中药水提物对白念珠菌生物膜抑制作用的研究

目的研究中药水提物对体外白念珠菌生物膜的影响。方法体外构建白念珠菌生物膜,微量稀释法测定中药提取物对白念珠菌浮游菌最低抑菌浓度（M IC）,XTT减低法评价中药提取物对白念珠菌生物膜SM IC（SM IC80,SM IC50）及对白念珠菌黏附能力的影响。结果野菊花、土槿皮和决明子SM IC80为125 mg/m l,其余中药SM IC80为250或500 mg/m l;地肤子SM IC50为7.81 mg/m l,川芎、苏梗、藿香和决明子SM IC50为15.63 mg/m l,其他中药SM IC50在62.5~250 mg/m l。10味中药在100 mg/m l时均能显著抑制白念珠菌细胞的黏附,10 mg/m l时地肤子、苏梗和苦参对黏附仍具抑制作用。结论该10味中药水提物对体外白念珠菌生物膜有较强抑制效应。     

黄芩苷联合氟康唑对白念珠菌生物膜的抑制作用研究

目的：探讨中药有效成分黄芩苷（ baicalin,BA）联合氟康唑（ fluconazole,FLC）对白念珠菌（ Candida albicans,C． albicans）生物膜的抑制作用。方法通过棋盘法考察BA联合FLC对白念珠菌浮游菌与生物膜的部分抑菌浓度指数（ FI?CI）;通过时间?杀菌曲线检测两药联合对白念珠菌标准株（C．albicans SC5314）的杀菌作用;以XTT减低法和干重法检测两药联合对白念珠菌SC5314生物膜代谢及生物量的影响;采用扫描电镜（ Scanning electron microscopy,SEM）和激光共聚焦显微镜（ Confocal laser scanning microscopy,CLSM）观察两药联合对白念珠菌SC5314生物膜形态结构的影响;以水?烃法检测两药联合对白念珠菌SC5314生物膜细胞表面疏水性（ cell surface hydrophobicity,CSH）的影响;通过实时荧光定量PCR （ quan?titative real time PCR,qRT?PCR）检测两药联合对白念珠菌生物膜和CSH相关基因表达的影响。结果黄芩苷与氟康唑联用抗白念珠菌浮游菌的FICI介于0．28～0．75之间,对生物膜的FICI介于0．16～0．5之间,表现为协同作用;SEM和CLSM在生物膜结构上验证了两药的协同效果;两药联合可降低生物膜表面疏水性,以及使ALS1、ALS3、EAP1、SUN41和CSH1分别下调6％、51％、24％、13％和39％。结论黄芩苷具有协同氟康唑抗白念珠菌生物膜作用。     

氨基酸对白念珠菌形态学影响的研究

目的初步探讨单个氨基酸对白念珠菌形态学的影响。方法用0．67％的酵母氮源基础培养基和2％葡萄糖配制成SD合成培养基,37％恒温摇床培养,研究单个天然氨基酸对白念珠菌形态学的影响,并分别通过不添加碳源和厌氧条件下培养观察对精氨酸诱导的菌丝的影响。结果在含10mmol／L的L－精氨酸的SD液体培养基中,可见大量的菌丝。在含10mmol／L的L一半胱氨酸、L．苏氨酸、L－缬氨酸和L－色氨酸的sD液体培养基中,可见典型的酵母细胞,未见菌丝。在含10mmol／L的其他单个氨基酸的SD液体培养基中可见混合的酵母和菌丝结构。在不含氨基酸或含各种天然氨基酸的SD固体培养基上,白念珠菌的菌落均光滑。但在含10mmol／L的L-精氨酸固体培养基上,光滑的菌落周围可见小的突起,镜下可见菌丝。无氧条件下,无论有无碳源,含精氨酸的SD培养液中白念珠菌只能形成酵母细胞,生长部分受到抑制。结论精氨酸可以诱导白念珠菌菌丝形成,厌氧条件下精氨酸不能诱导白念珠菌菌丝形成。     

大蒜素对白念珠菌形态转换的影响研究

目的探讨大蒜素对白念珠菌形态转换的影响及其作用机制。方法倒置显微镜观察白念珠菌菌丝形成的体外动力学过程;采用CLSI-M27-A3微量液基稀释法检测大蒜素对白念珠菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);倒置显微镜观察不同浓度大蒜素对白念珠菌在Spider液体培养基中菌丝形成的影响;qRT-PCR法检测在不同浓度大蒜素作用下白念珠菌菌丝相关基因HWP1、ALS1、EFG1、PDE2表达水平的变化。结果白念珠菌在Spider液体培养基中6 h时出现较长菌丝,24 h后镜下可见大量念珠菌菌丝包裹酵母细胞,紧密交错;大蒜素对白念珠菌的MIC值为25μg/mL;倒置显微镜观察(25~100)μg/mL浓度的大蒜素能明显抑制Spider液体培养基中白念珠菌菌丝的生长;qRT-PCR结果显示,在(25~100)μg/mL浓度的大蒜素作用下,白念珠菌菌丝相关基因表达下调。结论大蒜素能有效抑制白念珠菌的形态转换,其作用机制可能与调节菌丝形成相关基因的表达水平有关。     

龙胆泻肝汤氯仿提取物对白念珠菌VVC临床株菌丝抑制作用研究

目的观察龙胆泻肝汤氯仿提取物(chloroform extracts of Longdan xiegan decoction,CELX)对白念珠菌菌丝形成的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用微量稀释法测定龙胆泻肝汤不同溶剂提取物对15株VVC临床株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);采用固体培养基和半固体培养基观测菌落形态及菌丝侵袭能力;XTT还原法评价白念珠菌菌丝活性;平板法计数6h内药物对白念珠菌CFU的影响;荧光显微镜下观察菌丝代谢活力;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其菌丝相关基因:ALS3、SSA1、SUN41、HWP1、UME6和ECE1的表达量。结果 CELX对15株VVC临床株MIC介于32~64mg/L之间,效果优于总提物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物的MIC;256mg/L的CELX能显著抑制菌丝的形成;256mg/L的CELX在固体培养基中可抑制菌落褶皱,在半固体培养基中可抑制菌丝侵袭;qRT-PCR结果显示256 mg/L CELX可使菌丝相关基因ALS3、SSA1、SUN41、HWP1、UME6和ECE1分别下调81.6%、60.2%、69.8%、73.7%、49.5%、52.8%。结论龙胆泻肝汤氯仿提取物(CELX)可通过影响菌丝相关基因的表达来抑制菌丝的形成,从而降低白念珠菌对机体的侵袭力。     

牡丹皮水煎剂对体外白念珠菌生物膜的抑制作用

研究牡丹皮水煎剂对体外白念珠菌生物膜的影响。体外构建白念珠菌生物膜并采用XTT减低法评价牡丹皮水煎剂对白念珠菌成熟生物膜影响以及包被生物材料对白念珠菌生物膜形成的影响。结果显示,牡丹皮水煎荆对白念珠菌悬浮菌MIC为1．56mg／mL;对白念珠菌生物膜SMIC50与SMIC50分别是3．12和6．25mg／mL;药物包被96孔板对白念珠菌生物膜形成有一定的抑制效应。实验表明牡丹皮水煎剂对体外白念珠菌生物膜有较强抑制作用。     

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌VVC临床株体外生物膜形成的抑制作用

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of Bai Tou Weng decoction,BAEB)对分离自外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)的白念珠菌临床分离株(以下简称VVC临床株)生物膜形成的影响。方法采用微量稀释法测定BAEB对白念珠菌的最低抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC);甲基四氮盐(XTT)还原法测定BAEB对白念珠菌生物膜代谢活性的影响,Time-kill法检测BAEB对白念珠菌活菌数的影响;结晶紫染色法测定BAEB对白念珠菌生物膜生物量(Biomass)的影响;扫描电镜(SEM)观察BAEB对白念珠菌生物膜形态结构的影响;激光共聚焦显微镜(CLSM)检测BAEB对白念珠菌生物膜荧光信号强度的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测生物膜相关基因UME6、PES1和HSP90的转录水平变化。结果 BAEB对12株白念珠菌的MIC在64~256μg/mL之间,对白念珠菌生物膜的SMIC80(抑制80%生物膜形成的最低药物浓度)为1 024μg/mL或以上;Time-Kill曲线显示在12h之后,512、1 024μg/mL浓度的BAEB对白念珠菌均具良好的杀伤作用;结晶紫染色法表明512、1 024μg/mLBAEB能够减少其生物膜生物量;SEM观察到1 024μg/mL BAEB能够有效抑制白念珠菌在不同黏附介质上生物膜的完整度;CLSM显示512、1 024μg/mL的BAEB可以明显降低生物膜荧光信号强度;qRT-PCR检测显示在256、512、1 024μg/mL的BAEB作用下,UME6转录水平分别下调了72%、71%、77%,在512、1 024μg/mL的BAEB下HSP90转录水平上调了2.23和3.31倍,而PES1未有明显变化。结论 BAEB可以抑制白念珠菌VVC临床株体外生物膜的形成。     

紫外线对白念珠菌的影响

紫外线作为重要的环境因子之一,能显著影响包括白念珠菌在内的多种生物的生长及生理过程.研究发现白念珠菌受紫外线照射后菌丝形成被抑制,孢子形成增多且没有向光性;脉冲紫外线辐射可通过多靶点程序使白念珠菌失活;rad 51缺陷株比rad 52缺陷株更易受紫外线损害,同时紫外线可导致白念珠菌杂合性丢失.研究还发现UVC治疗可明显减少烧伤后真菌微生物感染,核黄素/UVA治疗可明显抑制白念珠菌生长.因此紫外线对白念珠菌有一定的抑制作用.     

胡桃楸提取物对体外白念珠菌生物膜形成的影响

目的研究胡桃楸提取物对白念珠菌生物膜形成的影响。方法采用甲基四氮盐（XTT）还原法评价胡桃楸提取物对白念珠菌的生物膜形成及黏附性的影响。镜下观察胡桃楸提取物对白念珠菌生物膜的形态学影响。结果胡桃楸提取物抑制白念珠菌生物膜50％及90％的最小抑制药物浓度（SMIC50、SMIC90）分别为15．2μg、23．4μg。胡桃楸提取物作用浓度大于20μg时对该菌细胞黏附有抑制作用。30μg胡桃楸提取物可完全抑制白念珠菌生物膜的形成。结论胡桃楸提取物对体外白念珠菌生物的膜形成有较强的抑制作用。     

pH及氧气对白念珠菌菌丝形成的影响

目的探讨pH值和氧气对白念珠菌菌丝形成的影响。方法通过调节Muller—Hinton液体培养基的pH值和去除培养基中的氧气来观察白念珠菌的生长曲线、倍增时间和菌丝形成率的变化。结果在无氧气的液体培养基中,白念珠菌生长缓慢,不能产生菌丝结构,只有酵母细胞形成。生长曲线的延缓期内各组没有明显差异,而在生长的对数期pH3和pH4的条件下念珠菌生长速度明显慢于pH5、pH6、pH7、pH8和pH9。菌丝形成率在pH3、pH4和pH5条件下〈20％,而在pH6、pH7、pH8和pH9条件下可高达70％。结论厌氧条件抑制白念珠菌的菌丝形成,只形成酵母细胞。白念珠菌在pH3—9的范围内均能生长,偏酸性环境有利于白念珠菌酵母形成,偏碱性的环境有助于菌丝的形成。     

白念珠菌菌丝转录活化因子协同作用的研究进展

从酵母转变为菌丝来适应不同的环境的能力是白念珠菌的特性之一,而菌丝体是其侵入宿主细胞引起机体全身性感染所必需的重要致病因素之一。白念珠菌这种重要的形态转换受到多种菌丝相关基因的调控。本文主要综述促有丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径的转录活化因子Cph1p和cAMP蛋白激酶A(cAMP/PKA)调节途径中的转录活化因子Efg1p对菌丝形态转换的影响,以及两者与调节白念珠菌毒力的转录活化因子TEA/ATTS家族中的Tec1p对于分泌型天冬氨酸蛋白酶家族(Secreted aspartyl proteinases,SAPs)中SAP5的协同调节作用,以对可能存在于不同的菌丝转录活化因子之间对菌丝形态转换调控的协同作用进行初步探讨。     

靛玉红、蛇床子素抗外阴阴道念珠菌病混合菌生物膜作用的研究

目的研究中药有效成分靛玉红、蛇床子素抗外阴阴道念珠菌病混合菌生物膜的作用。方法体外建立白念珠菌（Candidaalbicans）铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa,P．a）混合菌生物膜（Biofilm,BF）,XTT减低法及形态学观察白念珠菌混合茵生物膜的形成过程;形态学观察、活菌计数法评价中药有效成分靛玉红（indirubin）、蛇床子素（Ostho）对白念珠菌混合菌生物膜的最小抑膜浓度（SMIC）,并经扫描电镜确认。结果白念珠菌混合菌48h能形成成熟的生物膜;62．5mg／L浓度的靛玉红能抑制白念珠菌混合菌生物膜的形成。500mg／L浓度的蛇床子素未见有抑制白念珠菌混合菌生物膜的作用。结论靛玉红由于具有抗生物膜的作用,可用于预防外阴阴道念珠菌病的复发。     

大蒜素体外抗白念珠菌生物膜作用的初步研究

目的研究大蒜素对体外白念珠菌生物膜的影响。方法 MTT法评价大蒜素对白念珠菌生物膜形成及细胞黏附的影响;血清芽管计数法评价大蒜素对白念珠菌芽管形成的影响。结果低浓度(4μg/mL)和高浓度(64μg/mL)大蒜素对白念珠菌生物膜形成的抑制率分别为(23.0±1.1)%和(95.6±0.3)%;32μg/mL大蒜素对早期(0h)、中期(12h)及成熟期(48h)生物膜的抑制率分别为(88.5±0.5)%、(63.3±0.8)%和(52.3±1.1)%;与空白对照组相比,不同浓度大蒜素(4～32μg/mL)对培养30min、60min、90min、120min的白念珠菌细胞黏附均有显著抑制作用(P0.05);空白对照组芽管形成率为(91.2±1.6)%,64μg/mL大蒜素组为(2.2±1.2)%。结论大蒜素对体外白念珠菌生物膜有较明显的抑制作用。     

白念珠菌生物膜的研究

细菌生物膜相关感染发病率不断上升,且治疗困难,已受到广泛的关注。对于真菌,生物膜以及生物膜在真菌感染与耐药性产生过程中的作用只是近年来才受到国内外学者与临床专家的关注,目前的研究多集中在念珠菌属。本文综述了白念珠菌生物膜的形成与特征、影响因素、耐药性的分子机制等几方面内容。     

家蝇抗菌肽AMP-17对白色念珠菌菌丝的抑制作用

【背景】AMP-17是从微生物诱导的家蝇转录组数据库筛选到的一条特异性高表达基因,采用原核表达体系获得其重组蛋白并证实了具有显著的抗菌效果,特别是对白色念珠菌具有较强的抗菌活性。【目的】研究抗菌肽AMP-17对白色念珠菌菌丝的抑制作用。【方法】采用微量液体稀释法测定AMP-17对11株白色念珠菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);根据对AMP-17的敏感程度选取3株绘制生长曲线;通过光学显微镜观察并计数经AMP-17作用后白色念珠菌芽生孢子生成率及芽管形成率;倒置荧光显微镜观察白色念珠菌酵母相向菌丝相转化及以菌丝相为起点AMP-17促进菌丝相转化为酵母相的情况。【结果】AMP-17对支气管肺泡灌洗液分离株16105的MIC为10μg/mL,对粪便分离株16214的MIC为40μg/mL,对其余9株白色念珠菌的MIC均为20μg/mL;白色念珠菌经不同浓度的AMP-17作用后,各时间点的芽生孢子生成率均显著低于对照组,尤其是40μg/mL的AMP-17组,芽生孢子生成率仅15%,显著低于阳性药物氟康唑;各实验组芽管形成率显著低于对照...     

基于网络药理学的苦参-苍术药对治疗痔疮作用机制研究

目的:探讨苦参-苍术药对治疗痔疮的作用机制.方法:通过中药系统药理学(TCMSP)分析平台筛选苦参、苍术的活性成分,整理并校正其对应的作用靶点.通过GeneCards、OMIM、Drugbank数据库收集痔疮相关的基因靶点,运用Venny 2.1.0筛选出苦参、苍术治疗痔疮的关键靶点,将关键靶点上传至STRING数据库...     

环境及遗传调控机制对白念珠菌菌丝形成过程调控的研究进展

<正>白念珠菌(Candida albicans)是最常见的真菌病原体,可定植于口腔、泌尿生殖道以及健康人的皮肤表面,在大多人群中,白念珠菌是正常微生物菌群中的一部分^[1]。由于微生物菌群变化、免疫功能障碍和皮肤屏障破坏,白念珠菌可能会从共生转变为致病性^[2],这种转变导致白念珠菌在不同组织和器官中引起浅部感染(如皮肤感染),以及甚至危及生命的深部真菌感染^[3]。     

大黄酚体外抗白念珠菌生物膜作用的研究

目的研究大黄酚对体外白念珠菌生物膜的影响。方法采用XTT减低法评价大黄酚对白念珠菌的生物膜及黏附性的影响;镜下观察该药对白念珠菌生物膜的形态学影响;细胞毒试验检测该药的毒副作用。结果大黄酚对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC80分别为125、1000μg/ml;100μg／ml及1000μg/ml含量浓度的大黄酚对自念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用;大黄酚对人细胞毒性较弱。结论大黄酚对体外白念珠菌生物膜有较强的抑制作用。     

白念珠菌生物膜及其形成的抑制性因素研究进展

白念珠菌易于在医学植入材料上形成生物膜,生物膜较其游离细胞具有更强的侵袭力并对传统的抗真菌药耐药。该文就近年来抗白念珠菌生物膜的药物及生物膜形成的抑制性因素研究进展作一综述。