两种Ames试验方法在槲皮素致突变试验中灵敏度的研究

目的:通过传统Ames试验与改进彷徨试验对槲皮素的致突变试验结果,比较两种试验的灵敏度.方法:Ames试验方法采用平板掺入法,选择3.2、16、80、400、2000μg/mL 5个剂量组的槲皮素在有或无代谢话化条件下处理鼠伤寒沙门氏菌株TA98和TA 100 48小时后计数回复突变菌落数;改进彷徨试验采用96孔板法,选择0.128、0.64、3.2、16、80μg/mL 5个剂量组的槲皮素在有或无代谢活化条件下处理鼠伤寒沙门氏菌株TA98和TA100 24小时后计数变色孔数.结果:Ames试验结果显示槲皮素在80-2000μg/mL回复突变菌落数明显增加并超过对照2倍并有明显剂量反应关系,Ames试验结果阳性;改进彷徨试验结果显示槲皮素在0.64-80μg/mL变色孔数明显增加(P＜0.01),并有剂量反应关系,结果为阳性;而在0.64-16μg/mL剂量下,改进彷徨试验能检测出阳性结果,而Ames试验未检测出阳性结果.结论:在较低浓度时,改进彷徨试验能检测出Ames试验检测不出的阳性结果,表明改进彷徨试验灵敏度较Ames试验高.     

Ames试验中菌落呈色计数法的探讨

本实验利用氯化三苯四氮唑(TTC)使革兰氏阴性菌显色的原理,在平板法Ames试验中,添加TTc浓度为1mg/皿时,使测试菌株(鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型株TA97、TA98、TA100、TA102)呈为红色。试验证明TTC本身无诱变性,亦不干扰阳性物(2-AF)的诱变性。菌落呈色后便于菌落计数,并在一定程度上提高试验结果的准确性。     

Ames试验中菌落呈色计数法的探讨

本实验利用氯化三苯四氮唑(TTC)使革兰氏阴性菌显色的原理,在平板法Ames试验中,添加TTC浓度为lmg/皿时,使测试菌株(鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型株TA97、TA98、TA100、TA102)呈为红色。试验证明TTC本身无诱变性,亦不干扰阳性物(2-AF)的诱变性。菌落呈色后便于菌落计数,并在一定程度上提高试验结果的准确性。     

昆明水源水和自来水水质致突变性及化学背景值:I.Ames试验和水源水及自来水微量有机、无机污染物化学背景值

本文报道，用XAD-2离子树脂吸附富集法制备自来水和滇池及松华坝水库源水提取物，以Ames鼠伤寒沙门氏菌回复突变系统诱发致突变性，Ames试验结果如下：来自滇池源水经氯化的自来水提取物，用TA[98]菌株加S9或不加S[9]混合物，突变率>2，结果为阳性。滇池源水提取物致突变性为可疑。使用化学分析法结合生物分析法评价昆明自来水和滇池及松华坝水库水中的化学微量污染物，估价在水中的微量污染物对人体健康的潜在致癌效应是有意义的。     

蕨菜乙醇提取物的Ames试验研究

目的：研究蕨菜乙醇提取物的致突变作用,为蕨菜的开发利用提供一定依据;方法：制备蕨菜乙醇提取物,采用Ames试验方法,以50μg/皿敌克松作为诱变剂,分别添加提取物50、100、200、400、800μg/皿,统计回变菌落数;结果：受试物各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍,且无剂量-反应关系;结论：在本实验条件下,蕨菜乙醇提取物无致突变作用.     

自蔓延高温合成镍钛形状记忆合金的生物医学基础研究——第三部分:毒理学实验

目的:对自蔓延高漫合成钛镍形状记忆合金进行毒理学研究。材料和方法:应用孔隙率为70％的SHS NiTiSMA多孔体漫提液,进行急性毒性试验、Ames试验、CHL细胞染色体畸变试验和骨髓多染红细胞微核试验。结果:小白鼠急性毒性试验:灌胃组和静脉给予组均全部存活,未见毒性反应。Ames试验:鼠伤寒沙门氏菌回复突变菌落数均不高于自发回变数,也未呈现剂量反应关系。中国仑鼠肺成纤维细胞染色体畸变试验,畸变率与对照组没有显著性差别。NIH品系小鼠骨髓多染红细胞微核试验,结果与对照组无显著差异。结论:自蔓延高温合成钛镍形状记忆合金多孔体无毒,哺乳动物体内外试验表明无致突变特性。     

Ames试验假阳性的判断方法

目的:确立一种判断Ames试验假阳性的可靠方法。方法:在Ames平皿掺入试验中发现经受试物处理的TA97和TA1535的菌落数相比溶媒对照组明显增加,为了证实其是因为受试物致突变性导致的回变菌落数增加还是由受试物毒性导致的菌落数增加,对分别经受试物和阳性对照物处理的Ames菌落进行增菌培养后接种于无组氨酸的培养基上,观察比较细菌的生长情况。结果:经受试物处理的菌株不能生长在无组氨酸的培养基中,而经阳性对照物处理的菌株则可以生长在无组氨酸的培养基上,说明经受试物处理的菌株没有发生突变。结论:此方法能可靠地验证菌株是否为突变菌株,由本研究可以发现经受试物处理的菌株没有发生突变,Ames平皿掺入试验中所观察到的菌落数增加是由于受试物毒性造成的假阳性。     

四种抗寄生虫药物的诱变性的细菌检测试验

我们以前报道了化学诱变物的细菌检测试验,就是用鼠伤寒沙门氏菌的突变菌株与大鼠肝脏微粒体组成检测系统,观察待检化学物质诱发突变菌株出现回复突变的菌落数,以判定有无诱变性(Ames法)。此后,我们用哺乳动物细胞的姐妹染色单体互换(SCE)为指标,检测化学物质的诱变性,所得结果与细菌检测法符合一致。这表明细菌检测法确可作为化学诱变物的初筛和预警系统。本实验就是用这种方法来鉴定一些常用的抗寄生虫药物和新合成的试验性药物有无诱变性。     

金荞麦的致突、致畸研究

本文报道了中草药金荞麦的致突、致畸试验。研究结果表明,金荞麦1-5000μg/皿的7个剂量,对Ames 4个标准菌株（±S9）未诱发阳性突变;对正定霉素和甲基甲烷磺酸醋所诱发的TA98和TA100菌株的回复突变,具有杭突变作用;对NIH系小鼠未见诱发骨髓嗜多染红细胞微核率增加;对中国仓鼠卵巢细胞染色体（±S9)无诱发畸变作用;对NIH系小鼠的生殖能力和胎鼠的生长发育未见不良影响,对胎鼠外观、骨骼、内脏无致畸作用。     

抑菌生的致突变性试验

本文应用Ames试验、微核试验,对中国人民解放军224医院及沈阳军区军事医学研究所研制的具有抗感染作用的枯草杆菌BS_(224)生态制剂即抑菌生进行了致突变性检测。结果表明:BS_(224)生态制剂不能使鼠伤寒沙门氏菌株发生回复突变,不引起小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率升高,初步认为BS_(224)生态制剂无突变性,推测无致癌性。     

检测低拷贝数HBV DNA含量的临床研究

目的:了解不同试剂在应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)以及巢式PCR方法在检测低拷贝数的HBV DNA量的差异与灵敏度。方法:用上海复星医学科技发展有限公司(A方法)检测出了68例HBV DNA结果为5.1×101-1.0×103拷贝数/亳升的低拷贝数标本。然后,三家不同公司的试剂(方法 B、方法 C、方法 D)对这些样本进行复核。另外,巢式聚合酶链反应PCR法检测此68例标本。随访巢式PCR结果为阳性的10例低拷贝数HBV DNA的病人。结果:用四种方法(A、B、C、D)检测的68个样本的HBV DNA拷贝数结果如下:无拷贝(0,9,12,4);101-102(21,17,18,22);102-103(47,36,28,35),大于103(0,6,10,7)。同时,用巢式聚合酶链反应检测此68例标本,有55例检测为阳性,有13为阴性结果。巢式PCR结果为阳性的10例低拷贝数HBV DNA含量的病人,随访发现此10病人有8例均在1~3月后出现HBV DNA的反跳,并伴肝功能的不正常,其HBV DNA的含量均在104拷贝数/毫升以上。结论:目前所用的实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的方法和试剂对低拷贝数HBV DNA存在不稳定性和不确定性。巢式PCR法对低拷贝数HBV DNA的检测灵敏度要远高于实时荧光定量PCR法。该研究提示测对抗病毒治疗过程中患者进行低拷贝数HBV DNA的检将提供有效的药物评价和预后信息。     

芪丹通脉片对大鼠慢性脑缺血损伤大鼠学习记忆的影响

目的:研究芪丹通脉片对慢性脑缺血所致学习记忆障碍的治疗作用及其可能机制。方法:采用双侧颈动脉结扎方法复制慢性脑缺血模型。将健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、假手术组、芪丹通脉片低剂量组、芪丹通脉片中剂量组、芪丹通脉片高剂量组、阳性对照尼莫地平组,应用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马神经元形态学改变。结果:与对照组比较,模型组大鼠可见显著学习记忆障碍,并可见海马神经元呈现出典型的神经病理性改变,海马区神经细胞数量减少、固缩等改变。芪丹通脉片可显著减轻慢性脑缺血所致学习记忆能力,并减其轻海马神经元损伤,且有显著剂量依赖性。结论:本实验证实芪丹通脉片可显著减轻慢性脑缺血所致学习记忆障碍,其可能机制是通过减轻海马损伤来改善学习记忆能力。     

新疆维吾尔族妇女宫颈病变中PTEN表达的研究

目的:探讨PTEN基因与新疆维族妇女宫颈病变的相关关系。方法:选取维吾尔族妇女正常或炎症的宫颈组织30例、CINⅠ30例、CINⅡ/Ⅲ30例、宫颈鳞癌组织30例采用免疫组化SP法检测PTEN蛋白表达。结果:PTEN的蛋白表达率在正常或炎症的宫颈组织、CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ、宫颈鳞癌组织中分别为83.3%、73.3%、56.7%、23.3%,SCC组阳性表达率明显减少,与前三组有显著性(P<0.05)。结论:新疆维族妇女宫颈病变组织中PTEN蛋白水平表达减少,其与新疆维族妇女宫颈病变呈负相关关系;是宫颈组织恶变的信号。     

尿微量蛋白与尿酶联合检测在早期肾脏损害诊断中的临床应用价值

目的:探讨尿微量蛋白与尿酶联合检测在早期肾脏损害诊断中的临床应用价值。方法:尿微量白蛋白(mALB)、视黄醇结合蛋白(RBP)采用免疫透射比浊法测定;尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)采用终点法测定,尿肌酐(Cr)采用肌氨酸氧化酶法测定。结果:①尿蛋白定性为阴性的高血压、糖尿病、系统性红斑狼疮患者(尿蛋白阴性组)尿mALB/Cr、RBP/Cr、NAG/Cr显著高于正常对照组,两组比较差异具有统计学意义(P均<0.05)。尿蛋白定性为阳性的高血压、糖尿病、系统性红斑狼疮患者(尿蛋白阳性组)尿mALB/Cr、RBP/Cr、NAG/Cr显著高于阴性组,两组比较差异具有统计学意义(P均<0.05)。②应用单个指标或任意两个指标联合诊断早期肾损害的灵敏度较低,应用3个指标联合诊断早期肾损害的灵敏度达到86.30%。结论:尿mALB、RBP、NAG联合检测可以早期、可靠地诊断肾脏损害。     

鞘内联合给予米诺环素和IL-6的中和抗体对脊神经结扎模型所引起的热痛敏的镇痛作用

目的:研究鞘内联合给予米诺环素和IL-6的中和抗体在大鼠脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)模型所引起的神经病理性痛中的镇痛作用。方法:建立大鼠SNL模型,分别在手术前和手术后鞘内给予米诺环素100μg、在手术后鞘内给予IL-6的中和抗体0.03μg、手术后鞘内联合给予两种药物,观察给药3天各组大鼠热刺激的缩足反应潜伏期(paw withdrawal latencies,PWL)。结果:①SNL手术前后给予米诺环素都可以提高大鼠的PWL(P<0.05),但SNL手术前给药对大鼠PWL的提升明显高于手术后给药(P<0.05)。②手术后给予IL-6的中和抗体可以有效提升SNL组的PWL(P<0.05),但是还是比给予生理盐水的假手术组大鼠的PWL明显减少(P<0.05)。③手术后联合给予两种药物可以明显逆转SNL组的PWL(P<0.05)。④联合给药对大鼠PWL的提高明显高于SNL手术后给予米诺环素组和给予IL-6的中和抗体组(P<0.05),但与手术前给予米诺环素组的PWL相比无明显差异(P>0.05)。结论:鞘内联合给予米诺环素和IL-6的中和抗体对SNL引起的神经病理性痛有明显的镇痛作用。     

结核分枝杆菌肝素结合血凝素蛋白的表达、纯化及免疫学特性的初步研究

目的:克隆肝素结合血凝素(HBHA)基因,并在大肠杆菌中进行表达和纯化,利用获得的蛋白进行免疫学特性的初步研究。方法:用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出HBHA基因片段,克隆至pMD18-T载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到表达载体pQE80L并在大肠杆菌DH5α中表达,表达蛋白经SDS-PAG及Western-blot分析后,亲和层析法纯化蛋白。获得的蛋白免疫BALB/c小鼠,测定血清抗体水平及IgG2a/IgG1比例。结果:克隆了HBHA基因,并成功表达该蛋白,SDS-PAGE及Western-blot分析表明表达产物正确。通过亲和层析法得到28kD纯化蛋白,与文献报道相符,诱导小鼠可使CD4+和CD8+细胞数明显增加。结论:成功获得了纯化的HBHA蛋白,明确了HBHA蛋白的免疫学特性,为进一步研究HBHA蛋白的致病机理及新型疫苗的开发提供了实验依据。     

叶酸-阿霉素连接物的制备及其抗肿瘤活性研究

目的:合成具有酸敏特性的叶酸-氨基己酸-阿霉素连接物,并观察其抗肿瘤活性以及对肿瘤细胞的靶向性。方法:首先将叶酸与氨基己酸连接,然后利用腙键与阿霉素连接,采用核磁共振、质谱等方法鉴定其结构;采用MTT法观察连接物对叶酸受体表达阳性的口腔表皮样癌细胞KB细胞及叶酸受体表达阴性肺癌A549细胞的毒性作用。结果:在氮羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺的催化作用下,合成了叶酸-氨基己酸-阿霉素连接物,波谱分析提示为目标产物。与游离阿霉素相比,连接物对KB细胞具有更强的细胞毒性,而且细胞毒性作用可被外源性叶酸抑制;而连接物对A549细胞的毒性弱于游离阿霉素,而且外源性游离叶酸对其细胞毒性没有显著影响。结论:叶酸-氨基己酸-阿霉素连接物能经叶酸受体介导靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞,是一种潜在的新型抗肿瘤药物。     

三碘甲腺原氨酸对大鼠成骨细胞增殖的影响

目的:探讨三碘甲腺原氨酸(T3)对大鼠成骨细胞增殖的影响。方法:采用骨组织块法原代分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,然后配置含不同浓度(10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L)T3的培养基,与大鼠成骨细胞共培养4d,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,采用细胞化学染色法测定成骨细胞ALP活性。结果:T3可促进大鼠成骨细胞增殖,并呈剂量依赖性;随T3浓度的增高,成骨细胞表达ALP活性增强(P<0.05)。结论:10-7mol/L～10-9mol/L浓度的T3可通过刺激成骨细胞的增殖,对预防和治疗骨质疏松发挥一定作用。     

成果期女贞子炮制后5-羟甲基糠醛的含量变化

目的:测定不同生长期女贞子酒炖前后5-羟甲基糠醛的含量。方法:采收8～12月产女贞子,依据《中华人民共和国药典》(2010年版)中的方法进行炮制。采用Inertsil ODS-3 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),色谱条件为流动相乙腈-水(10:90),检测波长285 nm,流速为1 mL.min-1,柱温为室温。结果:生女贞子中5-羟甲基糠醛的含量在幼果中(8月)最高,而酒炖后5-羟甲基糠醛的含量增加12.50～45.95倍。结论:为更有效利用女贞子中的5-羟甲基糠醛,可根据实际需要适时采收并加以炮制。     

动物血压实验麻醉剂的选用与比较

目的:研究一种对家兔血压影响小于常用麻醉剂,适用于家兔动脉血压实验的一种全身麻醉复合剂。方法:将氯胺酮、乌拉坦、戊巴比妥钠和水合氯醛有序分组,按不同比例配置麻醉复合剂对家兔进行耳缘静脉注射,观察记录并比较给药前后动脉血压的变化、麻醉维持时间、痛觉、角膜反射、肌张力、呼吸、心率变化。结果:①氯胺酮、水合氯醛、乌拉坦和戊巴比妥钠四种药物联合给药时家兔颈总动脉血压122±3mmHg,波动范围在开口时血压的5mmHg内,是整个实验过程中血压波动最小的,对动脉血压的影响小于常用麻醉剂25%乌拉坦(10mmHg左右)。②麻醉后生理状态平稳,角膜反射消失,肌张力明显减弱,呼吸频率减慢,骨痛反应消失,麻醉持续时间大于90min,降低了每种药物的用药量从而增加了麻醉药物的安全性。结论:1.35%氯胺酮(0.4mL/kg)、25%乌拉坦(0.8mL/kg)、5%水合氯醛(0.3mL/kg)和3%戊巴比妥钠(0.2mL/kg)复合给药时对家兔血压影响最小、麻醉维持时间长、麻醉效果理想,是一种适合于家兔血压实验的复合麻醉剂。