若干理化因素对萌发的小麦种子α-淀粉酶同工酶的作用

用DEAE-纤维素层析可以将萌发的小麦种子α-淀粉酶分成两个组分:α-淀粉酶Ⅰ和α-淀粉酶Ⅱ。α-淀粉酶Ⅰ对高温和Hgcl_2很敏感,而α-淀粉酶Ⅱ对高温和HgCl_2却很稳定。EDTA是两种淀粉酶的抑制剂。CaCl_2对两种同工酶的作用看来比较复杂。低pH(3.6)对两种同工酶的作用未发现明显差别。     

大豆叶片淀粉酶的特性

大豆叶片的α—淀粉酶对SH—反应剂不敏感,在pH3.6时失活Ca~(2 )使它的耐热性提高至70℃.β—淀粉酶对SH—反应剂敏感,耐酸至pH 2.3,耐热至60℃. 随着叶龄的增长α—淀粉酶的同工酶数目增加,此酶在一般情况下不需要添加Ca~(2 ),EDTA对它起不可逆的失活作用,β—极限糊精及Ca~(2 )可排除EDTA对酶的影响。此酶可能是Ca—金属酶,Ca~(2 )与酶结合紧密,它位于酶的活性中心或附近。 在体外,大豆叶片α—淀粉酶可被自身的淀粉粒吸附,但容易被 pH5的醋酸缓冲液洗脱。     

水稻种子萌发过程中α 淀粉酶与萌发速率关系的分析

用丙烯酰胺凝胶电泳技术和3,5_二硝基水杨酸（DNS）测定还原糖法,对不同萌发时间农垦58F、农垦58S和农垦58种子胚中α_淀粉酶同工酶及其酶活性变化进行研究。0～36小时萌发过程中,农垦58F和农垦58S α_淀粉酶活性高于农垦58。胚中检测出五条酶。A2、A4和A5为上述种子共有酶带。A3为农垦58F和农垦58S特异性酶带。A1为农垦58特异性酶带。据此认为α_淀粉酶对水稻种子萌发速度起重要调控作用。A1和A3可能是调控种子发芽快慢的重要酶分子。     

外源脱落酸和马来酰肼对杂交水稻F1穗上种子发芽的抑制效应

杂交稻F1齐穗后21 d(灌浆期)施用ABA 1000mg/L或MH 4000 mg/L,可以抑制穗芽的发生,降低种子活力.ABA处理F1发芽种子使GA1含量下降,淀粉酶活性表达滞后,活性下降,有效发芽期延长;MH处理没有引起F1发芽种子GA1含量与淀粉酶活性下降,但使未发芽种子中GA1与淀粉酶活性明显下降,并丧失发芽能力.因此,ABA对杂交稻F1穗芽的抑制作用可视为"后熟效应",而MH对穗芽的抑制作用可视为"遏制作用".     

耐高温α-淀粉酶基因在马铃薯中的表达

我们将从地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)克隆的约1．68kb的耐高温α-淀粉酶基因构建成表达载体,并转入根癌农杆菌。以马铃薯栽培品种“杂交荷兰7号”块茎圆盘为外植体,按本实验室建立起的再生实验系统[9]及杨美珠等的方法[8]进行转化。采取共培养、芽的诱导、芽的选择再生三步方法获得抗性芽。将抗性芽通过先诱导生根壮苗,再进行卡那霉素筛选,最后再诱导生根的方法得到可能的转基因植株。 对部分可能的转基因植株按改进的王广立等的PCR简单快速鉴定转基因植物的方法[12]进行检测,株号102001、102607、110402均可见到特异性片段的存在。参照张振清[13]及王福荣等[14]的方法对这些植株进行耐高温α—淀粉酶活力测定,这些植株具有相对较强的耐高温α—淀粉酶活性。实验结果表明,耐高温α—淀粉酶基因可能已转入上述植物基因组中,并获表达。     

α-淀粉酶在短短芽孢杆菌中的分泌表达

应用PCR技术从枯草杆菌168中分离出α－淀粉酶基因。将其引入分泌表达载体pBKE50后,用Tris-PEG法转入短短芽孢杆菌50中,发现α－淀粉酶以活性形式被分泌表达。酶测活分析表明α－淀粉酶活性约为出发菌枯草杆菌168的1.7倍。     

杂交水稻和不育系种子的劣变与生理生化变化

杂交水稻和不育系种子在人工加速老化处理后,其发芽率、发芽指数和活力指数均比常规水稻种子下降迅速。在人工老化过程中,前者种子浸泡液的外渗氨基酸和钾离子含量均比后者高,游离的有机酸、氨基酸和脂肪酸含量增加的速度相似,均大于常规水稻种子。蛋白酶活性和可溶性蛋白质含量的增减,在易发生劣变种子与常规水稻种子之间均有显著差异。     

通过同源介导α-淀粉酶基因扩增改良地衣芽孢杆菌α-淀粉酶生产菌株

地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶(BLA)是淀粉水解与生物加工过程中重要关键酶制剂之一.为了进一步提高地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶生产菌株的生产性能,本研究构建了一种含有地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶编码基因amyL的整合性重组质粒pBL-amyL.将重组质粒pBL-amyL转化入BLA工业生产菌株Bacillus licheniformis B0204,再在卡那霉素存在下介导其B.1icheniformis B0204染色体中的同源整合与高温α-淀粉酶编码基因amyL的扩增,由此获得了携带多个amyL拷贝的转化子.对转化子的amyL拷贝数及其BLA发酵水平分别用荧光实时定量PCR及摇瓶发酵试验进行评价与鉴定.与出发菌株B0204相比,含2～5倍amyL拷贝数的重组菌的BLA的合成水平显著提高.其中,重组菌REBL18生产BLA的水平提高了89.2%.     

高温α-淀粉酶生产菌种选育的研究

以地衣芽孢杆菌B．198为出发株,经不同诱变剂反复诱变和自然选育,得到突变株A.404l,其产高温α-淀粉酶为出发株的100倍。在摇瓶培养条件下,酶活力达200u／ml．是一株无孢子并带有Rifr、Met-、Arg-标记的抗分解代谢阻遏突变株。初步纯化的A1041α-淀粉酶最适反应pH为5—7,晟适反应温度90—95℃,于90℃、60分钟处理不失活,表明突变株A．4041所产α-淀粉酶是高温淀粉酶,具有工业生产价值。     

水稻种子萌发过程中α—淀粉酶与萌发速率关系的分析

用丙烯酰胺凝胶电泳技术和3,5－二硝基水杨酸（DNS）测定还原糖法,对不同萌发时间农垦58F,农垦58S和农垦58种子胚中α－淀粉酶同工酶及其酶活性变化进行研究,0－36小时萌发过程中,农垦58F和农垦58Sα-淀粉酶活性高于农垦58。胚中检测出五条酶,A2,A4和A5为上述种子共有酶带,A3为农垦58F和农垦58S特异性酶带,A1为农垦58特异性酶带,据此认为α-淀粉酶对水稻种子萌发速度起重要调控作用,A1和A3可能是调控种子发芽快慢的重要酶分子。     

米曲霉5037α-淀粉酶性质的研究

米曲霉(Aspergillus oryzae)5037产生的α-淀粉酶,酶反应最适温度范围为55—63℃,以60℃为最好。反应pH范围在4.4—6.0之间,最适PH为4.8—5.2。酶的pH稳定性为5.5—8.5。酶的热稳定性在50℃以下较好,加Ca~( )对酶的稳定性有显著的作用。凝胶电泳分析,此菌株产生的酶系较纯。酶作用产物为糊精和低聚糖,延长反应时间则产生麦芽三糖和多量麦芽糖以及部分葡萄糖。     

巨大芽孢杆菌α-淀粉酶基因核苷酸序列分析

巨大芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＡＳ１．１２７的淀粉酶基因的全碱基序列已被测定。结构基因由１９８２ｂｐ的单一开读框架组成。由ＤＮＡ序列推测出的前体酶蛋白由６５９个氨基酸组成,Ｎ端３３个氨基酸为信号肽。成熟酶分子由６２６个氨基酸组成,分子量为６８６７６ｋＤ。该淀粉酶属糖化型α淀粉酶。并与枯草杆菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）１６８产生的糖化型α淀粉酶之间有８３３％的同源性。分析发现两种菌产生的酶分子的Ｎ端３／４的同源性为９０４％,而Ｃ端１／４的同源性只有７０％。序列排比结果说明在淀粉酶基因的趋异进化过程中,基因突变和遗传重组都曾起过作用。     

真菌α-淀粉酶的研究进展

真菌α-淀粉酶在现代淀粉糖浆、焙烤制品、啤酒酿制及生料酒精等行业已得到广泛的应用。随着现代制糖工业与发酵工业的发展及其对真菌α-淀粉酶的使用需求,使得真菌α-淀粉酶在现代工业酶制剂中占有重要地位。对真菌α-淀粉酶的研究和利用,为满足国内市场需求、调整我国酶制剂工业结构和带动相关食品或发酵行业的发展等具有重要意义。从真菌α-淀粉的催化机制、来源、异源表达及应用等方面进行了介绍。     

巨大芽孢杆菌α-淀粉酶基因核苷酸序列分析

巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)AS1.127的淀粉酶基因的全碱基序列已被测定。结构基因由1982bp的单一开读框架组成。由DNA序列推测出的前体酶蛋白由659个氨基酸组成,N-端33个氨基酸为信号肽。成熟酶分子由626个氨基酸组成,分子量为68.676kD。该淀粉酶属糖化型α-淀粉酶。并与枯草杆菌(B.subtilis)168产生的糖化型α-淀粉酶之间有83.3%的同源性。分析发现两种菌产生的酶分子的N-端3/4的同源性为90.4%,而C-端1/4的同源性只有70%。序列排比结果说明在淀粉酶基因的趋异进化过程中,基因突变和遗传重组都曾起过作用。     

耐高温α—淀粉酶在生产超高麦芽糖浆中应用的研究

本文着重研究了耐高温α－淀粉酶与ＢＦ－７６５８α－淀粉酶（即普通中温淀粉酶）在超高麦芽糖浆生产中的区别,使用耐高温α－淀粉酶可使淀粉液化更完全,并且可降低酶的用量,同时生产的超高麦芽糖浆中麦芽糖含量大大提高,具有一定的推广,使用价值。     

α-淀粉酶低温适应性分子机制的研究进展

低温酶由于在低温下仍能保持高催化活性而具有很高的工业应用价值。而关于低温酶是如何适应低温环境以及在低温下如何保持高催化活性等问题,同样引起了各国科学家们的广泛关注。其中低温α-淀粉酶是在结构和功能方面研究得最为透彻的酶,它也是第一个被结晶的低温酶,其热、动力学特征已通过内荧光法、圆二色性和差示扫描量热法等进行了深入研究。建立在三维结构分析和热力学特征研究的基础上,科学家们目前正尝试着解开低温酶的低温适应性之谜。对低温α-淀粉酶的研究进展作一简要的综述。     

植酸对杂交水稻V20B种子萌发及生理特性的影响

以杂交水稻V20B 为材料,研究外源植酸对种子萌发的影响。结果表明,外源植酸浓度为10 mmol/L 时能明显抑制种子萌发。生理生化检测表明,植酸对杂交水稻种子萌发过程中α-淀粉酶活性、可溶性糖和内源植酸含量变化有不同程度的影响。     

食品用米曲霉α-淀粉酶的制备

米曲霉(Aspergillus oryzae)突变株6-193麦麸固体培养物酶的浸出,采用自来水或pH4.6—5.0的缓冲液在室温至50℃之间浸泡1—2小时较好。用截流分子量10000的中空纤维超滤柱过滤即得高活力的浓缩酶液,制成食品用酶制剂,收率90%。制备粉剂时,酒精沉淀总收率为55.2%,丙酮沉淀总收率高达94.1%,冷冻干燥总收率达87.6%。     

α-淀粉酶高产菌株选育方法的研究

在含有氨苄青霉素1—10μg/ml的LB液体培养基中,接入枯芽孢杆菌BF7658菌悬液,在37℃下振荡培养3—5天,经平板分离单菌落以及摇瓶发酵试验,初筛获得2213、2104和2120等α-淀粉酶高产菌株。将2213菌株的菌悬液涂布于含有4-6μg/ml氨苄青霉素的2%淀粉培养基上,复筛得到4213、4218、4237等α-淀粉酶高产菌株。4213菌株再经4次亚硝基胍诱变,未能得到蛋白酶活性低、α-淀粉酶活性高的突变株。     

测定α-淀粉酶活性的凝胶扩散法和组织印渍法

建立了改良凝胶扩散法和组织印渍法检测α-淀粉酶活性的方法.此法的实验条件容易控制,重复性好.组织印渍法在玉米种子吸水约5 h后即可检测到α-淀粉酶活性.