新生隐球菌GXM的纯化及其对巨噬细胞甘露糖受体表达调节的研究

目的从新生隐球菌B3501培养上清中分离和纯化荚膜多糖葡萄糖醛酸木糖甘露聚糖(GXM),观察其是否能调节巨噬细胞甘露糖受体MR的表达。方法采用乙醇沉淀荚膜多糖,十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)特异性沉淀方法获得GXM,将GXM与巨噬细胞共孵育24 h,Western blot检测MR的表达变化情况。结果获得了毫克级的GXM,巨噬细胞与GXM孵育后甘露糖受体(mannose receptor,MR)的表达没有明显变化。结论新生隐球菌荚膜多糖GXM不影响巨噬细胞甘露糖受体MR的表达。     

新生隐球菌的荚膜多糖合成研究进展

新生隐球菌是一重要的致病真菌,其细胞壁外层的多糖荚膜是第1个被公认的新生隐球菌毒性因子。本文总结了在荚膜生理和生化合成方面的研究进展,介绍了研究新生隐球菌荚膜合成的常用方法以及在新生隐球菌的荚膜代谢途径、生化合成酶、分泌、组装和调节这些广泛的研究领域存在的许多未解决的问题。     

两种血清隐球菌荚膜多糖抗原检测方法在肺隐球菌病中的应用研究

目的探讨并比较血清酶联免疫分析法(ELISA)和侧流免疫层析法(LFA)检测血清隐球菌荚膜多糖抗原(CrAg)在肺隐球菌病(PC)中的应用价值。方法采集2016年1月～2018年6月福建省福州肺科医院109例疑似PC患者的血液,采用ELISA和LFA两种方法对血清CrAg进行检测,对比分析两种方法对PC的诊断效率,同时监测治疗过程中血清CrAg的浓度变化。结果 109例患者中,经肺活检或肺穿刺液隐球菌检测确诊为PC53例,非PC56例,检验结果如下:(1)应用ELISA方法,PC组血清CrAg浓度为[11.43(5.92,47.96)]μg/L,其中CrAg≤3.2μg/L的例数明显低于非PC组,而CrAg≥5.0μg/L的例数则明显高于非PC组,两者比较差异均有统计学意义(均P0.05)。应用LFA方法,PC组血清CrAg检测阳性率明显高于非PC组,两者比较差异有统计学意义(P0.05)。(2)应用ROC曲线分析显示,ELISA检测血清CrAg的曲线下面积为0.939(95%可信区间为0.892～0.985)。其中截断值取3.54μg/L时约登指数最高,视为最佳截断值,对应的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为94.3%、80.4%、82.0%和93.8%。(3)当血清CrAg取4.0μg/L为截断值时,ELISA和LFA的诊断敏感度(88.7%和83.0%)两者比较差异无统计学差异(P0.05),但ELISA特异度(82.1%)明显低于LFA(98.2%),两者比较差异有统计学意义(P0.05)。当截断值分别取5.0μg/L、6.0μg/L和7.0μg/L时,ELISA和LFA的诊断敏感度及特异度相当(均P0.05)。当取8.0μg/L为截断值时,ELISA的诊断敏感度(62.3%)明显低于LFA(83.0%),两者比较差异有统计学意义(P0.05),但特异度(100%和98.2%)两者大致相仿(P0.05)。(4)14例患者在抗真菌治疗过程中监测血清CrAg的浓度变化,治疗前荚膜抗原浓度为[19.33(7.11,43.46)]μg/L,治疗后6个月荚膜抗原浓度为[8.09(5.39,11.90)]μg/L,较前明显下降,两者比较差异有统计学意义(P0.05)。结论血清CrAg浓度为3.54μg/L时视为ELISA的最佳截断值,但当取5.0μg/L为截断值时,ELISA同时有较好的诊断敏感度和特异度,且和LFA的诊断效率相当,两种方法均有助于对PC的快速诊断,值得临床推广。与LFA定性检测相比,ELISA可动态监测血清CrAg的浓度变化,有助于PC的疗效判断和预后评估。     

A群脑膜炎球菌荚膜多糖纯化工艺的优化

目的对A群脑膜炎球菌荚膜多糖纯化工艺的关键步骤进行分步研究,优化每一步工艺参数。方法优化十六烷基三甲基溴化铵的加入浓度、复合多糖的解离浓度和解离时间、不同厂家的苯酚、超滤和透析等工艺过程对荚膜多糖的影响。结果十六烷基三甲基溴化铵质量体积终浓度0.10%(w/v)沉淀效果更好,纯化获得的荚膜多糖产量更高相对分子质量更大。复合多糖解离浓度越高,纯化获得的荚膜多糖相对分子质量越小。延长复合多糖解离时间有利于提高荚膜多糖产量。不同厂家的苯酚、超滤和透析等工艺对荚膜多糖的产量和分子大小没有影响。结论现行A群脑膜炎球菌荚膜多糖纯化工艺复杂,优化后的工艺提高了荚膜多糖产量,缩短了工艺用时,增加了工艺稳定性。     

利于甘露糖蛋白纯化的新生隐球菌培养方法研究

目的 研究发酵法培养新生隐球菌的可能性,探索发酵法较传统方法培养上清用于纯化甘露糖蛋白的优势.方法 采用发酵法培养新生隐球菌CAP67,收集上清使用ConA琼脂糖凝胶4B亲和柱亲和纯化隐球菌甘露糖蛋白.结果 从新生隐球菌无荚膜株CAP67的发酵培养上清中获得了毫克级的甘露糖蛋白.结论 发酵法可以成功培养新生隐球菌,上清可用于纯化隐球菌甘露糖蛋白,与传统方法相比具有耗时少,产量高等优点.     

小鼠脑微血管内皮细胞与新生隐球菌GXM作用后基因表达谱分析

目的探索新生隐球菌GXM能否影响脑微血管内皮细胞基因的表达,为进一步研究隐球菌嗜中枢性的分子机制提供线索。方法使用Roche Nimble Gen 12×135K小鼠基因表达谱芯片,筛选小鼠脑微血管内皮细胞系b End.3与不同浓度新生隐球菌GXM作用后差异表达的基因;结合基因本体论(Gene Ontology),使用top GO进行差异基因GO分析,结合GO语义挖掘与隐球菌侵袭中枢神经系统能力相关的差异表达基因的信息;采用荧光实时定量PCR对重要基因PIK3C2G和ADAMDEC1的表达水平变化加以验证。结果 b End.3细胞与新生隐球菌GXM作用前后基因表达对比发现,实验组GXM(90μg/m)组总共有402个基因表达上调,296个基因表达下调,GXM(180μg/m)组总共有421个基因表达上调,564个基因表达下调,细胞膜、细胞骨架、磷酸肌醇-3-激酶活化、1-磷酸肌醇-3-激酶活化、细胞紧密连接等生物过程差异表达基因较为富集;对PIK3C2G基因和ADAMDEC1基因表达水平变化进行荧光定量PCR验证,结果与芯片结果一致,基因表达水平不同程度上升,且与GXM浓度正相关。结论新生隐球菌GXM能够影响脑微血管内皮细胞基因表达,PIK3C2G基因、ADAMDEC1基因表达上调可能和隐球菌穿越血脑屏障有关。     

肺炎链球菌荚膜多糖纯化及质量控制方法的研究现状

肺炎链球菌(简称肺炎球菌)荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)位于肺炎球菌的最外层,是肺炎球菌主要的毒力因子之一,也是有效的保护性抗原.获得高质量的肺炎球菌CPS,是肺炎球菌多糖疫苗(pneumococcal pol-ysaccharide vaccine,PPV)和肺炎球菌结合疫苗(pn...     

细菌荚膜多糖的分离纯化研究进展

荚膜多糖是细菌的保护性抗原和毒力因子,也是细菌疫苗最重要的靶抗原之一,其分离纯化是制作疫苗的首要步骤。本文从去除菌体、收集总糖、去除菌体核酸和蛋白质、去除内毒素等基本工艺步骤,对现有的工艺和目前的工艺进展进行了综述,重点阐述了中空纤维、深层过滤、超滤、酶水解、柱层析等方法在荚膜多糖分离纯化中的应用进展。     

新生隐球菌荚膜GXM对小鼠神经小胶质细胞产ATP能力及其凋亡的影响

目的 分析新生隐球菌荚膜多糖GXM对小鼠神经小胶质细胞能量代谢和凋亡的影响.方法 ①采用紫外分光光度计检测GXM干预后的神经小胶质细胞能量产物ATP含量的改变情况.②采用AnnexinV-异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双标记法流式细胞术检测GXM细胞诱导神经小胶质细胞凋亡的情况.结果 ①GXM体外可诱导神经小胶质细胞产ATP能力下降.②GXM体外可诱导神经小胶质细胞的凋亡.结论 新生隐球菌可通过GXM诱导能量代谢紊乱和凋亡来对神经小胶质细胞产生影响.     

新生隐球菌总RNA抽提方法的实验研究

目的探讨快速获取高质量的新生隐球菌总RNA的实验方法。方法选取新生隐球菌的荚膜株、荚膜缺陷株,分别设计采用4种方法提取总RNA:酸洗玻璃珠法、液氮研磨法、异硫氰酸胍一步法、冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法。用紫外线分光光度计测量其OD260、OD280的值,并且进行琼脂糖凝胶电泳,同时应用定量PCR法鉴定RNA质量。结果酸洗玻璃珠法、液氮研磨法、异硫氰酸胍一步法、冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法的RNA产量分别为0.2μg/105细胞、0.4μg/105细胞、0.1μg/105细胞、0.6μg/105细胞。结论冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法提取的RNA均一性和完整性最好,是简便、快捷地提取具有荚膜和细胞壁双重屏障的新生隐球菌RNA的理想方法。     

全国隐球菌与隐球菌病学术会议征文通知

由《中国真菌学杂志》编辑部主办的"全国隐球菌与隐球菌病学术会议"定于2009年5月下旬在江苏省常熟市(沙家浜所在地)举行。会议将邀请国际权威隐球菌与隐球菌病研究专家进行特邀演讲,交流我国在隐球菌与隐球菌病方面的基础和临床研究进展,拟定我国隐球菌感染治疗指南。会议期间     

隐球菌脑膜炎患者治疗后隐球菌超微结构观察

目的研究隐球菌脑膜炎治疗后菌体超微结构的变化,探讨电镜检查在隐球菌活力检测中的应用。方法对8例经过两性霉素B和5-氟胞嘧啶联合治疗8周后,脑脊液中仍然可以查见隐球菌的患者,采用透射电镜对其脑脊液中的隐球菌进行超微结构观察。结果隐球菌菌体结构都显示了明显的变异：菌体大小差异显著,菌体形态变化明显;荚膜结构紊乱,菌体内可见空洞状或多个巨大脂滴,部分菌体胞膜破损,胞浆溢出。结论隐球菌脑膜炎治疗后虽然脑脊液中还存在菌体,但是菌体的超微结构已经发生了重大变化,提示菌体活力降低或死亡。电镜检查可以作为隐球菌活力判定的一种有效手段,提高隐球菌脑膜炎疗效判定的准确性。     

全国隐球菌与隐球菌病学术会议征文通知

由《中国真菌学杂志》编辑部主办的"全国隐球菌与隐球菌病学术会议"定于2009年5月下旬在江苏省常熟市(沙家浜所在地)举行。会议将邀请国际权威隐球菌与隐球菌病研究专家进行特邀演讲,交流我国在隐球菌与隐球菌病方面的基础和临床研究进展,拟定我国隐球菌感染治疗指南。会议期间     

新生隐球菌荚膜研究现状

新生隐球菌是一种专性需氧条件致病菌,它的细胞壁外包绕着一个多糖荚膜,是其主要毒性因子之一。荚膜主要包含两种多糖-葡萄糖醛酸木糖和半乳糖甘露聚糖,此外还有少部分的甘露糖蛋白。这些多糖分子除构成多糖荚膜外,同时也参与新生隐球菌与宿主之间的免疫反应。该文对新生隐球菌荚膜的结构、生物合成、免疫反应及针对荚膜的抗真菌治疗等方面作一综述,旨在为新生隐球菌相关疾病的研究提供新的思路。     

隐球菌病免疫治疗的研究现状

由于隐球菌感染的发病率逐步升高,一方面现有的抗真菌药物因其毒性较大或疗效不确定已经不能满足临床治疗的需要;另一方面,由于本病患者往往同时有不同程度的免疫功能受损,所以在抗真菌治疗的同时进行免疫功能调节治疗已经成为一种重要的辅助手段。本文对目前隐球菌病免疫治疗的研究现状进行综述,并分析各种免疫制剂的作用机理,对其未来的临床应用进行评价。     

中枢神经系统隐球菌感染动物模型的研究

目的 构建中枢神经系统隐球菌感染的动物模型。方法 给予小鼠脑内接种隐球菌构建中枢神经系统隐球菌感染的动物模型。小鼠被随机地分为实验组和对照组,给予实验组小鼠脑内接种隐球菌菌悬液,对照组小鼠脑内接种生理盐水。结果 从组织病理方面观察到,实验组小鼠脑组织中的蛛网膜下腔、软脑膜表面、脑实质内、侧脑室脉络丛组织内均可见隐球菌菌体,脑膜轻度增生,侧脑室轻度扩大,脉络丛血管轻度扩张充血。对照组小鼠脑组织可见侧脑室轻度扩大,蛛网膜下腔血管、脑实质内血管、脉络丛血管均有轻度扩张充血,而蛛网膜下腔、软脑膜表面、脑实质内及侧脑室和室旁均未见隐球菌浸润。从组织病理观察结果两组具有一定的对比性。结论 小鼠脑内接种隐球菌构建其中枢神经系统隐球菌感染的模型,为研究人中枢神经系统隐球菌病提供了一个工具。     

两种方法纯化临床分离阿萨希毛孢子菌荚膜多糖GXMCSCD

目的使用两种方法分离和纯化临床分离阿萨希毛孢子菌的荚膜多糖葡萄糖醛酸木糖甘露聚糖(GXM)。方法对临床分离的阿萨希毛孢子菌进行增菌,采用无水乙醇沉淀荚膜多糖,通过十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)对GXM特异性沉淀,分别采用透析法和萃取法分离GXM-CTAB复合物从而纯化GXM。使用苯酚硫酸法测定GXM的浓度。结果通过透析法从200 mL培养上清中获得了约6.6 mg的GXM,阿萨希毛孢子菌GXM的获得率(GXM/GXM和GalXM混合多糖)为13.9%(6.6/47.4)。通过萃取法从200 mL培养上清中获得了约8.4 mg的GXM,阿萨希毛孢子菌GXM的获得率为14.2%(8.4/59)。结论两种方法都成功地提取和纯化了阿萨希毛孢子菌荚膜多糖GXM,萃取法较透析法更为高效。     

全国隐球菌与隐球菌病学术研讨会征文通知

随着医学诊疗技术的不断发展，特别是艾滋病在我国发病率逐年升高，隐球菌已成非常重要的病原微生物，隐球菌病已成为严重危害人类健康的地疾病。为促进我国医学界对此病的认识，进而提高防治水平，由《中国真菌学杂志》编辑部主办的“全国隐球菌与隐球菌病学术会议”定于2009年10月22～24日在江苏省常熟市（沙家浜所在地）举行。     

隐球菌感染动物模型

动物模型在隐球菌研究中具有重要作用,其不仅是研究宿主感染隐球菌后病理生理、遗传免疫等反应的途径,也是研究宿主作用后隐球菌自身发生的生理学、细胞学及分子生物学变化的重要手段.隐球菌可以从许多动物分离到,如鸟类、禽类、啮齿类、灵长类等,其中部分如鸽类等并不处于疾病状态.