小鼠骨髓 内皮细胞无血清条件培养液及其超滤组分对粒巨噬系祖细胞？…

本研究通过传代培养小鼠骨髓内皮细胞系细胞,惧无血清条件培养液（ｍＢＭＥＣ－ＣＭ）,将其作多级串联超滤,获得分子量大于１０、３￣１０、１￣３、０．５￣１ｋＤ和小于０．５ｋＤ超滤组分。进行粒巨噬系造血祖细胞集落形成试验。检测了它们的ｍＢＭＥＣ－ＣＭ和３￣１０组分对粒巨噬系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）生长未见明显影响,而分子量大于１０ｋＤ和０．５￣１ｋＤ组分促进ＣＦＵ－ＧＭ的增殖,分子量１￣３ｋＤ和小于０．５     

骨髓内皮细胞无血清条件培养液对骨髓内皮细胞增殖的促进作用

本文通过制备小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液(serum-free murine bone marrow endothelial cell conditioned medium, mBMEC-CM),经超滤分为分子量>10 kDa组分和<10 kDa组分,分别观察mBMEC-CM原液及其组分以及外源性细胞因子对小鼠骨髓内皮细胞集落生成的影响。用Wright’S Giemsa染色计数内皮细胞集落及检测骨髓内皮细胞的vWF,通过[3H]- TdR掺入量,观察mBMEC-CM原液及其组分以及外源性细胞因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的影响,并用分子杂交方法检测内皮细胞表达的细胞因子,从几个方面来研究mBMEC-CM对骨髓内皮细胞增殖的作用。结果显示,骨髓内皮细胞vWF 检测阳性。mBMEC-CM原液及其分子量>10 kDa组分能刺激骨髓内皮细胞集落增殖,且能明显增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR 掺入量;分子量<10 kDa组分对骨髓内皮细胞集落增殖无明显刺激作用,也不能增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR掺入量。外源加入IL-6、IL-11、SCF、GM-CSF、VEGF、bFGF 6种细胞因子能明显刺激骨髓内皮细胞集落增殖,SCF、VEGF、bFGF能明显增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR掺入量。Atlas array膜杂交实验显示骨髓内皮细胞内源性表达GM-CSF、SCF、MSP-1、endothelin-2、thymosin β10、connective tissue GF、PDGF-A chain、MIP-2α、PlGF、neutrophil activating protein ENA-78、INF-γ、IL-1、IL-6、IL-13、IL-11、inhibin-α等细胞因子的mRNA。上述结果提示,骨髓内皮细胞无血清条件培养液对骨髓内皮细胞增殖具有促进作用。     

小鼠骨髓内皮细胞条件培养液复合FL及TPO对HPP—CFC及CFU—GM增殖的影响

通过传代培养小鼠骨髓内皮细胞,收集无血清条件培养液（ECM）,并经超滤得到大于10kD的浓缩液,分别观察ECM和大于10kD的浓缩液复合flt3ligand(FL)及thrombopoietin(TPO)对体外培养HPP-CFC、CFU-GM的影响,结果表明：ECM或大于10kD的浓缩液对HPP-CFC、CFU-GM的生长均有支持作用;FL或/和TPO与ECM或大于10kD的浓缩液合用能加强对HPP-CFC、CFU-GM生长的刺激作用;FL加TPO与ECM或大于10kD的浓缩液合用对HPP-CFC、CFU-GM生长的刺激作用更加明显;选择FL和TPO特异性的引物,用RT-PCR技术未能检测到小鼠骨髓内皮细胞有FL和TPOmRNA的表达。     

紫色杆菌内毒素对小鼠粒-巨系祖细胞(CFU-GM)的动员

本文研究了低毒性的紫色杆菌内毒素对小鼠 CFU-GM 的动员作用,并对其作用机制作了初步探讨。小鼠周围血中 CFU-GM 数随着静脉注射内毒素量的增加而升高。高峰出现在注射后的第三天,为对照组的2.1倍。同时骨髓 CFU-GM 数逐渐下降。脾脏不影响内毒素的动员作用。但在去除肾上腺的小鼠身上,内毒素失去动员作用。结果表明紫色杆菌内毒素是一种比较安全、有效的干细胞动员剂。其动员机制很可能是通过肾上腺或皮质类固醇激素的介导而产生作用。     

锂对小鼠高增殖潜能集落形成细胞和粒巨噬系祖细胞体外增殖…

本文观察了锂对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨髓高增殖潜能集落形成细胞和粒巨噬系祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ体外增殖的影响。ＨＰＰ－ＣＦＣ集落由ＩＬ－１,ＩＬ－６,ＷＥＨＩ３条件培养液及Ｌ９２９条件培养液所支持,而ＣＦＵ－ＧＭ由ＷＥＨＩ３－ＣＭ所支持。结果显示,ＬｉＣｌ浓度在０．４－２ｍｍｏｌ／Ｌ时呈现剂量依赖性抑制ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖;而在０．４－１ｍｍｏｌ／Ｌ的浓度范围内,则对ＣＦＵ－ＧＭ的增殖起剂量依赖性促进作用。     

藏药巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤小鼠粒-巨噬系造血功能的影响及机理研究

目的探讨藏药巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤小鼠粒-巨噬系造血功能的影响及可能机理。方法60Coγ射线照射和环磷酰胺腹腔注射方式制造放射线-化学复合损伤小鼠模型,采用外周血细胞计数、造血祖细胞集落分析、实时荧光定量PCR,检测灌胃不同浓度巴桑母酥油丸后不同时间放射线-化学复合损伤小鼠外周白细胞数、骨髓粒-巨噬系(CFU-GM)造血祖细胞集落产率、粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)和粒-巨噬系集落刺激因子受体(GM-CSF R)mRNA相对表达量。结果灌胃14 d后,中、高剂量组的白细胞数显著高于生理盐水组;中剂量巴桑母酥油丸灌胃14 d后,骨髓CFU-GM集落产率、GM-CSF mRNA和GM-CSFR mRNA也显著高于空白组、生理盐水组。结论适当浓度的巴桑母酥油丸可以通过上调骨髓GM-CSF、GM-CSFR mRNA表达、促进CFU-GM增殖分化,进而促进放射线-化学复合损伤后小鼠外周血白细胞数的提前恢复。     

锂对小鼠高增殖潜能集落形成细胞和粒巨噬系祖细胞体外增殖的影响

本文观察了锂对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨髓高增殖潜能集落形成细胞（ＨＰＰ－ＣＦＣ）和粒巨噬系祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ体外增殖的影响。ＨＰＰ－ＣＦＣ集落由ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＷＥＨＩ３条件培养液（ＷＥＨＩ３－ＣＭ,含有ＩＬ－３）及Ｌ９２９条件培养液（Ｌ９２９－ＣＭ,含有Ｍ－ＣＳＦ）所支持,而ＣＦＵ－ＧＭ由ＷＥＨＩ３－ＣＭ所支持。结果显示,ＬｉＣｌ浓度在０．４－２ｍｍｏｌ／Ｌ时呈现剂量依赖性抑制ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖;而在０．４－１ｍｍｏｌ／Ｌ的浓度范围内,则对ＣＦＵ－ＧＭ的增殖起剂量依赖性促进作用。这些结果提示ＬｉＣｌ对ＨＰＰ－ＣＦＣ和ＣＦＵ－ＧＭ的作用不同,可能锂有诱导ＨＰＰ－ＣＦＣ向成熟细胞分化的作用     

小鼠骨髓高增殖潜能内皮祖细胞的培养与纯化（简报）

1997年Asahara等在人外周血中发现内皮祖细胞（endothelial progenitorcell．EPC）,随后有文献报道,从骨髓中分离出EPC．异体骨髓移植研究显示成体外周血EPC来源于骨髓。许多作者报告EPC参与生理性和病理性血管新生．具有潜在的临床应用前景。目前关于EPC的不少基本生物学问题尚不完全清楚,其生理和病理意义也有争议。     

小鼠胎肝和骨髓造血基质细胞贴壁层对红系祖细胞生长的影响

本实验以Dexter培养体系作小鼠胎肝和骨髓造血基质细胞贴壁培养。在所获的基质细胞贴壁层上作红系造血祖细胞集落培养,观察两种来源造血基质细胞对红系集落生长的影响。实验结果表明,胎肝造血基质细胞贴壁层能明显促进早期红系造血祖细胞(BFU-E)形成集落,却不明显影响晚期红系造血祖细胞(CFU-E)的生长。成年小鼠骨髓造血基质细胞贴壁层对BFU-E和CFU-E均有刺激生长的作用;但对前者生长的刺激性影响较胎肝造血基质细胞贴壁层为弱。造血基质细胞贴壁层对红系集落生长的促进作用主要是通过体液因子实现的,细胞间短距离调节的影响亦不能除外。     

狗骨髓长期培养的贴壁层细胞及条件培养液对粒系祖细胞的影响

本文报告狗骨髓长期培养的初步研究结果。采用马血清与狗血清混合加入培养体系中,可建立起比较稳定的贴壁细胞层,可以维持19周以上。但是,这种贴壁层不能有效地维持造血干细胞的增殖与分化,上清液中血细胞与GM-CFU_C的数目,在第二次接种骨髓后2—3周即迅速下降。狗骨髓培养的条件液中存在着抑制GM-CFU_C生长的物质,但它对小鼠骨髓GM-CFU_C和CFU-S无影响。如以贴壁细胞作为底层,用双层琼脂平皿培养法与正常狗骨髓共同培养,发现贴壁细胞不仅没有抑制反而有加强CSF刺激GM-CFU_C生长的作用。因此对狗骨髓长期培养体系不能长期支持造血干细胞生长和繁殖的可能原因尚须作进一步探索。     

施万细胞条件培养基对大鼠骨髓间质细胞的诱导分化作用

目的　探讨施万细胞条件培养基对大鼠骨髓间质细胞的诱导分化作用。方法　从大鼠骨髓中分离培养间质细胞并传至第 6代 ,诱导前 2 4h加 1μg·L-1碱性成纤维生长因子 (bFGF)入培养液中以促分裂 ,再以施万细胞条件培养基作诱导剂 ,观察细胞形态的变化 ,并采用免疫组织化学法对诱导后一周的细胞进行Map 2及NSE、GFAP表达的检测。结果　诱导后 48小时间质细胞在形态上表现为神经元样 ,神经元样细胞呈Map 2及NSE阳性 ,而GFAP显阴性。结论　施万细胞的上清液能诱导骨髓间质细胞分化为神经元样细胞。     

激活的星形胶质细胞条件培养液致痫效应及其对大鼠脑内Glu和IL-2R表达的影响

目的探讨激活的星形胶质细胞条件培养液(astrocytic conditioned medium,ACM)的致痫效应及其对脑内谷氨酸(Glu)和白细胞介素-2受体(interleukin-2recepter,IL-2R)表达的影响。方法本研究通过体外分离纯化培养,获取大鼠大脑皮质星形胶质细胞(Ast),用睫状神经营养因子(cliary neurotrophic factor,CNTF)激活Ast,取其培养液。将大鼠随机分为2组:A组(生理盐水对照组)和B组(ACM组)。对大鼠行侧脑室注射相应试剂后,观察并记录大鼠行为,采用免疫组织化学方法检测海马及大脑皮质内Glu的含量及IL-2R的表达变化。结果大鼠在侧脑室注射ACM后,有痫样发作,程度达III-IV级。免疫组化染色显示,在注药后2h,该组的海马区及大脑皮质内Glu、IL-2R免疫应答阳性神经元均较对照组明显增多,免疫应答增强,有显著性差异(P<0.05)。结论星形胶质细胞激活后,其释放物有明显的致痫效应,其机制与促进脑内Glu和IL-2R表达有密切关系。     

局灶性脑缺血后海马齿状回神经发生及其与血管内皮生长因子关系的研究

目的研究成年大鼠局灶性脑缺血后海马齿状回（DG）神经发生的情况及其与血管内皮生长因子（VEGF）的关系,探讨脑缺血后神经发生及其调控机制。方法通过大脑中动脉阻断法（MCAO）建立大鼠局灶性脑缺血模型,以5-溴-2-脱氧尿核苷（BrdU）标记增殖的神经前体细胞（NPCs）,用免疫组化及免疫荧光双标记法动态检测脑缺血后不同时间DG神经细胞增殖及其分化,同时观察增殖细胞表达VEGF及其受体情况。结果与对照组相比,缺血侧DG的BrdU阳性细胞数在脑缺血后1d开始增加,7d达高峰,28d接近正常水平;BrdU/TuJ1、BrdU/MAP-2阳性双标细胞数在脑缺血后14d开始增加,28d达高峰;BrdU/GFAP阳性双标细胞数则无明显变化;增殖的BrdU阳性细胞同时表达VEGF及其受体FLK-1。结论大鼠局灶性脑缺血可激活DG自体NPCs原位增殖、分化,增殖的细胞同时表达VEGF及其受体可能是脑缺血后神经发生增强的调节机制之一。     

人骨髓细胞培养液中干细胞刺激物的分析研究

人骨髓细胞体外培养液中含有高活力的 CSF,在长期培养过程中,CSF 活力的变化,与 CFU-C 数量的变化有大致平行的趋势。这种 CSF 对狗和小鼠也同样有效。人骨體条件液中的 CSF 对培养中的 CFU-S 也有明显的激发作用。这一结论可以从几个方面获得证据:第一,小鼠骨髓细胞与人骨髓条件液保温六小时后,再测定其中 CFU-S 数,结果是增加了。第二,经亚致死剂量照射的小鼠,腹腔注射适量的人骨髓条件液,其内源性脾结节也明显增多。第三,采用阿糖胞苷自杀的方法,测定小鼠骨髓经与人骨髓条件液保温后,其中 CFU-S 的自杀率也有增高的趋势。上述几方面的实验,说明人骨髓长期培养中存在着某种活性物质,调节体外造血。至于这种物质的来源,以及在体外造血中所起的作用,还需要做很多工作,逐步予以澄清。     

血管内皮生长因子及其受体2与哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖关系的研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体2(Flk-1)在哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中表达变化及其对ASMC增殖的影响。方法 SD大鼠18只,随机分为对照组,哮喘模型组和地塞米松干预组各6只,并培养各组气道平滑肌细胞。用免疫组织化学技术检测ASMC增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;用RT-PCR及Western blot方法分别检测VEGF和Flk-1mRNA及蛋白质在不同组大鼠ASMC的表达程度。结果(1)哮喘模型组ASMC PCNA表达较对照组和干预组显著增加(P0.05)。(2)哮喘模型组ASMC VEGF164,VEGF188mRNA和VEGF205mRNA的表达较对照组和干预组显著增加(P0.05或P0.01)。(3)哮喘模型组ASMC VEGF及Flk-1蛋白质在大鼠ASMC中的表达较对照组和干预组显著增加(P0.05)。直线相关性分析显示,大鼠ASMC PCNA表达与大鼠ASMC中VEGF205,188,164及Flk-1mRNA表达水平呈正相关(r分别为0.79,0.86,0.83,0.68;P0.05);大鼠ASMC PCNA表达与大鼠ASMC中VEGF及Flk-1蛋白质表达水平也呈正相关(r分别为0.80,0.77;P0.05)。结果 哮喘模型大鼠ASMC中VEGF及其受体Flk-1表达上调,并与气道平滑肌细胞增殖有密切关系。该结果提示VEGF及其受体2可能参与了哮喘气道重建中气道平滑肌细胞增殖的过程。     

星形胶质细胞条件培养液对活性氧所致的神经元损伤的防护作用

本文以活性氧叔丁基脂氢过氧化物tbOOH应激PC12神经元细胞,造成PC12神经元损伤、死亡;以分离、纯化的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞制备的无血清条件培养液培养tbOOH损伤的神经元细胞。采用快速灵敏的MTT比色法测定神经细胞活力,用Olym—pus光学显微镜观察神经细胞的形态学变化。结果发现神经元细胞活力由0．179±0．037上升至0．563±0．025,细胞数目明显增多,细胞死亡残留碎片明显减少,表明星形胶质细胞条件培养液可能有防护tbOOH致的神经元损伤作用,具抗氧化能力。     

巨噬细胞条件培养基对小脑皮质神经元生存的影响

用快速自动比色微量分析法检测巨噬细胞条件培养基(MφCM)对体外培养的生后7天SD大鼠小脑皮质神经元的作用。实验结果表明,MφCM具有支持神经元生存及增强其活性的作用。此作用以细胞密度1×10~5/孔,MφCM加入量10μl/孔为显著(P<0.05)。不同分子量的MφCM对神经元的作用亦有不同,>10KD分子量的MφCM比<10KD的作用强。