M16添加牛磺酸和EDTA支持昆明白小鼠体外受精并发育至囊胚

在以往研究工作的基础上证明了通过添加2.5mmol/L的牛磺酸和0.1mmol/L的EDTA至M16培养液中,可支持昆明白小鼠的体外受精（IVF）,并支持受精卵突破2－细胞阻滞发育至囊胚期。本研究进一步证明了牛磺酸和EDTA在昆明小鼠早期胚胎发育和克服2－细胞阻滞中起关键作用。 Abstract:The results of our early experiments show that the 2-cell block can be overcome by culturing zygote in modified M16 ,modified CZB and TE medium.Our research shows that the taurine and EDTA play key role in overcoming 2-cell block in Kunming mouse.The results show that the addition of taurine and EDTA to M16 medium can support the IVF and develoment to blastocyst in vitro in Kunming strain mice.This is the first report that M16 medium added with taurine and EDTA can be used in both IVF and culture medium to overcome the 2-cell block of embryo development in Kunming strain mouse.     

"生存还是毁灭",发育还是阻滞--小鼠早胚体外发育2-细胞阻滞产生机制初析

在体外培养条件下,小鼠受精卵往往经一次分裂后就停滞在２－细胞,不能完成到达囊胚的后续发育过程,称作２－细胞阻滞。氧自由基伤害、培养液成分不平衡等外界因素都能引起阻滞。小鼠的２－细胞阻滞现象受细胞质内母型物质制约,具有品系依赖性。在阻滞品系小鼠胚胎的细胞质内可能缺乏某些重要的蛋白因子,在无外源信号的培养体系内不能继续分裂。发生阻滞的胚胎细胞内ＭＰＦ前体物虽然储备充足,但因无法去磷酸化激活而最终导致发     

小鼠2—细胞期经电融合后的早期胚胎发育

小鼠２－细胞期经电融合后的早期胚胎发育小鼠,电融合,细胞数,核型,四倍体胚胎小鼠２细胞期经电融合后的早期胚胎发育ＥＡＲＬＹＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴＯＦＭＯＵＳＥＥＭＢＲＹＯＳＰＲＯＤＵＣＥＤＢＹＥＬＥＣＴＲＯＦＵＳＩＯＮＡＴ２ＣＥＬＬＳＴＡＧＥ关键...     

褪黑素对小鼠2-细胞期胚胎发育的影响

目的：研究褪黑素对小鼠2-细胞期胚胎发育的影响。方法：在培养液中添加不同浓度褪黑素,在不同的作用时间点,观察并记录小鼠胚胎囊胚率、孵出率,研究其变化情况。结果：不同浓度褪黑素对小鼠2-细胞期胚胎存在双向作用,在10-13-10-5M之间促进细胞囊胚形成和孵出,在10-9M时促进效应达到最高,而在10-3M时则呈现出一定的毒性作用。结论：褪黑素对小鼠胚胎发育影响与褪黑素浓度密切相关。     

褪黑素对小鼠2- 细胞期胚胎发育的影响

目的:研究褪黑素对小鼠2-细胞期胚胎发育的影响。方法:在培养液中添加不同浓度褪黑素,在不同的作用时间点,观察并记录小鼠胚胎囊胚率、孵出率,研究其变化情况。结果:不同浓度褪黑素对小鼠2-细胞期胚胎存在双向作用,在10-13-10-5M之间促进细胞囊胚形成和孵出,在10-9M时促进效应达到最高,而在10-3M时则呈现出一定的毒性作用。结论:褪黑素对小鼠胚胎发育影响与褪黑素浓度密切相关。     

昆明白小鼠1细胞胚胎体外培养系统的研究

研究发现在有或者没有磷酸盐的条件下,葡萄糖均抑制昆明白小鼠ｌ－４细胞期胚胎的体外发 育。在不含葡萄糖和磷酸盐的ＨＥＣＭ－ｌ中,桑椹率为４０．０５％（７４／１６８）,而对照Ｇ－ＨＥＣＭ－１仅为 ８．１４％（７／８６）;不含葡萄糖含有磷酸盐的ＣＺＢ中,桑椹率为６７．１１％（９３／１５２）,而对照ＴＡＬＰ仅 ６· ６７％（６／９０）。用不含葡萄糖而含有１． ０ｍｍｏ１／Ｌ谷氨酸肢和０． １１ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ的ＣＺＢ液,与兔输 卵管上皮单层培养细胞（ＲＯＥＣ）协同培养小鼠１细胞胚,７３．３３％（１１０／１５０）胚胎发育至桑椹胚, 但没有观察到囊胚形成、用上述ＣＺＨＲＯＥＣ系统培养小鼠１细胞胚４８小时（３－４细胞）,再移入 ＴＣＭ１９９＋１０％ＦＣＳ＋ＲＯＥＣ系统,有７６．７４％（６７／８６）胚胎发育至桑椹胚,９６／小时后,４０．７０％ （３５／８６）发育至囊胚。     

两种2-细胞鼠胚体外培养方法比较

目的应用鼠胚质控中的小鼠胚胎体外培养模型,探讨两种胚胎培养方式（四孔皿与微滴法）在单胚观察时间上的差异以及对2-细胞鼠胚体外发育潜能的影响。方法取6-8周龄的昆明白雌性小鼠。采用HMG10IU促排卵,48 h后注射HCG 10IU促卵泡成熟,取形态正常的2-细胞鼠胚。每5-10个胚胎培养在含500μL培养基的四孔皿中（A组）,或单个胚胎接种在含50μL的培养微滴中（B组）。培养后,每隔24 h在倒置显微镜下观察一次,计算单胚观察时间,并检测24 h时的≥4细胞胚形成率、48 h的融合胚形成率7、2 h的囊胚与扩张囊胚形成率、96 h囊胚孵化率。结果两种培养方式于同一试验条件下分别试验5次,A组培养83个胚胎,B组培养69个2-细胞鼠胚。在每一个观察点上,微滴培养的单胚观察时间远超过四孔皿培养（P〈0.001）。但两组各时间点的胚胎发育率相似,无显著差异（P〉0.05）。结论尽管微滴单胚培养方式的胚胎暴露培养箱外时间长,但与四孔皿多胚培养方式比较,两者间2-细胞鼠胚的体外发育潜能相似。     

M16添加硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ无法克服昆明小鼠早胚体外发育2-细胞阻滞

目的观察硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ(Peroxiredoxin Ⅱ,PrxII)是否可以克服昆明(Kunming)小鼠早胚体外发育2-细胞阻滞。方法取昆明小鼠1-细胞胚置于含PrxII蛋白的M16培养液中培养,观察PrxII对昆明小鼠早胚发育潜能和2-细胞胚内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平的影响;同时比较昆明和B6C3F1小鼠1-细胞胚在M16中各自的发育情况;激光扫描共聚焦显微镜分别检测比较昆明与B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平以及昆明小鼠体外培养与体内发育2-细胞胚内ROS水平。结果M16培养液中添加PrxII蛋白(1nmol/L和100nMol/L)可以明显降低昆明小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平(P<0.05),但不能克服昆明小鼠体外发育2-细胞阻滞;昆明小鼠1-细胞胚在M16中培养存在2-细胞阻滞现象,而B6C3F1小鼠无2-细胞阻滞现象;昆明小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平显著低于体内发育2-细胞胚(P<0.05),亦略低于B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平(P>0.05)。结论M16培养液中添加PrxII可以明显降低2-细胞胚...     

昆明小鼠和DBA/2小鼠尾静脉注射L1210细胞的比较研究

目的:通过尾静脉注射L1210细胞建立昆明小鼠及DBA/2小鼠的白血病模型,观察肿瘤细胞的迁移情况以及小鼠存活时间,为后续L1210细胞迁移的细胞内信号通路研究及抗肿瘤药物筛选奠定基础。方法:常规培养小鼠白血病细胞L1210系,将昆明小鼠及DBA/2小鼠随机分为对照组(A、C)和实验组(B、D),实验组尾静脉注射5×10^6L1210细胞,对照组注射等体积的PBS。昆明小鼠组饲养56d,DBA/2小鼠组饲养14d。定期测量小鼠体重并观察小鼠形态,取濒死小鼠以及最后解剖的小鼠的心、肝、脾、肺等脏器称重并测量,统计结果。结果:A、B、C、D组小鼠的平均存活天数分别为56、56、13.83±0.37、10.33±3.40d。昆明小鼠实验组脾脏明显肿大,肺脏有少量白细胞浸润,心脏和肝脏无明显变化,无死亡现象;DBA/2小鼠注射L1210细胞后第7d开始出现死亡,随着饲养时间的延长,死亡率不断上升。结论:昆明小鼠或DBA/2小鼠尾静脉注射L1210细胞均可引起肿瘤细胞的体内浸润。昆明小鼠尾静脉注射L1210细胞存活时间长,适合长期观察或周期比较长的实验;DBA/2小鼠尾静脉注射L1210细胞存活时间短,但实验现象明显。后期研究可以针对不同的研究目的和实验周期来选择合适的实验模型。     

昆明小鼠4个可能近交系的基因分型验证

在我国,昆明小鼠作为一种实验动物广泛应用于药理和遗传学相关的研究领域。但由于昆明小鼠属于远交群,而且不同地区的种群间已经出现了严重分化,缺乏具有显著特征的近交系,这使得它在生物学上的应用受到了很大的限制。研究人员已经以昆明小鼠为背景培育出了几个可能的近交系,但由于缺乏可靠的遗传检测,至今未得到广泛的认可和应用。文章收集昆明小鼠的4个已经60代以上兄妹交配繁殖的可能近交系,并以两个标准近交系BALB/c和C57BL/6为参照,利用30个微卫星标记对每个品系的5只小鼠进行了微卫星基因分型,进而分析其遗传纯度。结果发现,品系A1和品系N4在本研究所用的30个位点均呈纯合状态;而T2和N2均在D15Mit16位点呈杂合状态。本研究第一次为我国昆明小鼠近交系的遗传学纯度提供了可靠的分子水平证据。今后应当加强昆明小鼠近交系的标准化,以扩大其在遗传学方面的应用。     

体外培养小白鼠胚胎从胚泡期到体节期的初步研究

初步报道小白鼠3.5天受孕卵体外连续培养10天,从胚泡期到达体节期。重点介绍各阶段在显微镜下所见的特征。培养到第7—8天出现心跳,心跳一般持续2—3天。     

兔和小鼠早期胚胎ICM在ES培养系统中行为的比较

比较了兔和小鼠早期胚胎在小鼠ＥＳ培养系统中生长和发育和特点。结果发现,“两者在体外的早期发育程序和时间表”基本一致。但两者的生长方式不同：（１）小鼠胚胎的滋胚层（ＴＢ）能推开饲养层（ｆｅｅｄｅｒ）直接铺展在培养皿上;兔胚的ＴＢ推开饲养层的力量较小,大多数胚胎铺展在饲养之上;（２）小鼠胚外内胚层（ＥｘＥｎ）分化后紧紧包裹在ＩＣＭ（ｉｎｎｅｒ ｃｅｌｌ ｍａｓｓ）之外,而兔胚ＥｘＥｎⅠ和Ⅱ依次从ＩＣＭ     

双向凝胶电泳-飞行时间质谱技术鉴定小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M2/NDPK B的表达

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE)分析未交配小鼠子宫内膜和妊娠第五天(D_5)小鼠子宫内膜胚泡黏附时植入位点及其旁组织蛋白质组。差异蛋白质组学显示,等电点(isoelectricpoint,pI)约7.1、分子量(molecularweight,Mw)约18kDa的蛋白质点在D_5小鼠子宫内膜特别是植入位点表达上调。对此蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix—assistedlaserdesorpion/ionizationtimeofflyingmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(PeptideMassFingerprint,PMF),经Mascot:PeptideMassFingerprint中SWISS-PROT数据库查询后,鉴定该蛋白质为鼠源性nm23-M2/NDPKB。RT-PCR和免疫组织化学结果也显示D_5小鼠子宫内膜nm23-M2/NDPKBmRNA和蛋白表达明显增加。提示nm23-M2/NDPKB参与胚泡着床这一重要生命活动过程。