单克隆抗体的纯化

 <正> 作者采用Bio-Rad公司的单克隆抗体(MoAb)纯化仪(MAPS-100),对两种不同亚类的MoAbs进行了分离纯化,其纯度及免疫学活性均较满意。     

小鼠单克隆抗体的纯化

本文综述了小鼠单克隆抗体IgG及IgM的各种纯化方法及其优缺点。对于不同类型的抗体,根据其应用目的可采用相应的纯化方法。     

一步纯化胰岛素单克隆抗体

本文报道用瑞典Pharmacia公司生产的快速蛋白液相层析仪、强阴离子交换预装柱(MonoQ)一步纯化胰岛素单克隆抗体的方法,结果证明此法快速、简便、重复性和分离效果好。纯化后的单克隆抗体的免疫活性仍在94%左右。     

单克隆抗体的鉴定和单克隆抗体的生产、纯化及标记

《单克隆杂交瘤抗体:技术和应用》一书,篇幅甚长,内容丰富,此处仅摘译了“单克隆抗体的鉴定”和“单克隆抗体的生产、纯化及标记”两节,供参考。     

国产羟基磷灰石纯化单克隆抗体的探讨

据文献报道,用羟基磷灰石(HA)柱层析纯化单克隆抗体(MAb)具有简便快速、低成本、高效以及适用于各类和亚类免疫球蛋白等优点。国内近年来已有一些实验室开展这方面的工作,但迄今所见文献中所采用的HA材料均系美国Bio-Rad公司的产品,尚未见采用国产HA纯化MAb的报道。我们以市售国产HA制成层析柱,对本室研制的抗促卵     

应用单克隆抗体免疫亲和柱纯化干细胞因子

应用抗人干细胞生长因子(SCF)单克隆抗体,通过化学偶联方法制备成亲和层析柱,用于纯化大肠杆菌表达的可溶性重组人rh-SCF.结果表明,经亲和柱纯化的样品经SDS-PAGE电泳检测纯度达95%以上,计算蛋白回收率为23.4%,并且纯化后rh-SCF生物活性明显高于纯化前样品.     

猪生长激素及其单克隆抗体的制备与纯化

本文介绍一种简便快捷提纯猪生长激素的方法。通过杂交瘤技术,首次获得抗猪生长激素的单克隆抗体,并讨论和比较从腹水纯化单克隆抗体的各种方法。     

抗脂多糖单克隆抗体特性及纯化的研究

用Ｅ．ｃｏｌｉ０１１１：Ｂ４死菌体及其脂多糖（ＬＰＳ）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合获得６株稳定分泌抗ＬＰＳ特异性单克隆抗体细胞株,其中一株为ＩｇＧ２ａ类,５株为ＩｇＭ类,轻链均为Ｋ型;染色体数目为９０－９８条;５株ＩｇＭ类单克隆抗体识别５种不同的抗原表位;相对亲和力在１０~８～１０~（１０）之间;１Ｂ１２单抗经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０纯化后,经还原性ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示只有７０ＫＤ的重键和２５ＫＤ的轻链。     

单克隆抗体亲和层析纯化人白细胞干扰素的研究

本文报道了一种单克隆抗体亲和层析纯化人白细胞干扰素的方法．我们采用自己研制的α－干扰素单克隆抗体亲和层析柱进行了人白细胞干扰素较大规模纯化的研究,结果表明,其活性回收率平均达１０６．９％以上,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染法鉴定,白细胞干扰素的大多数活性成分均被吸附和回收,所得的干扰素蛋白成分主要位于分子量１５０００～２１０００Ｄ的干扰素活性区域,产品的纯度大大提高,比活可达８×１０６ＩＵ／ｍｇ;ＥＬＩＳＡ夹心法测定,每毫升洗脱样品中鼠源ＩｇＧ含量小于４ｎｇ,我们所建立起的亲和层析法操作简便,亲和吸附和洗脱条件温和,可适用于大规模的白细胞干扰素的纯化．     

人鼠嵌合单克隆抗体c30.6的纯化

采用介体电泳技术对CHO细胞培养液中的人鼠嵌合单克隆抗体c30.6进行纯化,第一步在pH8.6条件下进行,抗体带正电荷而培养液中的大部分杂质带负电荷,抗体和杂质的在电场作用下向两电极运动,结果被分离在分离膜的两侧,SDS－PAGE显示抗体纯度达95％,且剩余杂质的分子量均小于抗体的分子量。第二步是在pH6.0条件下进行,此时抗体和杂质都带正电荷,它们在电场作用下向同一方向运动,但分离膜只允许分子量较小的杂质通过,抗体得以进一步纯化,抗体的回收率为80％,而且生物活性未受影响。     

单克隆抗体亲和层析纯化长叶车前花叶病毒

长叶车前花叶病毒上海分离株(HRVsh)单克隆抗体1H2,经纯化后以溴化氰活化法偶联于Sepharose 4B上制成亲和层析柱。HRVsh感染的三生烟提取液,经一次聚乙二醇沉淀初步纯化,悬浮液上亲和层析柱,于磷酸缓冲液中吸附,蒸馏水洗脱。收集的病毒制剂接种心叶烟有感染性,电镜观察见典型的HRVsh粒子,紫外吸收光谱与常规方法提纯的病毒相似,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条带。结果表明单克隆抗体亲和层忻得到高度纯化的HRVsh。最后讨论了单克隆抗体亲和层析方法的优点。     

克伦特罗单克隆抗体的纯化及其生物学特性的研究

目的：将自制克伦特罗（CL）单克隆抗体纯化并研究其生物学特性,进行性质鉴定并建立检测标准曲线。方法：用ELISA法测定克伦特罗单克隆抗体的亲和常数和抗体活性,ELJSA测定单克隆抗体与BSA的交叉反应及与几种结构和功能类似物的交叉反应,然后采用间接竞争ELISA方法建立检测标准曲线。将制备的含克伦特罗单克隆抗体的小鼠腹水用盐析法和免疫亲和柱层析法进行抗体纯化。结果：经ELISA法测定,单克隆抗体亲和常数为2．90×10mmol／L,抗体效价最高达10^6。单克隆抗体对BSA无反应,对几种结构和功能类似物的交叉反应率均小于0．005％。建立的标准曲线R2=0．9812,最低检测限为1．0ng／ml。结论：建立了间接竞争ELISA检测cL的标准曲线。自制的克伦特罗单克隆抗体亲和力好,特异性高。为以后实际样品的检测及制备CL免疫检测试纸条和试剂盒奠定了基础。     

单克隆抗体纯化过程中内毒素去除方法分析

目的：分析单克隆抗体纯化过程中,去除内毒素的不同方法的应用效果,并探讨它们应用于中试规模的可行性。方法与结果：比较了多聚赖氨酸型的内毒素去除填料、20nm膜过滤、将单抗附着在蛋白A柱上后使用精氨酸和组氨酸溶液冲洗等3种方法的内毒素去除效果,发现3种方法都可以将内毒素水平大幅降低,可分别将内毒素去除70％、88％和97％。因为单抗分子等电点较高,所获得的最低内毒素含量为0．2～0-3EU／mg。结论：3种方法均具有一定的工艺放大潜力,进一步提高内毒素去除效果将需要综合使用不同机理的去除技术。     

用单克隆抗体纯化血浆蛋白排除病毒污染物

<正>血友病A和B是威胁生命失调的遗传性疾病,它们分别由于血浆凝血因子Ⅷ和Ⅸ缺乏所致。用从人血浆中分离的这些组分浓缩物治疗对于患者的保护起着十分重要的作用。Pool等人的发现是一个重要的突破。即治疗制品可用冰冻血浆和收集沉淀物以及融化沉淀的上清液制备。由此方法制备的浓缩物是现时适用的许多治疗制品的基础。然而,自从1964年的这种发现,制品纯度的改善是迟缓的。     

膜渗滤亲和层析法纯化腹水单克隆抗体

用膜渗滤亲和层析法纯化腹水单克隆抗体（McAb）.采用硝酸纤维素膜（NCM）作固相支持物吸附抗原,用负压使小鼠腹水渗滤NCM,在滤过的同时腹水中的McAb不断结合于NCM上吸附的抗原,再将McAb从NCM上解离,从而得到高纯度的McAb.用此法纯化抗白蛋白（Alb）McAb.结果提纯的Alb McAb纯度达PAGE电泳单条带,将此McAb点样NCM用于斑点免疫渗滤法（DIFA）检测Alb,其灵敏度比用腹水点样时高20倍.该法快速简便,可代替亲和层析柱用于纯化McAb.     

应用A蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体

应用Protein A亲和层析法,从采集的小鼠腹水中纯化出了抗凝血因子Ⅶ单克隆抗体,用SDS-PAGE和ELISA法分别检测了纯化后单克隆抗体的纯度及效价,结果显示,电泳为两条带,分别为免疫球蛋白G(IgG)的重链和轻链,纯化后的单克隆抗体纯度达到电泳纯,应用间接ELISA法测定腹水效价为1×10-7左右,与未纯化前无差异。结果表明,应用A蛋白亲和层析法能够得到纯度较高的单克隆抗体,适用于高纯度单克隆抗体的制备。     

人心肌肌钙蛋白T的纯化和单克隆抗体的制备

从人左室心肌中成功纯化心肌肌钙蛋白T(cTnT). 经匀浆, 70℃加热处理, 咪唑盐酸透析, DEAE-纤维素层析, 100g心肌获取cTnT 5mg, 纯度为97.6%. 同时采用脾内免疫法, 免疫Balb/C小鼠, 经细胞融合, 筛选, 克隆化得5株稳定分泌抗人cTnT单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞(G₃, G₈, G₁₀, A₅, A₇), 4株为IgM, 1株为IgG, 染色体数目92～110条. 腹水效价为3.2×10^-6～1. 6×10^-7.     

EpCAM蛋白的表达、纯化及其单克隆抗体的制备

目的:原核表达EpCAM蛋白并制备抗EpCAM特异性单克隆抗体,初步鉴定相应单克隆抗体的特性。方法:PCR扩增EpCAM基因胞外区,将目的基因亚克隆至载体pET-28a(+),转化至大肠埃希菌株BL21,IPTG诱导表达,组氨酸亲和层析法纯化表达产物。纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,将成功免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,经ELISA筛选得到分泌特异性抗EpCAM的单克隆抗体的细胞株,免疫BALB/c小鼠进一步制备相应的单克隆抗体,并通过Western blot(蛋白质印记)和FACS(流式细胞分析)鉴定单抗的特异性及生物学活性。结果:成功构建重组表达载体pET28a-EpCAM并在大肠杆菌中获得表达,经His-tag亲和层析法获得纯化的EpCAM重组蛋白。EpCAM重组蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合、筛选,获得两株稳定分泌EpCAM抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4B2、2F2并免疫BALB/c小鼠获得相应的单克隆抗体。Western blot结果显示4B2腹水纯化所得单抗能够识别FaDu细胞系(人咽鳞癌细胞)中的EpCAM蛋白,但2F2未能识别FaDu细胞中的变性的EpCAM蛋白。FACS结果显示两者均能和FaDu细胞中天然的EpCAM蛋白结合。讨论:成功制备了抗EpCAM的单克隆抗体,并能够识别人咽鳞癌细胞系FaDu中表达的EpCAM,为进一步研究EpCAM抗体在肿瘤治疗中的作用提供基础。