一株耐低温石油烃降解菌的分离鉴定及其降解特性

目的:从污染环境中分离耐低温石油降解菌,并对其降解特性进行研究。方法:采用摇瓶富集培养和平板划线分离的方法,得到一株能以原油为碳源、能源生长的细菌菌株,采用分子生物学方法对该降解菌进行初步鉴定。结果:从天津大港油田污染土壤和水体中分离到一株耐低温石油降解菌DSY171,该菌株能够在10℃条件下,以石油为惟一碳源生长。经过对其形态特征、生理生化及16S rDNA序列分析,初步鉴定该菌株归属红球菌属。菌株DSY171在低温条件下(10～15℃)12 d的石油降解率显著优于常温条件(20～30℃),原油降解率为60%左右;菌株DSY171的pH适应范围较广,初始pH值为6～9时均能代谢生长,但在偏碱性环境下(pH7～9)的代谢生长好于偏酸性环境(pH6～7)。除了降解石油外,菌株DSY171对柴油、食用油等不同碳源也均能够降解代谢,具有一定的碳源利用广谱性。结论:耐低温石油降解菌DSY171的分离及其降解特性的研究,为生物学方法解决低温环境石油污染问题提供了高效菌种,在环境微生物学理论研究和实践应用中具有一定的意义和价值。     

一株高效DEHP降解菌的分离、鉴定及其降解特性

【目的】分离得到高效的邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)降解菌。【方法】采用富集培养法筛选分离菌株,并对菌株进行驯化;通过PCR扩增得到其16S rRNA和gyrB基因序列,进行同源序列分析及分子系统发育树的构建,同时结合形态学观察和生理生化实验对菌株进行初步鉴定;采用高效液相色谱(HPLC)分析菌株对DEHP的降解特性。【结果】分离得到一株能以DEHP为唯一碳源和能源生长的菌株,命名为HS-NH1,初步鉴定其为戈登氏菌(Gordoniasp.)。菌株HS-NH1最适的生长和降解条件为30°C、pH 7.0,在此条件下,该菌株60 h内能够将浓度为500 mg/L的DEHP降解90%以上。高效液相色谱(HPLC)分析表明,菌株HS-NH1在降解DEHP过程中产生了一种重要的中间代谢产物——邻苯二甲酸。底物广谱性试验证明,菌株HS-NH1能够有效地利用多种常见的邻苯二甲酸酯(PAEs)与芳香族衍生物。【结论】筛选得到了一株DEHP降解菌Gordonia sp.HS-NH1,该菌降解效率高,具有良好的底物广谱性,在邻苯二甲酸酯类化合物的污染治理中将会有一定的应用潜力。     

尼古丁降解菌SCUEC1菌株的分离及其降解基因

【目的】分离并鉴定1株具有尼古丁降解能力的细菌,研究其尼古丁降解特性并对其降解基因进行分析,为尼古丁微生物降解提供基础。【方法】从烟草种植地土壤中分离1株具有尼古丁降解能力的细菌,通过16S r RNA基因和生理生化特性对该菌株进行鉴定,检测该菌株尼古丁降解率与生长量的关系,并进一步对该菌株进行尼古丁浓度耐受性测定,采用高通量测序技术对菌株进行全基因组测序,BLAST比对分析尼古丁降解相关基因。【结果】筛选到1株具有尼古丁降解能力的细菌,经鉴定命名为根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumerficience)SCUEC1菌株,根癌土壤杆菌SCUEC1菌株尼古丁降解率可达到94.81%,该菌株在尼古丁浓度为0.50–5.00 g/L范围内生长良好且有较高的尼古丁降解能力。对根癌土壤杆菌SCUEC1菌株全基因组序列进行BLAST比对分析,推测该菌株的尼古丁降解代谢途径与中间苍白杆菌SYJ1菌株的尼古丁降解途径相似。【结论】本研究揭示了Agrobacterium tumerficienceSCUEC1菌株具备尼古丁降解特性,初步推测出尼古丁降解相关基因和降解代谢途径,为尼古丁微生物降解提供基础。     

低温石油降解菌LHB16的筛选及降解特性研究

目的:筛选、鉴定低温石油降解菌并对其降解特性进行研究.方法:富集分离低温石油降解菌;采用形态学、生理生化实验和分子生物学方法进行菌种鉴定;紫外分光光度法和GC-MS检测石油降解特性.结果:自盘锦油田低温环境土样中分离到1株低温菌,命名为LHB16,该菌能以石油烃为惟一碳源和能源.经鉴定为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia).该菌生长温度范围0℃～35℃,最适生长温度15℃.在接种量为2%(V/V),原油浓度为0.5%(W/V),振荡培养10 d时,降解率可达80.16%.石油中长链烷烃C15～C32被完全降解.传代培养数代,降解率为81.06%,降解性能稳定.结论:菌株LHB16在低温地区石油污染的生物治理中有良好的应用前景.     

低温氨氮降解菌的筛选及降解能力研究

目的:筛选低温高效氨氮降解菌株,探讨其脱氮能力。方法:采用富集培养和纳氏试剂平板显色法分离筛选低温高效氨氮降解菌株;通过形态与生理生化特性、16S rDNA序列分析以及BIOFOSUN微生物鉴定分析系统鉴定菌株,采用液体培养研究菌株的氨氮降解能力和反硝化能力。结果:获得1株低温高效氨氮降解菌株WSW-1001,经形态、生理生化特性、16S rDNA序列以及BIOFOSUN微生物鉴定分析系统鉴定为荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens)。该菌株具有较强硝化和反硝化能力,初始氨氮浓度为5 mg/L,8℃培养24 h,氨氮降解率71.7%,无亚硝酸盐积累。结论:菌株WSW-1001低温氨氮降解能力较强,具有潜在应用价值。     

DBP降解菌株XJ1的分离鉴定及其降解特性

目的：从湘江底泥筛选分离出能够高效降解邻苯二甲酸二丁酯（DBP）的菌株,对其进行鉴定和降解特性研究。方法：采用DBP为唯一碳源和能源的无机盐培养基,通过富集培养、平板划线分离得到一株优势菌,编号为XJ1。采用形态学、生理生化、（G＋C）mol%和16SrDNA序列分析进行鉴定。采用高效液相色谱测定菌株XJ1在摇瓶中对DBP的降解能力,并进行DBP代谢产物的分析和底物广谱性测试。结果：鉴定该菌株为Sphingomonsasp.。摇瓶实验结果表明：最佳降解条件为温度35℃,初始pH为7.0,转速150r/min;在最佳的降解条件下,40h之内DBP可完全降解。HPLC-UV检测出的中间代谢产物为邻苯二甲酸单丁酯（MBP）和邻苯二甲酸（PA）。底物广谱性实验表明菌株XJ1能够利用邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯等邻苯二甲酸酯类化合物。结论：菌株XJ1对DBP具有高效的降解能力,在处理含有邻苯二甲酸酯类化合物污染的生物修复方面具有独特的应用潜力。     

对硝基苯酚降解菌Pseudomonas sp. PDS-7的降解特性及 其降解相关基因的克隆

[目的]本研究的目的是分离对硝基苯酚(PNP)降解菌,研究其对PNP的降解特性;克隆其降解相关基因,并进行表达.[方法]本研究通过富集培养法和系列稀释平板涂布法分离PNP降解菌株;采用形态观察、生理生化特征测定和16S rDNA分析对菌株进行初步鉴定;通过摇瓶试验研究菌株降解特性;利用SEFA-PCR技术克隆降解相关基因,并亚克隆到表达载体pET29a中,构建重组表达质粒pETpnpC,再转入受体菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达;通过分光光度法测定表达产物的酶活力.[结果]分离到一株PNP降解菌PDS-7,将该菌株鉴定为假单胞菌属(Pseudomonassp.);该菌株能够以PNP作为唯一碳源、氮源和能源生长,菌株对PNP的最高耐受浓度为80 mg/L,最适降解温度为30℃,偏碱性条件有利于菌株对PNP的降解;克隆了PNP降解过程中的偏苯三酚1,2-双加氧酶基因pnpC及马来酰醋酸还原酶基因pnpD(GenBank登陆号EU233791);将pnpC在E.coli BL21(DE3)菌株进行了诱导表达,表达产物对偏苯三酚和邻苯二酚均有邻位开环活性,比活力分别为0.45 U/mg protein和0.37 U/mg protein,表明偏苯三酚1,2-双加氧酶基因pnpC得到了活性表达.[结论]分离鉴定了一株PNP降解菌Pseudomonas sp.PDS-7,研究了该菌株的降解特性,克隆和表达了降解相关基因.     

一株吡虫啉杀虫剂降解菌BB-1的分离鉴定

目的:从福建安溪茶园土壤分离能降解吡虫啉杀虫剂的细菌菌株,对其进行分类鉴定.方法:采用室内培养试验方法,通过富集驯化、平板划线分离得到1株优势细菌BB-1,采用形态、生理生化特征和16S rDNA序列分析对菌株BB-1进行鉴定.结果:菌株BB-1 与多株苍白杆菌(Ochrobactrum)的亲缘关系最近,该菌株鉴定为苍白杆菌属(Ochrobactrum sp.).BB-1在吡虫啉浓度为400mg/L的LB培养基中培养0h～5h为生长延迟期,4h～20h为对数生长期,20h～42h为稳定期,42h以后为衰亡期.菌株BB-1对多种抗生素敏感,可耐受的NaCl浓度超过10%.结论:BB-1能降解吡虫啉杀虫剂,分类上应属于Ochrobactrum sp..     

一株甲醛降解菌鉴定及其降解性能研究

目的:从实验室的动物肝脏浸置标本分离得到一株甲醛降解菌CSLG1,并考察其对甲醛的降解特性。方法:通过形态学和18S rDNA测序鉴定菌种,改变液体培养基中甲醛浓度确定该菌株的甲醛抗性,并在较高甲醛浓度的培养基中测定菌株CSLG1的生长曲线,证实其对甲醛具有降解能力。结果:鉴定结果显示,该菌CSLG1属于拟青霉属(Paecilomyces daclylethromorphus),其能在6.52 g/L的高甲醛浓度下生长;当甲醛初始浓度为3.73 g/L时,菌株CSLG1能在60 h内彻底降解。结论:菌种CSLG1对甲醛具有良好的降解效率,研究结果对甲醛污染环境的生物降解具有较好的科学意义和应用价值。     

CP1菌株的分离、筛选及其对毒死蜱的降解

从生产毒死蜱的农药生产厂曝气池中分离、筛选到降解毒死蜱且能以毒死蜱为唯一碳源生长的微生物菌株,命名为CP1。根据该菌株的Biolog特性鉴定和16S rRNA序列相似性分析,初步鉴定该菌为苍白杆菌属(Ochrobactrum sp.)。利用正交实验和Box-Behnken响应面法对影响CP1菌株降解毒死蜱的主要因素进行优化分析,得到菌株CP1对毒死蜱的最适降解条件为:农药浓度100 mg/L,pH值7.0,温度为28.5°C。优化后,CP1对毒死蜱的降解率由最初的70.26%提高到75.18%。毒死蜱降解优化试验提高了CP1菌株对毒死蜱的生物降解性能。     

苯酚高效降解菌的筛选和降解特性的研究

从天津市煤气厂的活性污泥中筛选、分离得到一株高效苯酚降解菌。经BIOLOG细菌自动鉴定系统及16SrDNA鉴定,该菌株为粪产碱杆菌(Alcaligenesfaecalis)。苯酚降解实验证实,该菌能在76h内完全降解1600mg·L-1的苯酚,并且随着苯酚浓度的增加,底物抑制作用增强,细胞得率下降。     

一株苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性

本研究采用逐量分批驯化的方法,从造纸废水中分离得到一株能够以苯酚为唯一碳源生长的苯酚降解菌株F5-1.经形态观察、生理生化特性鉴定及16S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为克雷伯菌(Klebsie-lla sp.).该菌株能够在7 h时完全降解初始浓度为100 mg/L的苯酚,降解苯酚主要发生在生长对数期;在pH 5.0～9.0,NaCl浓度0～80 g/L,温度20～40℃范围内,菌株F5-1均可有效降解初始浓度为100～1 200 mg/L的苯酚;能够耐受的最大苯酚浓度为1 500 mg/L.本研究结果表明,F5-1菌株对处理环境条件复杂的含酚废水具有潜在的应用前景.     

降解农药的微生物

按农药的品种综述了降解农药的微生物种类。降解农药的细菌主要有假单胞菌属、芽孢杆菌属、黄杆菌属、产碱菌属、节细菌属等 ;降解农药的真菌主要有曲霉属、青霉属、根霉属、木霉属、镰刀菌属等 ;降解农药的放线菌主要有诺卡氏菌属、链霉属等。     

芘降解质粒提取方法的研究

采用碱裂解法、化学改良方法、CTAB法、酚氯法等4种方法提取从泉州红树林沉积物中筛选出多环芳烃降解菌群YL的质粒,并分别转化至大肠杆菌感受态细胞,然后采用富集筛选的手段,最终确立最佳方案得到一组质粒转化菌群.该转化菌群可以利用芘作为其生长的惟一碳源和能源,并能在21 d内将50 mg·L-1的芘降解85.69%.而受体菌E.coli DH5α的芘降解率仅为2.006%.由此可以证明,降解质粒已成功转化进宿主细胞,并发挥降解作用.YL的质粒含有降解芘的基因.     

氯苯降解菌的筛选鉴定及降解特性研究

本文采集化工厂排污口的污泥样品, 在含有氯苯为唯一碳源的基本培养基中, 先后分离筛选出7株能够降解氯苯的微生物菌株。通过对分离菌株的16S rRNA基因序列进行分析, 发现其中5株细菌分别属于放线菌目的考克氏菌属(KD139)、红球菌属(KD140和KD142)和节杆菌属(KD230和KD232), 1株细菌属于杆菌目的芽胞杆菌d属(KD178), 另外1株细菌属于黄色单孢菌目的寡食单胞菌属(KD237); 同时我们构建了系统进化树, 确定分离菌株的相对进化地位。本文还利用气相色谱方法, 对分离菌株降解氯苯的能力进行了初步分析, 其中寡食单胞菌KD237降解氯苯能力最高, 24 h内氯苯分解率达60.78%。     

Microorganisms Degrading Polychlorinated Biphenyls

Four strains belonging to the genus Bacilluscapable of degrading polychlorinated biphenyls (PCBs) were isolated by screening collection strains of soil bacteria degrading an organochlorine pesticide, hexachlorocyclohexane (HCCH). A method for production of tritium-labeled PCBs was developed. Consumption and degradation of PCBs by the soil bacterial strains selected were studied using tritium-labeled PCBs and GLC. It was demonstrated that PCBs are degradable both in culture media and in model soil samples.     

烯唑醇降解菌的分离筛选及降解特性研究

从生产烯唑醇的农药厂废水处理池的活性污泥中驯化、分离得到6株能以烯唑醇为唯一碳源士长的细菌,分别命名为1#、2#、3#、4#、5#、6#。实验结果表明,这六种菌都足好氧菌种,对烯唑醇降解率大于30％的有1#、3#、4#、6#,其中1#为优势菌种。该优势菌降解烯唑醇的最适温度为30～35℃,最适pH值为7．0,投加0．404mg／L的菌株母液量为10％,烯唑醇的最佳初始浓度为30mg／L。该菌在上述最适条件下,150r／min摇床培养6d,埘怖唑醇的降解率可达78．14％;优势菌1#单菌对烯唑醇的降解要比复合菌对其降解的效果好。     

一株联苯降解菌的特性及鉴定*

从华北油田污染土壤中筛选出一株能够以联苯为唯一碳源和能源生长的菌株。该菌生长的最适联苯浓度为0．2％～0．4％,在联苯浓度为0．1％的培养基中培养36h后降解率达99．8%。该菌还可以降解苯甲酸钠、邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚和多氯联苯Aroclorl221、Aroclorl242等芳香族化合物。通过16S rDNA基因序列分析鉴定该菌为嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)。     

Community and Proteomic Analysis of Methanogenic Consortia Degrading Terephthalate

Degradation of terephthalate (TA) through microbial syntrophy under moderately thermophilic (46 to 50°C) methanogenic conditions was characterized by using a metagenomic approach (A. Lykidis et al., ISME J. 5:122–130, 2011). To further study the activities of key microorganisms responsible for the TA degradation, community analysis and shotgun proteomics were used. The results of hierarchical oligonucleotide primer extension analysis of PCR-amplified 16S rRNA genes indicated that Pelotomaculum, Methanosaeta, and Methanolinea were predominant in the TA-degrading biofilms. Metaproteomic analysis identified a total of 482 proteins and revealed a distinctive distribution pattern of microbial functions expressed in situ. The results confirmed that TA was degraded by Pelotomaculum spp. via the proposed decarboxylation and benzoyl-coenzyme A-dependent pathway. The intermediate by-products, including acetate, H₂/CO₂, and butyrate, were produced to support the growth of methanogens, as well as other microbial populations that could further degrade butyrate. Proteins related to energy production and conservation, and signal transduction mechanisms (that is, chemotaxis, PAS/GGDEF regulators, and stress proteins) were highly expressed, and these mechanisms were important for growth in energy-limited syntrophic ecosystems.     

真菌细胞溶壁酶的产酶培养和应用效果

从土样中分离的７１株木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｓｐ．）筛选出一株分解几丁质和葡聚糖能力较强的菌株。该菌株在麸皮、稻草粉、硫酸铵和诱导物为主成份的固体培养基上,经过２５℃、８４ｈ的培养,产生较高的真菌细胞溶壁酶,能溶解酵母、毛霉、黑曲霉及食用菌等丝状菌丝体的细胞壁,形成原生质体,经选用酵母、毛霉等进行原生质体再生,效果较优。