一种定量分析水稻细胞过敏反应的方法

在定量分析水稻细胞过敏反应(HR)方法中,溴酚蓝染色法的效果明显优于伊文氏蓝染色法。线形回归分析显示,在0.625￣20ΜG·ML-1范围内的溴酚蓝最大光吸收值与其浓度间的相关系数为0.9994。溴酚蓝染色法优化的测定条件为:0.03%溴酚蓝染色15MIN,水洗去除未结合染料,再在50℃下用含50%甲醇和1%SDS抽提液抽提与死亡细胞结合的染料30MIN,测定抽提液光吸收值(OD595),以甲醇处理15MIN的细胞作为全杀死细胞参照。用优化方法测定的水稻细胞死亡率与实际死亡率一致。     

改良吉姆萨染液的配方

改良吉姆萨染液的配方自从吉姆萨（（；ｌ（。。ｉｆ）应用到细胞学研究以来，它已成为细胞’兰物学和遗传学中的一种常规染料，尤其是在染色体分带研究中起着举足轻重的作用。常规吉姆萨洛液的配方是；吉姆萨母液用Ｓ（。。；。。ＯＯ’Ｏ缓冲液（内１勺５ｍＯＩ／Ｉ．的...     

介绍一种快速血涂片染色法

生理卫生课本规定学生观察显微镜下红、白细胞形态。迫切要求能有一种实用的快速染色法,血片制成后经过快速染色(仅用3—5秒)教师能立即进行演示、学生也能很快地分组实验。 1.染液的配制取Wright,s’粉0.1mg加甲醇80ml。配制时加适量CH_3OH研磨,使染料溶解。保存于紧塞的棕色玻璃瓶内。     

分化的骨骼肌细胞的不同固定和化学染色方法比较

该文比较了几种不同固定和化学染色方法对分化的骨骼肌细胞的效果及优缺点,并探讨了用化学染色法进行骨骼肌细胞形态学分析的可行性。骨骼肌前体细胞系C2C12经肌分化诱导3天后分别使用4%多聚甲醛(paraformaldehyde,PFA)、甲醇(methanol)、卡诺氏(Carnoy)固定液固定5 min、10 min和15 min,以确定最适固定方法;然后分别用改良苯酚品红(modified phenol fuchsin)、吉姆萨(Giemsa)、苏木精–伊红(hematoxylin-eosin,HE)三种不同的染液进行染色。结果表明,4% PFA固定5 min或10 min较其他方法更好地保持了肌管的形态;对于分化的骨骼肌细胞包括形成肌管的细胞和未形成肌管的细胞,HE染色优于其他几种染色方法,但以上几种方法均不如免疫荧光染色方法。     

麻黄碱通过调控TGF-β1/NF-κB信号通路抑制小鼠的气道炎症反应

为了研究麻黄碱通过调控转化生长因子β1/核因子κB (transforming growth factor-β1/nuclear factor-κB,TGF-β1/NF-κB)信号通路对哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的影响,将BALB/c小鼠随机分为空白对照组、哮喘模型组、麻黄碱低剂量组、麻黄碱高剂量组和地塞米松组,并利用卵清白蛋白(ovalbumin, OVA)联合氢氧化铝腹腔注射法构建小鼠哮喘模型。药物处理14 d后,通过无创性肺功能检测法测量小鼠气道反应性,采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining, HE staining)观察小鼠肺组织病理情况,采用瑞氏-吉姆萨染色法分析小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中的炎症细胞比例,利用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠血清OVA特异性免疫球蛋白E (immunoglobulin E, Ig E)的表达水平及BALF中炎症因子的表达水平,利用免疫印迹法检测小鼠肺组织TGF-β1...     

低氧对斑马鱼胚胎发育和红细胞生成的抑制作用

目的 本文以斑马鱼(Danio rerio)为研究对象,探讨了低氧对早期胚胎发育、造血分化和红系分化的影响.方法 选取受精后12 h的斑马鱼胚胎,随机分为两组,以常氧组为对照组,低氧组为实验组,实时观察斑马鱼胚胎发育形态学的变化;通过联苯胺染色、邻联茴香胺染色、AO染色及瑞氏吉姆萨染色观察红细胞的生成及形态学变化;并通...     

神经细胞尼氏体染色方法改良

组织细胞的染色无论在病理学诊断还是在科学研究与教学工作中,都具有重要的意义和使用价值。为了更好的研究神经组织,方便医学诊断、科研和教学工作,对3种常见尼氏体染色方法包括硫堇、甲苯胺蓝、吉姆萨染色法做了一些改良。改进的尼氏体染色法能够使脑组织切片更清晰美观,更有利于科研工作者对神经组织及尼氏体的研究。     

Pichia pastoris X-33 ΔGT2缓解甘油对AOX1的阻遏并用于外源蛋白的高效表达

巴斯德毕赤酵母是甲醇酵母,作为应用最广泛的真核表达系统之一,在以甲醇为唯一碳源时可以利用醇氧化酶启动子PAOX1进行外源蛋白的表达,但是这一过程会被甘油阻遏。近几年有研究表明,甘油转运体不仅有运输甘油的功能,还与甘油、甲醇的代谢有一定的联系。目的:构建了甘油转运体GT2(PAS_chr3_1076)缺失菌株P.pastoris X-33ΔGT2,研究该菌株的甘油去阻遏效应和在不同碳源培养基中诱导PAOX1启动子驱动外源蛋白的表达水平。方法:构建以甲醇诱导型启动子PAOX1调控外源基因EGFP的表达载体PAOX1-EGFP,经酶线性化后电转野生型菌株P.pastoris X-33获得重组菌株x-EGFP;通过同源重组的方法敲除GT2基因,获得ΔGT2-EGFP敲除菌株;以ΔGT2-EGFP和X-EGFP为出发菌株,在甘油、甲醇,以及甘油甲醇混合为碳源诱导醇氧化酶AOX1及绿色荧光蛋白EGFP的表达和生长情况,并检测在以甘油为唯一碳源时,胞外的甘油含量。结果:在以甘油甲醇混合碳源培养时,突变体ΔGT2-EGFP菌株中AOX1单位酶活比野生型菌株高出近35%,单位荧光强度要高出近70%;在以甘油为唯一碳源时,X-EGFP最终收获时的生物量比ΔGT2-EGFP多,且发酵液中甘油含量相对较少;以混合碳源培养时ΔGT2总外源蛋白表达水平最高。结论:实验表明,GT2参与甘油的吸收与代谢,ΔGT2突变株可在一定程度上解除甘油对甲醇的代谢抑制,暗示甘油转运体与PAOX1相关,且基于此研究结果有望优化出更高效的酵母表达系统。     

茅舍血厉螨核型及染色体的C带、G带的研究

本文首次报道了一种革螨——茅舍血厉螨核型及染色体C带、G带的研究。用剖腹取卵法、玻璃纸压片、Giemsa染色,经分析茅舍血厉螨的核型,单倍体n=7,二倍体2n=14。 用氢氧化钡—吉姆萨技术显示茅舍血厉螨染色体C带。在第1、2、4、5染色体上出现恒定的C带部分,第3、6、7染色体上出现不恒定的C带部分。根据C带带型,茅舍血厉螨着丝点的位置可分为近中区域(sm),近端区域(St),末端区域(t)和末端点(T)四类。 G带分析用胰蛋白酶—吉姆萨技术显示。 本文对茅舍血厉螨的核型、革螨染色体研究中螨卵的收集方法和染液的改进、C带带型与着丝粒位置的确定和G带显带问题进行了讨论。     

桦木酸对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响

目的:探究不同浓度桦木酸对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响.方法:将人胃癌MGC-803细胞分成4组,每组设置3个复孔,对照组细胞为加入浓度为0 μg/ml的桦木酸实验组细胞分别加入终浓度为10、20、30 μg/ml的桦木酸,各组细胞在含5％的CO2培养箱中孵育48 h后,使用吉姆萨染色法和台盼蓝拒染法检测桦木酸对...     

热疗联合奥沙利铂对SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察奥沙利铂联合热疗对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡的影响,确定联合用药的效果,为临床方案提供参考。方法:采用MTT(四唑盐)法检测热疗、奥沙利铂及联合用药对细胞增殖的影响;瑞士吉姆萨染色法观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期;Western blot检测Bax、Bcl-2以及Caspase8蛋白表达量变化;q PCR检测Bax、Bcl-2以及Caspase8 m RNA的积累。结果:热疗联合奥沙利铂可以显著抑制细胞增殖,与对照组相比,热疗组、化疗组、联合组细胞凋亡率分别为16.2%、20.5%和36.1%,具有显著性差异(P0.01);细胞学形态中,热疗组细胞发生皱缩,化疗组细胞膜破裂;化疗将细胞阻滞在G2/M期,热疗和联合组将细胞阻滞S期;Western blot和qPCR显示Bax/Bcl-2比值上升,Caspase8表达量增加,联合组三种蛋白的表达量均与对照组具有显著性差异(P0.01)。结论:热疗联合奥沙利铂可以显著促进细胞凋亡,提高治疗效果,为结肠癌的治疗提供参考。     

2种染色方法在微核试验中的比较

DNA存储着生物体赖以生存和繁衍的遗传信息,维护DNA分子的完整性对细胞至关紧要.外界环境和生物体内部的因素都会导致DNA分子的损伤或改变,微核试验是检测外来化合物对染色体损伤作用的重要方法,已在国内外普遍应用.蜘蛛是许多农、林害虫的天敌,在生物防治中起重要作用,保护和利用蜘蛛已成为生物防治的一项重要内容.本文主要是通过2种染色方法吉姆萨染色法和吖啶橙染色法对蜘蛛血细胞进行微核试验,比较2种染色方法的优劣.     

果蝇唾液腺染色体试材准备及观察方法的改进

果蝇唾液腺观察实验中大量活体试材的准备与学生剖取腺体的操作是该实验的难点,用甲醇(或乙醇):醋酸=3:1的固定液将果蝇幼虫杀死,变活体解剖为固定后解剖,降低了实验操作的难度;将固定的幼虫置30%的甘油中,放入-20℃冰箱保存,有效地解决了大量优质试材的供给问题,提高了实验教学的效果。     

利用甲醇的弗氏柠檬酸细菌的分离鉴定

分离到一株新的甲醇利用细菌,初步鉴定为弗氏柠檬酸细菌(Citrobacter freundii)4-1-1。该菌能以甲醇作为唯一碳源和能源,在甲醇无机合成培养基上,28—42℃条件下均能生长,以32℃为最适温度;pH5.4—8.0下可生长,最适pH为6.4—7.0;对甲醇最高耐受量为5.5%(V/V)。在适宜条件下,该菌比生长速率常数为0.691/h,甲醇转化率为36%。     

毕赤酵母的非甲醇诱导系统研究进展

毕赤酵母是一种能以甲醇为唯一碳源生长的甲基营养型酵母,常用作表达外源蛋白的细胞工厂。目前毕赤酵母常用的高效启动子AOX1(PAOX1)是一个严格的底物依赖型启动子,受甲醇的严格诱导,受葡萄糖、甘油、乙醇等非甲醇碳源抑制。但是甲醇有毒、易燃、易爆的特性使得其在食用、医用产品生产等领域受到很大的限制。本文将主要从PAOX1机制改造、新型启动子和非甲醇诱导物研发的角度阐述毕赤酵母非甲醇诱导的研究进展。     

毕赤酵母发酵产S-腺苷蛋氨酸的甘油-甲醇混合流加策略

在毕赤酵母发酵生产S-腺苷蛋氨酸(SAM)的诱导阶段,以不同甘油-甲醇比例的甘油-甲醇混合培养基进行诱导培养,结果表明以10%(w/v)甘油含量的甘油-甲醇混合培养基进行诱导培养时最有利于SAM的表达,SAM产量达6.09 g/L,比0%甘油含量条件下的SAM产量提高了20.4%。对诱导方式进行优化,先以100%甲醇诱导24 h,然后再连续流加10%(w/v)甘油含量的甘油-甲醇混合培养基,SAM产量可达7.94 g/L,在此基础上,进一步改进诱导方式,SAM产量得到进一步的提高,达到9.80 g/L。     

在组织切片中肥大细胞的证明及迅速记数的简单方法

肥大细胞的选择性染色法如下:1)薄片新鲜组织(3—5毫米厚)于下液固定18—24小时,但标本置于此液至少一周尚无显明害处。配法:福尔马林液10毫升;95%酒精90毫升;醋酸钙1克。2)组织以95%酒精洗2次,每次1小时。3)以常法制做石蜡切片(8—12微米厚),粘片,脱蜡,经纯酒精至95%酒精。4)在室温于下液内染1小时。配法:甲苯胺蓝(toluidine blue)0.25克;70%酒精100毫升;浓盐酸     

高效液相色谱法测定细菌发酵液中的糖、甘油和乙醇的研究

目的：建立一种用高效液相色谱快速测定细菌发酵液中糖、甘油和乙醇的方法。方法：酌情取细菌发酵液样品适量(1—9mL)于10mL容量瓶中,加入10mg/mL的甘露醇内标物1．0mL,用水定容到刻度,取2mL用4．5μm滤膜过滤,进样2μL分析,糖、甘油和乙醇以Waters Suger—Park—1钙型阳离子交换柱为固定相,0．05g／L EDTA钙钠水溶液为流动相分离,示差折光仪为检测器检测测定。结果：一次进样可同时测定细菌发酵液样品中的糖、甘油和乙醇;方法RDS在0．52％-0．85％之间,标准回收率在99—102％之间,结果满意。结论：该方法简便、快速、结果可靠,为发酵法生产甘油过程中的质量监控提供了方法。     

人类微孢子虫检测方法研究进展

微孢子虫(microsporidia)是一类专性细胞内寄生的单细胞真核生物。是引起微孢子虫病的真菌类病原。在已知并被命名的1500多种微孢子虫中,共有9个属中的17个虫种可以感染人。人类微孢子虫可侵染包括肠道、肝、肺、脑等部位,引起慢性腹泻、肝炎、角膜炎、脑炎、血液系统性感染等,严重影响人类健康。研究开发快速高效的人类微孢子虫诊断方法成为当前病原微生物检测领域研究的热点。人类微孢子虫的发现历史实际上是伴随检测方法的不断进步而逐渐进行的。这些检测方法包括,透射电镜(transmission electron microscopy)、苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin stain,HE)、亚甲蓝染色(methylene blue)、吉姆萨染色(giemsa)、革兰氏染色(gram stain)、韦伯氏改良三色染色法(Weber’s chromotrope-based staining)、荧光增白剂染色法(calcofluor white staining)、抗原检测、抗体检测、实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,q PCR)、环介导...     

血涂片制作的几点体会

制作方法：血涂片Wright’s染色法。①采血、制血膜、水平放置血膜片晾干。②血膜片固定于甲醇2-3min,取出晾干。③用蜡笔在血膜片两端划一染色区,避免染色时染液外溢。④往血膜片滴加瑞氏染液（瑞氏染料0．1g＋甲醇60ml）,数十秒钟后,再加一倍于染液的蒸馏水,染色5-8min。