重组溶葡萄球菌酶成品蛋白含量测定方法的建立

重组溶葡萄球菌酶(recombinant lysostaphin,rLysn)对金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌活性,是一种新型抗菌药物,含有该酶的药用制剂在临床上能有效控制金葡菌感染。为在rLysn成品中增加蛋白含量测定以控制制剂的质量,建立了成品中rLysn蛋白含量测定方法,并进行验证。采用体积排阻高效液相色谱法(size exclusion high performance liquid chromatograph,SEHPLC)测定rLysn理化对照品及成品蛋白质含量。色谱柱:TSK gel 2000SWXL(7.8 mm×30 cm,5μm);流动相:20 mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)+0.3 mol/L NaCl;流速:0.5 mL/min;柱温:25℃;检测波长:280 nm。结果显示,rLysn在2-32μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2=1);低、中、高3种浓度的rLysn理化对照品空白加标平均回收率为102.9%,成品加标平均回收率为102.1%;3种不同上样量在不同时间内测定,蛋白含量RSD1%;每隔1 h测定同一支供试品溶液,蛋白含量RSD为0.98%;同一批供试品溶液取6份进样,蛋白含量RSD为1.71%。实验结果表明,采用SE-HPLC方法简便,准确性、精密度、稳定性及重复性好,可用于rLysn成品蛋白质含量的测定。     

用高效液相色谱测定重组人尿激酶原制剂的蛋白含量

目的:用RP-HPLC方法对注射用重组人尿激酶原制剂蛋白含量进行定量分析。方法:用反相C18柱、0.1%TFA水溶液与0.1%乙腈进行梯度洗脱,280nm波长紫外检测器监测;以重组人尿激酶原同质标准品作为对照品,根据进样量和相应的峰面积建立标准曲线方程,将待测定样品的峰面积代入标准曲线方程,可测得蛋白含量。结果:按照方法学验证要求对此方法进行了专属性、检测限、定量限、线形、精密度(重复性、中间精密度)、准确度(回收率)考察,线性范围为9～27μg,回收率在97%以上,RSD2.0%,完全满足对制剂蛋白的定量需求。结论:本方法准确,适用于注射用重组人尿激酶原成品制剂蛋白定量测定。     

HPLC法测定藜豆中左旋多巴的含量

采用HPLC法建立测定藜豆中左旋多巴含量的方法。色谱柱为岛津C-18甲基硅烷柱(250 min×4.6mm,5μm),流动相为甲醇:0.1 mol／L醋酸溶液(25:75,v／v),以硫唑嘌呤为内标物,检测波长280 nm,流速1.0 mL／min,柱温为室温,供试品的前处理方法为微波辅助提取法。结果表明,该方法准确度高,线性关系好,重现性好,平均加样回收率为97.34％,RSD 1.01％(n=5),结果满意。     

HPLC梯度洗脱同时测定牛蒡子液体制剂中牛蒡子苷和牛蒡子苷元的含量

目的:建立一种同时测定牛蒡子液体制剂中牛蒡子苷和牛蒡子苷元含量的HPLC梯度洗脱法。方法:采用Dionex Summit高效液相色谱系统,ODS C18柱(4.6mm×250 mm,5μm),乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0ml/min,测定波长280nm,柱温30℃下对牛蒡子液体制剂中牛蒡子苷和牛蒡子苷元进行含量测定。结果:牛蒡子苷进样浓度在0.098～0.98mg/ml、牛蒡子苷元进样浓度在0.0304～0.304mg/ml范围内线性关系良好(r=0.9997、r=0.9995),平均回收率分别为100.80%,RSD为1.9%(n=6)和98.6%,RSD为2.3%(n=6)。结论:该方法准确可靠、重现性好,可用于牛蒡子液体制剂的含量测定。     

HPLC同时测定龙胆泻肝制剂中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量

目的:建立同时测定龙胆泻肝制剂中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素4种有效成分含量的HPLC分析方法.方法:色谱柱:Dikma Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈- 0.05％磷酸溶液,梯度洗脱;波长:278 nm.结果:黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的线性范围分别为0.418～4.18μg(r=0.9999),0.2～2μg(r=0.9999),0.233～2.33 μg(r=0.9999),0.215～2.15(r=0.9998).2种制剂4种成分的平均回收率分别为98.10％ (RSD=0.59％),98.05％( RSD=1.37％),98.88％( RSD=1.44％),98.10％( RSD =0.59％)和98.40％ (RSD=0.46％),99.33％ (RSD=1.74％),99.09％( RSD=1.22％),98.82％(RSD=1.42％).结论:该方法快速、简便、准确、具有良好的重复性和回收率,可作为龙胆泻肝制剂中这4种成分的含量测定方法.     

PEG化重组尿酸氧化酶蛋白含量测定方法研究

目的:以未修饰的原型蛋白为对照品,建立准确测定2种聚乙二醇化重组尿酸氧化酶(PEG-rUOX)含量的方法。方法:以原型蛋白rUOX为对照品,利用凝胶色谱法测定PEG-rUOX中的蛋白含量,通过详细的专属性、精密度、准确性等方法学考察,建立该方法。色谱条件:采用TSK Gel 5000PWxl(300 mm×7.8 mm)凝胶色谱柱,以含0.15mol/L氯化钠的0.05 mol/L的Tris-HCl溶液(pH9.0)为流动相,流速0.5 mL/min,柱温为室温,检测波长280 nm。结果:在280 nm下,2种rUOX在200~1000μg/mL浓度范围内线性关系良好(r2分别为1和0.9999),其高、中、低平均回收率均较高,为98.33%~99.96%。结论:本方法专属性、精密度和准确性良好,可作为PEG-rUOX的含量测定方法。     

反相高效液相色谱法检测白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白纯度

目的 建立反相高效液相色谱法(reverse phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)检测白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白纯度。方法 利用Agilent AdvanceBio RP-mAb SB-C8(100 mm×2.1 mm)分析柱和Agilent1260高效液相色谱系统,以含0.1%三氟乙酸水溶液-异丙醇(98∶2)为流动相A,以含0.1%三氟乙酸乙腈溶液为流动相B,进行梯度洗脱,体积流速为0.5 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为65℃,进样体积为10μL,采用面积归一法检测CRM197蛋白纯度,并对方法的适用性、专属性、重复性、中间精密度、线性、灵敏度和耐用性指标进行考察。用建立的方法检测CRM197蛋白酸处理供试品溶液、碱处理供试品溶液及3批原液的纯度。结果 建立的方法系统适用性良好;专属性验证表明空白溶液在目标峰积分范围内无干扰峰,热处理CRM197蛋白目标峰与其他杂质峰分离度>1.5;6次重复进样目标峰面积相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为...     

黄芪桂枝五物颗粒中芍药苷的含量测定

目的:建立一个稳定可靠分离度好的方法测定黄芪桂枝五物颗粒中芍药苷的含量。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:YMC-Pack ODS-A(250×4.6mm,5μ);流动相:以乙腈—0.1%磷酸溶液(14:86)为流动相;检测波长:230nm;流速为1.0ml/min;柱温为30℃。结果:芍药苷的进样量在0.120μg~1.200μg范围内有良好的线性关系,平均回收率为99.22%,RSD为0.89%。建立了高效液相色谱法测定黄芪桂枝五物颗粒的含量的方法,该方法准确、可靠、分离度好。     

高效液相色谱法测定甜菊糖苷中甜菊醇的含量

建立高效液相色谱法测定甜菊糖苷中甜菊醇的含量。色谱条件:色谱柱为Phenomenex C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水(50∶50);流速1.0 mL/min;检测波长213 nm;柱温30℃;进样量10μL。线性范围为1.046μg/mL~52.3μg/mL(r=0.9997),加标平均回收率为96.60%,RSD为0.51%(n=6)。本方法准确度高、精密度高、重复性好、简捷易操作,可以作为甜菊糖苷中甜菊醇含量的测定方法。     

HPLC测定7种龙胆科植物花中龙胆苦苷与獐牙菜苦苷的含量

目的:建立7种龙胆花中龙胆苦苷和獐牙菜苦苷含量测定的HPLC方法。方法:采用微波辅助动态回流法进行提取,色谱条件:Fusion-RP 80 A C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脱(0~25 min:15%~30%);流速:1 mL/min;柱温:30℃;检测波长240 nm。结果:7种龙胆花中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的色谱峰与共存组分完全达到基线分离,线性范围分别为0.105~0.945μg(r=0.999 9),0.3~0.7μg(r=0.999 9),平均加样回收率分别为97.8%(RSD=1.02%),98.9%(RSD=1.51%)。结论:所建立的方法测定快速,结果准确可靠。     

椒莪合剂的质量标准研究

目的:检测椒莪合剂中主要化学成分含量并制订其质量标准。方法:1采用TLC法对制剂中莪术醇、牻牛儿酮、莪术二酮及α-亚麻酸进行鉴别;2采用HPLC法,以Intersustain C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm),检测波长为216 nm,以乙腈-水作为流动相运用梯度洗脱法分别测定制剂中牻牛儿酮、呋喃二烯的含量;以乙腈-1%醋酸溶液(90:10)为流动相,Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5.0μm),检测波长为205 nm,测定制剂中α-亚麻酸的含量。结果:1制剂中牻牛儿酮、莪术二酮及α-亚麻酸的薄层鉴别具有较好的专属性;2牻牛儿酮、呋喃二烯及α-亚麻酸的线性范围与相关系数(r)分别为0.0060~0.1200 mg·m L-1、0.9995,0.0120~0.2400 mg·g-1、0.9995,6.90~115.00 mg·g-1、0.9998;3牻牛儿酮、呋喃二烯及α-亚麻酸平均加样回收率与RSD分别为98.65%、0.65%,99.02%、0.55%,98.49%、0.67%;43批制剂中牻牛儿酮、呋喃二烯及α-亚麻酸的平均含量(mg·g-1)分别为18.42、53.87和277.10 mg·g-1,RSD(%)分别为1.18、0.68和1.37%。结论:所建立的制剂中牻牛儿酮、呋喃二烯及α-亚麻酸检测方法科学、合理,可用于其质量控制。     

高效液相色谱法测定1,25- 二羟基维生素D2纳米乳注射液的含量

目的:建立高效液相色谱法测定1,25-二羟基维生素D_2纳米乳注射液含量。方法:采用C18-STⅡ色谱柱(4.6×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水=85:15(V/V);流速:1.5 m L/min;检测波长:274 nm;温度:室温;进样量:200μL。结果:该方法专属性好,平均回收率99.96%(RSD为0.63%,n=9);溶液在冷藏(2~6℃)保存24 h稳定(RSD=0.98%,n=7);在0.06μg/m L~4.0μg/m L范围内线性关系良好,其回归方程为:Y=201098 X-8412.5(R2=0.9998,n=9)。结论:该方法简便、快捷、灵敏度高、专属性强,可用于该注射液的含量测定。     

赖氨葡锌颗粒中盐酸赖氨酸含量测定方法改进

目的:建立HPLC法测定赖氨葡锌颗粒中盐酸赖氨酸含量。方法:色谱柱为μBondpark C18柱,以甲醇:0.05mol/L醋酸钠和醋酸溶液(65:35)作为流动相,流速为1.0ml.min-1,检测波长为360nm。结果:盐酸赖氨酸在2.4~24.6μg/ml的浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.28%,RSD=1.0%(n=6)。结论:建立的方法简便、快速、重现性好、结果准确,可用于赖氨酸的含量测定。     

天花粉中总三萜皂苷的含量分析

目的:对天花粉中总三萜皂苷含量进行测定,为天花粉质量评价提供依据。方法:选用熊果酸为对照品,5%香草醛-冰醋酸和高氯酸为显色剂,以紫外分光光度法测定天花粉中总三萜皂苷的含量。结果:标品在16～48μg范围内有良好的线性关系(r=0.9905)。样品在10～40min内稳定,加样回收率为97.22%,RSD=1.59。结论:该方法操作简便,快速,灵敏度高和重复性好,可用于天花粉及其相关产品的质量控制。     

HPLC法测定不同产地僵蚕中草酸铵含量

目的:比较不同产地僵蚕和炒僵蚕中草酸铵的含量.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱务件为色谱柱:Diamonsil 5μC18250× 4.6mm Dikma;流动相:磷酸氢二铵水溶液(5 g·L-1,pH 5.30);流速:0.5mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:214nm.结果:草酸铵在15.0～150.0μg·ml-1 范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,r=0.998(n=6),平均加样回收率为97.07%,RSD=2.67%(n=9).结论:炮制僵蚕中草酸铵的含量普遍低于僵蚕生品;僵蚕生品中草酸铵的含量2.21%～5.82%,炮制品2.31%～5.78%.     

反相高效液相色谱法测定不同品种花椒中芦丁和槲皮素的含量

目的:建立RP-HPLC测定花椒中芦丁与槲皮素含量的方法,并对不同种花椒的中芦丁与槲皮素含量进行测定与比较。方法:Zorbax Eclipse C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相∶甲醇-0.4%磷酸(50∶50);流速1 mL/min;检测波长:360 nm;柱温25℃。结果:芦丁在0.25~5.0μg,r=0.999 9峰面积与质量浓度呈良好的线性关系;平均回收率为99.1%,RSD为4.3%(n=3)。槲皮素在0.25~0.5μg,r=0.999 9峰面积与质量浓度呈良好的线性关系;平均回收率为111.2%,RSD为5.1%(n=3)。结论:该方法可用于花椒中芦丁和槲皮素的测定。测定结果表明,韩城红花椒中芦丁含量最高,茂汉红花椒次之,四川青花椒较少,云南青花椒最低。槲皮素在韩城红花椒中含量较高,在其他三种花椒中差别不大。     

复方黄连素片中盐酸小檗碱含量测定

目的：建立测试黄连素片中盐酸小檗碱含量的高效液相方法,并对此方法进行系统的方法学验证,以确保应用该方法测试的结果准确、可靠。方法：采用色谱柱：Agilent TC-C18柱（4．6 mm ×150 mm,5μm,Agilent,美国）,流动相：乙腈－0．05 mol／L磷酸二氢钾溶液（45∶55,含5％的0．05 mol／L庚烷磺酸钠溶液）,检测波长为265 nm。结果：盐酸小檗碱在2．5～80μg／mL范围内线性关系良好,得到线性回归方程为Y＝421 ．5X＋17．32,相关系数为0．9997（n＝6）;低、中、高浓度批内精密度的RSD值分别为0．30％、0．58％、0．30％,批间精密度的RSD为0．80％;重复性RSD为0．27％;低、中、高浓度的加样回收率分别为99．66％、99．88％、99．98％;供试品溶液室温放置8h稳定,RSD为0．41％。结论：本方法测定黄连素片中盐酸小檗碱的含量准确、可靠,操作简单、用时短,可用于黄连素片中盐酸小檗碱的含量测定。     

化妆品中的甲硝唑、氧氟沙星与环丙沙星HPLC检测法

目的:建立反相高效液相色谱同时测定化妆品中的甲硝唑、氧氟沙星与环丙沙星方法.方法:以十八炕基硅烷键合硅胶为填充剂,以0.01mol/L四丁基溴化铵溶液(三乙胺调pH至3.0)-甲醇(88:12)为流动相,柱温30℃,流速1.0ml/min.315nm、293nm、277 nm分别作为甲硝唑、氧氟沙星、环丙沙星含量测定的检测波长.样品先用乙腈-水(0.1%甲酸)(体积比5:95)溶液提取,经正己烷脱脂后测定.结果:甲硝唑在2.02～50.59μg/ml,氧氟沙星在2.03～50.69μ g/ml,环丙沙星在2.02～50.45μg/ml范围内与峰面积线性关系良好,r分别为0.9999,0.9998和0.9999.10,25,40μ/g/ml三个浓度水平甲硝唑、氧氟沙星和环丙沙星的平均回收率为85.88%～97.20%,RSD为1.11%～6.10%;检测限均为1ng.结论:本法快速、准确、可用于化妆品中擅自添加的甲硝唑、氧氟沙星与环丙沙星的筛查及含量测定.     

高效液相色谱法测定西咪替丁片的含量

目的建立HPLC测定西咪替丁片含量的方法。方法固定相:sinochrom ODS-BP 5μm(4.6 mm×250 mm);流动相:甲醇∶水∶三乙胺(80∶20∶0.01),流量为1.0 ml/min;检测波长:218nm,进样量10μl。结果对照品溶液在0.25~2.0μg/ml范围内呈良好的线性关系,相关系数r=0.9996(n=6),平均回收率为99.23%(n=6),RSD为0.4%。结论本法快速、简便、准确、重复性好。     

HPLC法测定甘草酸和甘草苷的含量

目的:建立以HPLC法同时测定甘草中甘草酸和甘草苷含量的方法.方法:采用C18柱(4.6mmx15cm,5μm)为分析柱;以乙腈-1%醋酸溶液为流动相;流速为0.6ml·min-1;柱温25℃;采用外表法定量测定.结果表明甘草酸在4.16-28.0μg/ml范围内,回归方程为Y=10562.8X+30963(r=0.9999);甘草苷在13.0-23.4μg/ml范围内,回归方程为Y=12857.4X+16437(r=0.9997),平均加样回收率均大于96.08%,日内、日间的RSD值分别小于1.41%和1.85%.结论本方法操作简单、准确、快速、重现性好,其它组分干扰少,可用于甘草酸和甘草苷的含量测定.