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丙型肝炎病毒基因组C区和NS3区基因cDNA的融合及其在大肠杆菌中的… 总被引:1,自引:0,他引:1
通过逆转录-聚合酶链式反应,从中国人丙型肝炎病毒携带者的血清中扩增并克隆到2段cDNA片段,即HCV基因组C区抗原基因C831cDNA片断和NS3区抗原基因C33cDNA片段同C831cDNA片段经连接肽Ser-Pro-Gly-Ser连接成为基因嵌合体C33cDNA片段同C831cDNA片段经连接肽Ser-Pro-Gly-Ser连接成为基因嵌合体C33c-C831.C33c-C831基因嵌合体同温 相似文献
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大鼠催乳素基因真核细胞可表达性质粒的构建及应用研究 总被引:4,自引:0,他引:4
735bp的PRLcDNA片段从质粒PRL-SP65#1中回收后,用粘性末端连接法将其重组到真核表达载体pcDNA3上,筛选出正向连接重组体pcDNA3-PRLS和反向连接重组体pcDNA3-PRLAS。将重组体pcDNA3-PRLs和空载体pcDNA3分别转入NIH3T3细胞系,用G418筛选出阳性细胞后与未转染的NIH3T3细胞在加E2和不加E2的情况下,用原位杂交的方法,分别用PRLcDNA探针和原癌基因c-H-rascDNA探针进行检测,未转染的NIH3T3细胞在加E2和不加E2时都几乎无催乳素基因的表达,同样,转入空载体的NIH3T3细胞也无PRL的表达,而转入重组体pcDNA3-PRLS的NIH3T3细胞则有大量的PRL基因的表达,与对照组相比有显著差异(P<0.01)。正常和转入空载体的NIH3T3细胞有一定程度的原癌基因c-H-ras的表达,当分别加入E2和转入重组体pcDNA3-PRLS后,NIH3T3细胞中的c-H-ras基因表达水平都显著升高(P<0.05)。 相似文献
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本文介绍一种从重组质粒中快速提纯DNA插入片段的方法。质粒DNA的制备简单、快速、分离的质粒DNA可用于限制性酶切和转化大肠杆菌等。从琼脂糖凝胶中提纯DNA插入片段的方法操作简单,回收效率高,提纯的DNA片段可用于连接和制备杂交探针等。 相似文献
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早期人胚胎cDNA文库构建及目的基因筛选 总被引:3,自引:0,他引:3
收集受精后3、4和5周龄药物流产胚胎,用改良一步法提取总RNA,oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,逆转录合成一链cDNA,完成二链cDNA的合成后,经碱变性电泳检测,合成cDNA的大小为0.4~9.0kb之间,且主要集中在1.0~2.0kb。除去多余的接头,收集大于400bp的cDNA片段,与载体pSPORT1和和γZipLox连接,分别得到3、4、5周龄人胚胎质粒文加和噬菌体文库。另外,采 相似文献
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我国芥菜型油菜品种遗传多样性初探 总被引:8,自引:0,他引:8
用RAPD技术对包括春、冬芥菜型采及国外品种在内的36个芥菜型油菜品种的遗传多样性进行了分析。在扩增得到的128条DNA带中,多态性DNA片段达88.28%。分析表明:春 油菜间遗传差异较大,国内冬性芥菜型油菜地方种多样性水平较高,25份冬性品种分属Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ类群,而春性芥菜型 采地方种均归于Ⅳ类;印度的RLM198与四川的珙县金黄油菜、澳大利亚品种与我国春油菜品种亲缘关系密切。 相似文献
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丙肝病毒融合抗原基因NS3-C定点整合入衣藻叶绿体基因组的研究 总被引:21,自引:1,他引:21
用PCR 方法从丙型肝炎病毒(HCV) cDNA 文库中克隆了两段DNA 片段,即HCV 基因组非结构NS3区抗原基因(约0.7 kb)和核心抗原C区抗原基因(约0.6 kb)的cDNA 片段。在两段cDNA 间加入连接肽Ser- Pro- Gly- Ser 的密码子序列,构建成融合抗原基因NS3- C。将该融合基因与衣藻叶绿体基因atpA 的启动子和rbcL 基因的3′末端连接,得到丙肝病毒融合抗原基因NS3- C表达盒,再将该表达盒与选择标记基因aadA 表达盒和衣藻叶绿体基因组同源片段连接,构建成衣藻叶绿体转化载体pSS6。基因枪法转化衣藻叶绿体,经壮观霉素筛选获得转化再生的单藻落,对转基因衣藻的PCR 和Southern 杂交分析表明,融合抗原基因NS3- C已整合到衣藻叶绿体基因组中。 相似文献
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PCR已用于DNA诊断。连接酶链反应(LigaseChainReaction.LCR)做为PCR方法的补充得到进一步发展。应用热稳定DNA连接酶,既能扩增DNA,同时也能区分单碱基的替换。当碱基完全互补时,这个连接酶能对两个紧密相邻的寡核苷酸进行共价连接,若连接处发生了一个碱基突变,便不能使两个寡核苷酸有效连接,从而不能扩增产物,应用相应的方法便能区别 相似文献
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在DNA合成中 ,合成方向为 5′→ 3′ ,即一条链上是连续复制的 ,而另一条链的复制是不连续的 ,必须先合成岗崎片段 (真核细胞的岗崎片段为 10 0bp ,原核细胞的为 10 0 0bp)。DNA连接酶的作用就是催化岗崎片段的连接以完成DNA的合成。另外 ,DNA连接酶在DNA修复过程中也起重要作用 ,如在切除修复中 ,切除损伤的DNA片段 ,以未受损伤的链作为模板合成一条新的DNA链后 ,DNA连接酶将新合成的DNA链与原来的DNA链之间的缺口封闭完成DNA的修复。DNA链未封闭的缺口对细胞具有潜在的危险性 ,所以 ,DNA连接… 相似文献
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用非放射性原位杂交和免疫金染色在豌豆间期染色质内显示的rDNA的分布 总被引:1,自引:1,他引:1
以异羟基洋地黄毒甙标记的rRNA为探针,通过与植物根尖分生组织区振动切片中的rDNA原位杂交,结合免疫金染色及银加强金处理研究了豌豆间期染色质中rDNA的分布。研究结果清楚地显示供试植物间期细胞内有1-5个显著的rRNA探针结合位点,其中显示4个结合位点的细胞占60.6%,少于和多于4个结合位点的细胞分别上37.9%和1.14%。在显示4个结合位点的细胞核内,它们分别按照2:1、3:1和2:1:1 相似文献
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免疫PCR是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ELISA法,若与抗体连接的酶用DNA片段代替,则该DNA片段可用于PCR扩增。因此,免疫PCR有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断。 相似文献
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细胞编程死亡(programedcelldeath)是细胞生理性死亡的一种主要形式。Bax具有抑制细胞编程死亡的作用。本研究采用PCR方法,从人肿瘤细胞HL—60cDNA文库中扩增出若干个baxcDNA片段,然后将它们分别与PGEM—T测序质粒载体连接,并转化到大肠杆菌JM109中去。用蓝/白法筛选重组菌落,经酶切分析及PCR鉴定,获得了插入片段大小约为0.4kb及1.1kb的BaxcDNA重组质粒PBaxl和pBax2。这些片段的测序及表达工作正在进行之中。 相似文献
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本文介绍一种简单快速分离质粒DNA方法。此方法有两个主要步骤。用这种方法分离的质粒DNA纯度高、无RNA,并可用于酶切、连接等操作。 相似文献
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用生物微量热技术及DNATm测量研究了手性不同的三种环方铂络合物与小牛胸腺DNA(200bp)作用中的特异性,发现R,R构型的与DNA作用最强,这与癌细胞的体外筛选结果相一致.而且通过HPLC及13C-NMR研究为环方铂络合物与DNA作用的分子机理分析找到了直接的证据. 相似文献
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一种高效通用的平端亚克隆方法 总被引:2,自引:0,他引:2
一种高效通用的平端亚克隆方法毛春生,金宁一,顾万钧(解放军农牧大学研究所病毒室,长春130062)关键词平端亚克隆亚克隆是分子生物学和基因工程研究中常用技术之一。在理论上,任何一对平末端DNA片段都可经T4连接酶催化连接。这给不同DNA分子之间的连接... 相似文献
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免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲胎蛋白的检测 总被引:1,自引:0,他引:1
免疫PCR是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ELISA法,若与抗体连接的酶用DNA片段代替,则该DNA片段可用于PCR扩增。以链酶亲合素搭桥将生物素标记的抗体与DNA相连建立了免疫PCR技术,并将其用于检测甲胎蛋白(AFP),其敏感性比ELISA法高104。因此,免疫PCR有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断 相似文献
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以鱼呼肠孤病毒双链RNA为模板,建立一种快速、简便、高效的cDNA合成及克隆策略。在一定量模板条件下,采用随机六聚体为引物合成cDNA第一链。以退火方式形成双链cDNA,直接通过琼脂糖凝胶电泳检测其cDNA合成产量。双链cDNA经两端补齐后,平头连接于具有阳性选择标记的载体中,以高效电转化的方式进行快速克隆。 相似文献