由本所胰岛素组和东风厂提供,蝮蛇毒舒缓激肽增强因子,由本实验室自制。DABITC试剂本所东风厂产品,化学试剂和溶剂的纯度,均为分析纯,并经重新处理聚酰胺薄膜为黄岩实验化工厂出品。 2.实验操作多肽激素(8—30nmol)置于1×5厘米刻度离心管,使溶于100微升50％v/v吡啶溶液,用50微升DABITC溶液(0.6毫克DABITC溶于260微升吡啶溶液)充氮气1分钟。在52℃水浴保温     

应用于DNA分子转移和分子杂交实验的二偶氮苄氧甲基(DBM)-滤纸性质的研究

DBM-滤纸与硝基纤维素一样,近年来广泛地用作DNA或RNA分子的载体来进行分子杂交实验。但是在进行小分子DNA的分子和杂交实验中,以及需要用几种不同的分子探针在同一个DNA载体上反复地进行分子杂交时,DBM-滤纸显示了更大的优越性。用小球菌核酸酶水解鸡红血球细胞核,抽提出DNA并用[~(32)P-γ]ATP和T_4多核苷酸激酶制备成5’末端标记的DNA分子。经2%琼脂糖电泳,DNA分子按染色质的核小体结构的一系列不同长度(从单体至五聚体)的片段被分开。胶经过NaOH和NaOAC处理,将DNA分子转移到DBM-滤纸上。此滤纸再经NaOH和H_2O处理,分别测定从单体至五聚体的不同分子量DNA的转移效率。结果指出,电泳胶经过转移前处理,单体和二聚体的损失分别为7%和5%,三聚体至五聚体没有损失。转移后仍留在电泳胶上的DNA为2—3%。经过转移后处理的DBM-滤纸所结合的DNA分子,从单体到五聚体分别为89%,91%,96%,94%和94%。因此,在所分析的分子量范围内,DNA分子基本上定量地被转移。用~(32)P标记的SV40 DNA作为探针,检测DNA碱变性与分子杂交效率的关系。结果指出,分子杂交之前,DBM-滤纸经NaOH的处理是必须的,但DNA被转移到DBM-滤纸之前,对电泳胶的碱处理步骤是可以省略的。     

(2R,3S,4S)-2-(N,N-二乙氨基)甲酰氧基-3-苯基-4-苯甲酰基-N-甲基-γ-内酰胺的合成及工艺研究

目的：通过对黄皮酰胺全合成中间体（2R,3S,4S）-2-羟基-3-苯基-4-苯甲酰基-N-甲基-γ-内酰胺（化合物A）2位羟基的酯化,提高脂水分配系数（kP）,考察对谷丙转氨酶活性的影响。方法：以化合物A为原料,通过酰化反应合成（2R,3S,4S）-2-（N,N-二乙氨基）甲酰氧基-3-苯基-4-苯甲酰基-N-甲基-γ-内酰胺（化合物B）,重点考察了摩尔比、反应温度、反应时间等条件对反应的影响。化合物B结构已经元素分析、红外光谱、质谱及核磁共振氢谱确证。结果：化合物A和酰化剂以摩尔比2：3,在160℃下反应1h,目标化合物B。收率78．42％。结论：本合成路线及具体反应方法,具有试剂廉价易得、反应条件温和、后处理简便等优点,是一种较为实用的合成方法。     

(2R,3S,4S)-2-(N,N-二乙氨基)甲酰氧基-3-苯基-4-苯甲酰基-N-甲基-Y-内酰胺的合成及工艺研究

目的:通过对黄皮酰胺全合成中间体(2R,3s,4S)-2-羟基-3-苯基-4-苯甲酰基-N-甲基-Y-内酰胺(化合物A)2位羟基的酯化,提高脂水分配系数(1gP),考察对谷丙转氨酶活性的影响。方法:以化合物A为原料,通过酰化反应合成(2R,3S,4S)-2-(N,N-二乙氨基)甲酰氧基-3-苯基-4-苯甲酰基-N-甲基-Y-内酰胺(化合物B),重点考察了摩尔比、反应温度、反应时间等条件对反应的影响。化合物B结构已经元素分析、红外光谱、质谱及核磁共振氢谱确证。结果:化合物A和酰化剂以摩尔比2:3,在160℃下反应1h,目标化合物B,收率78．42%。结论:本合成路线及具体反应方法,具有试剂廉价易得、反应条件温和、后处理简便等优点,是一种较为实用的合成方法。     

以Hsp90为靶点的4-(4-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)姜黄素抗肿瘤活性研究

合成4-(4-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)姜黄素(C085),研究其体外抗肿瘤活性和抑制Hsp90作用。以香草醛和姜黄素为原料,微波条件下Knovenagel缩合反应合成了4-(4-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)姜黄素(C085)。以姜黄素为对照,MTT法考察目标化合物对人乳腺癌细胞SKBr3、人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562、人急性髓系白血病细胞株HL-60、人肝肿瘤细胞株Hep G2、小鼠黑色素瘤细胞株B-16、人结肠癌细胞株SW480、人胰腺癌细胞株Bxpc-3、人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y、人胃癌细胞株MGC80-3的抑制活性。对上述细胞株的IC50值依次为0.51、1.26、2.90、0.81、1.77、1.31、8.22、1.93、7.41μmol/L,对多种肿瘤细胞抑制活性明显强于Cur。Western Blot结果表明C085明显下调Hsp90的客户蛋白Her2和AKT的表达水平。分子对接分析也支持C085是Hsp90抑制剂。     

鼠肝色氨酸吡咯酶诱导生成机制的研究 Ⅲ.酶的诱导过程中~(32)P快速标记RNA的变化

本实验观察到在大鼠肝色氨酸吡咯酶的激素和底物诱导过程中都有~(32)P快速标记RNA的出现,它们在氢可地松诱导2小时和在色氨酸诱导3.5小时的比放射性较对照RNA者分别增加100%和60%左右。~(32)P长期标记高聚RNA的变化与快速标记RNA者显然不同,在激素诱导4～6小时和在底物诱导10小时的比放射性始有增高。激素和底物诱导后不同时间提取的~(32)P快速标记RNA的放射性动态变化与其相应RNA诱导TP活性的动态变化呈平行关系,而从~(32)P长期标记活性最高时提取的高聚RNA刺激TP的活力与正常鼠肝RNA刺激TP的活力无显著差别,激素和底物诱导过程中~(32)P快速标记RNA的生成为放线菌素K_2所抑制。去肾上腺大鼠底物诱导2小时和3.5小时也出现~(32)P快速标记RNA,其生成也为放线菌素K_2所抑制。自去肾上腺大鼠底物诱导3.5小时提取的RNA对TP的诱导活性高于相应的正常鼠肝RNA。以上结果说明,在TP的激素和底物诱导过程中所生成的具有体内诱导TP功能的高聚RNA,可能是一种“特异的mRNA”。     

苯二氮(艹卓)受体的内源性配体——次黄嘌呤核苷和乙烯3-羧基β-咔啉

次黄嘌呤核苷和乙烯3-羧基β-咔啉(B-CCE)是哺乳动物和人脑内存在的化合物,体外实验均表现竞争性抑制~3H-安定同苯二氮(艹卓)(BDZ)受体结合的特性,而对其它已知的神经递质受体无影响。次黄嘌呤核苷具有BDZ的药理作用,在腹膜注射戊四唑前一分钟,将次黄嘌呤核苷注入脑室,可使成四唑引起惊厥的潜伏期延长三倍。β-CCE可拮抗BDZ的部分药理作用,降低荷包牡丹碱诱发鼠痉挛的阈值,抵消安定降低小脑cGMP的作用。     

高选择性不对称还原N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺的重组氧化还原酶催化性质及其酶促转化

【目的】通过表达多种重组立体选择性氧化还原酶,分析其催化不对称还原N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DKTP)的性质,从而构建酶促合成(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DHTP)的反应体系。【方法】基于已有立体选择性氧化还原酶重组大肠杆菌,通过Ni离子亲和层析法纯化得到重组氧化还原酶,以DKTP为底物,考察不同重组氧化还原酶对DKTP的催化活性和选择性,进一步对高选择性酶促合成(S)-DHTP的重组酶CR2进行性质分析,并考察其在最适条件下不对称还原DKTP的过程。【结果】筛选获得产物构型为(S)-型的催化活性最高的酶为CR2,该酶米氏常数Km为0.135 mmol/L,kcat/Km为3.689 L/(mmol·s),最适p H 8.4(0.1 mol/L三乙醇胺缓冲液),最适反应温度为35°C,在10-45°C条件下和p H 7.5-8.5较为稳定,Zn2+离子对酶活有促进作用。CR2催化DKTP不对称还原反应6 h后,DHTP的产率达92.1%、光学纯度达99.9%。【结论】基于活性和选择性分析,获得不对称还原DKTP的目标酶CR2,其催化特性有利于高立体选择性还原DKTP生成度洛西汀中间体(S)-DHTP,从而为进一步提高酶促不对称还原DKTP的转化效率提供研究基础。