064一种对乙型肝炎病毒快速基因分型的聚合酶链反应

根据基因组的差别,目前可以将全世界范围内的乙型肝炎病毒(HBV)分成A～F 6个基因型.鉴于HBV的基因型有典型的地域分布特点及不同基因型HBV可能在血清学反应、致病性、治疗反应等方面存在差异,进行HBV的基因分型对于弄清病毒传播和疾病发生具有重要意义.目前用于HBV基因分型的方法主要有种系发生分析和限制性片段长度多态性分析,但是这些方法存在不适合大规模基因分型工作和敏感性、特异性不足等方面的缺点.本文介绍了一种使用类型特异的引物进行聚合酶链反应(PCR)的简单、快速、特异的HBV基因分型方法.     

HBV感染免疫状态与HBV基因型关系研究思路

HBV感染免疫状态不同,临床意义不同;HBV基因型不同,导致病毒致病性、变异、抗病毒等临床疗效及预后不同.HBV感染临床意义的不同,是宿主与病毒共同作用的结果.将HBV感染免疫状态与HBV基因型结合在一起研究,探索广西桂北地区不同免疫状态下基因型的分布情况及HBV感染免疫状态与基因型的关系,并希期望能针对宿主免疫状态、病毒特性,为每一位HBV感染患者制订最好的治疗方案.     

广西桂北地区HBV感染者不同免疫状态HBV基因型分布研究

为了了解广西桂北地区乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染者基因型分布情况及探讨HBV感染不同免疫状态与基因型的关系。将HBV感染者按免疫耐受、免疫清除(应答)和免疫不全(病毒残留)三种免疫状态分类,各选150例,共450例,运用实时荧光定量PCR法检测HBV感染三种不同免疫状态者的HBV基因型。450例中B型为323例、C型为94例、B+C混合型为23例和非B非C型为10例;HBV感染三种免疫状态均B型占多数,分别为70.0%、78.0%和67.33%,不同免疫状态基因型构成比差异无统计学意义;免疫状态与基因型相关性无统计学意义;B型HBV-DNA载量高于C型,各组中年龄≥30岁者C型显著多于30岁者,差异有统计学意义;各基因型间丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)阳性率差别无统计学意义;男女基因型分布差异无统计学意义。结果表明,广西桂北地区HBV基因型以B型为主,C型占部分比例,少量B+C混合型,偶有未能分型;HBV感染免疫耐受、免疫清除(应答)和免疫不全(病毒残留)三种免疫状态均B型占多数,慢性HBV感染免疫状态与HBV基因型相关性无统计学意义。     

内蒙古地区乙型肝炎病毒的基因分型及临床意义

为了探讨乙型肝炎病毒在内蒙古地区的基因分型,为本地区乙型肝炎的临床治疗、病情进展和发病机制等方面研究提供有益的实验依据。2013年7月至2014年7月本研究在内蒙古自治区人民医院、内蒙古医科大学第一附属医院、通辽市医院的门诊及住院病例中随机选取已感染乙型肝炎病毒的253例。以荧光定量PCR法检测HBV基因分型和HBV病毒基因载量,Elisa法检测血清标志物HBeAg,全自动生化分析仪检测ALT、AST、TBA、TBIL和ALB。实验发现,内蒙古地区253例患者HBV基因分型结果以B型(49例,19.37%)、C型(188例,74.31%)为主,且C基因型显著多于B基因型(p<0.05);HBeAg阳性率为67.59%,且C基因型HBeAg阳性率高于B基因型;高载量病例中B型占31例(63.27%),而C型占162例(86.17%),C基因型组中HBV DNA载量显著高于B基因型组(p<0.01);B基因型与C基因型TBA、TBIL和ALB结果比较差异无统计学意义(p>0.05),但C基因型的ALT和AST这两项生化指标均显著高于B基因型组(p<0.05)。本研究结果初步说明,内蒙古地区HBV感染以B型和C型为主,尤以C型居多;且C型病毒的复制较活跃,致病力较强,HBV感染者更易转成严重肝病。     

应用系统发育树分析DDBJ基因库中HBV基因序列的基因型

为了充分利用核酸库中的HBV序列信息,探讨DDBJ核酸库中HBV基因序列的基因分型,采用Clustal X（1.8）软件比较HBV基因序列前S区序列差异并产生系统发育树。通过对下载的1471条HBV基因序列进行系统分析。获得了228条前S/S区完整的HBV基因序列,其中有66条序列的基因型已被各种方法所证实。利用软件分析绘制了基于228条HBV前S区基因序列的系统发育树。66条已知基因型HBV基因序列在系统发育树上的分型与其原有基因型完全吻合。在228条HBV基因序列中,有207条序列分别属于A、B、C、D、E、F和G等7个基因型,但另外21条序列不能归属于上述7个基因型的任何一种,而且它们又分为彼此相互独立存在的两群,暂分别称之为未分型I和未分型Ⅱ,经比较未分型I、Ⅱ和其他7个基因型前S区核苷酸序列,发现未分型I、Ⅱ和D型前S区都有33个核苷酸缺失,但三者基因缺失片段的位置和形式各不相同,但其它六型前S区无大片段基因缺失。结果说明采用基于前S区的系统发育树基因分型分析方法正确可靠,除了现已证实的7个基因型外,尚可能存在另外两个新的HBV基因型。     

乙型肝炎病毒4种基因型与干扰素治疗应答的关系

目的:在细胞水平上比较乙型肝炎病毒(HBV)基因型A,B,C,D对干扰素治疗的不同应答反应,进而探讨基因型对干扰素治疗效果的影响。方法:利用脂质体法将前期构建好的HBV基因型A,B,C,D质粒分别转染入Hep G2细胞系中,并在转染细胞上清中加入干扰素-α2a(IFN-α2a)。ELISA方法用来检测上清中HBV抗原,荧光定量PCR方法检测上清中HBV DNA,通过比较加药前后上清中HBV抗原和DNA水平的变化,反应HBV基因型对IFN-α2a的治疗反应。结果:HBV 4种基因型对IFN-α2a治疗的应答反应存在差异,其中A和B基因型对IFN-α2a的应答明显高于C和D基因型;而基因型A和B之间、以及基因型C和D之间对IFN-α2a的反应无统计学差异。结论:HBV基因型能影响干扰素的治疗效果,其中A和B基因型对IFN-α2a的治疗反应优于C和D基因型,在临床上应开展HBV基因分型检测,用以指导临床用药的选择。     

乙型肝炎病毒RT 区变异及其与基因型分布的关系

目的:探讨大样本乙型肝炎病毒(HBV)感染患者RT区耐药位点变异的流行情况,及各耐药位点变异与HBV基因型的关系。方法:采用P区测序法对1117例慢性乙型肝炎患者的血清病毒进行P区测序、进化树分型。结果:RT区耐药位点变异发生率与基因型关系密切,在基因型C患者中的变异发生率远远高于基因型B患者(P=0.000)。Rt180、rtM204V、rtM204I、rt181、rt213位点变异均与基因型C有关(P<0.05)。主要的三种变异类型rt180+rtM204V、rtM204I、rt180+rtM204I间基因型分布存在显著差异(P=0.003)。不同HBeAg状态下,耐药变异的发生有显著差异(P=0.020),特别是rt181和rt236位点变异。结论:HBV基因型影响RT区耐药变异发生率及变异类型,且耐药变异发生率也与HBeAg状态有关。     

乙型肝炎病毒RT区变异及其与基因型分布的关系

目的：探讨大样本乙型肝炎病毒（HBV）感染患者RT区耐药位点变异的流行情况,及各耐药位点变异与HBV基因型的关系。方法：采用P区测序法对1117例慢性乙型肝炎患者的血清病毒进行P区测序、进化树分型。结果：RT区耐药位点变异发生率与基因型关系密切,在基因型C患者中的变异发生率远远高于基因型B患者（P=O．000）。Rt180、rtM204V、rtM204I、rt181、rt213位点变异均与基因型c有关（P〈O．05）。主要的三种变异类型rt180＋rtM204V、rtM204I、rt180＋rtM204I间基因型分布存在显薯差异（P=0．003）。不同HBeAg状态下,耐药变并的发生有显著差并（P=O．020）,特别是rt181和rt236位点变畀。结论：HBV基因型影响RT区耐药变异发生率及变异类型。且耐药变异发生率也与HBeAg状态有关。     

乙型肝炎病毒基因型与免疫复合物型治疗性乙肝疫苗应答相关性的研究

目的 研究对免疫复合物型治疗性乙肝疫苗不同应答乙肝患者的乙肝病毒基因型有无差别。方法 收集67例经60 ug HBsAg-HBIG (YIC) 治疗的慢性乙肝患者血清, 用S基因聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法对其进行HBV基因分型,并结合患者对YIC治疗的不同应答进行分析。结果67例感染乙肝病毒（HBV）患者中,HBV B基因型22例,C基因型43例,未确定者2例。感染HBV B, C 两种基因型的患者对YIC免疫治疗的病毒学与HBeAg的血清转换应答差异无统计学意义. 结论HBV B或C基因型不影响慢性乙肝患者对YIC的治疗应答。     

阿德福韦酯抗病毒治疗1a后乙肝病毒基因型变化情况的观察

观察阿德福韦酯抗病毒治疗1 a后慢性乙肝患者体内HBV基因型变化情况.随机选择152例慢性乙肝患者作为研究对象,其中52例患者作为抗病毒治疗组,口服阿德福韦酯进行抗病毒治疗,另外100例患者作为对照组,口服护肝片进行护肝治疗,2组病人治疗周期均为1 a,分别在用药后第3、6、12个月进行随访,随访内容包括患者的依从性和不良反应、HBeAg/HBeAb、肝功能、HBV DNA定量检测,并采用多对型特异性引物巢武PCR基因分型技术动态监测治疗期间HBV基因型的变化情况.治疗1 a后,抗病毒治疗组中有1例患者体内HBV基因型发生改变,由治疗前的B型变为B/C混合型,并且病情出现反弹和加重.对照组未发现HBV基因型改变.2组HBV基因型变化率(1.9％和0％)之间没有显著性差异(P＞0.05).慢性乙肝患者体内HBV基因型可发生改变,而且1 a内即可发生,抗病毒治疗可能是促进HBV基因型改变的相关因素.HBV基因型转变可导致患者病情反弹和加重.     

丙型肝炎病毒基因分型及其意义：近3年的研究进展

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型的命名和分型方法已趋一致,基因型有地区分布特点并有所变化,目前尚难解释。研究表明基因型是干扰素（ＩＦＮ）疗效的重要预测指标,虽然基因型与肝病严重程度的关系尚有争议,但多数学者认为１ｂ型与肝细胞癌关系密切,此外,ＨＣＶ基因型研究对丙型肝炎诊断,抗病毒疫苗制备等也有实用意义。     

乙肝患者病变程度与病毒基因分型的相关性分析

目的探讨乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）基因分型与病变程度之间的关系。方法对165例经肝组织切片证实的急性轻型肝炎、轻度慢性肝炎（CHB）、中度慢性肝炎和重度慢性肝炎及肝硬化的乙肝患者血清进行基因分型。结果基因型以B型和C型为主,分别为12．1％和86．7％。C型中度慢性肝炎所占的百分比显著高于B型,而重度慢性肝炎在B型和C型中所占百分比差异无统计学意义;基因C型感染者HBeAg阳性率显著高于基因B型感染者,而基因C型感染者中HBeAb阳性率显著低于基因B型感染者。结论C型HBV感染和乙肝病情加重有一定关系,而B型HBV感染者预后相对较好。     

湖北咸宁地区乙型肝炎病毒基因型的调查

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是引起急性和慢性肝炎的最主要的病原[1]。目前根据HBsAg的共同抗原决定簇“α”和两对相互排斥的抗原决定簇将HBV分为ayw1, ayw2, ayw3, ayw4,ayr, adw2, adw2, adw4, adrq 和adrq-9种不同的血清学亚型,1988年Okamoto[2]等根据HBV基因组核苷酸的差异又提出了HBV基因型的概念,并以全基因组核苷酸差异≥8%,定为基因型分型标准。目前从世界不同地区分离的乙型肝炎病毒分离株已被分为A、B、C、D、E、F、G、H等8种不同的基因型[3~5]。包括中国、日本和东南亚在内的亚洲地区主要流行B、C两种基因…     

血液透析患者输血传播肝相关病毒感染的调查

使用PCR结合微板杂交-ELISA及DNA序列分析技术,分别研究了维持性血液透析患者输血传播性HBV、HCV、HDV、HGV、TTV感染状况,并对HBV、TTV进行基因分型、TTV基因变异状况进行分析.除HDV外,发现血液透析患者中存在多重感染.HBV基因型以C型为主,B型次之.TTV分离株中,G1型为主,G2型次之.TTV基因变异可达39.7%.     

血液透析患者输血传播肝相关病毒感染的调查

使用PCR结合微板杂交-ELtSA及DNA序列分析技术,分别研究了维持性血液透析患者输血传播性HBV、HCV、HDV、HGV、TTV感染状况,并对HBV、TTV进行基因分型、TTV基因变异状况进行分析。除HDV外,发现血液透析患者中存在多重感染。HBV基因型以C型为主,B型次之。TTV分离株中,G1型为主,G2型次之。TTV基因变异可达39．7％。     

汉族和维吾尔族乙型肝炎病毒耐药基因的相关临床研究

目的:利用基因芯片技术研究伊犁地区汉、维两个民族乙型肝炎病毒(HBV)耐药基因的差异性。方法:收集2014年1月-2015年12月我院收治的汉族及维吾尔族(以下简称"维族")慢性HBV感染患者各50例,患者均经基因芯片技术筛选确诊存在天然HBV耐药基因(耐核苷酸类药物),观察HBV耐药基因分型特点及对核苷酸类药物的耐药突变位点的情况。结果:汉族HBV感染患者的耐药基因型集中于B、C型,且以C型为主,而维族以D型为主,两组各基因型比较,差异均有统计学意义(P0.05)。汉族患者在rt204位点变异明显,而维族在rtn236t、rta181v/t+rtn236t位点变异明显,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:在新疆伊犁地区天然HBV病毒耐药基因患者中,汉族及维族耐药基因分型及耐药基因突变位点均存在显著差异,临床可通过基因芯片技术筛选变异靶点,选择合适的敏感药物。     

桂西壮族人群乙肝病毒基因型研究

为了解广西西部壮族人群乙型肝炎病毒(Hepatitic B virus, HBV)基因型分布特点,本文运用PCR微板核酸杂交-ELISA技术对30例壮族慢性乙型肝炎病人进行了HBV基因型检测,现初步报告如下.     

湖北咸宁地区乙型肝炎病毒基因型的调查

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是引起急性和慢性肝炎的最主要的病原[1].目前根据HBsAg的共同抗原决定簇"α"和两对相互排斥的抗原决定簇将HBV分为ayw1,ayw2,ayw3,ayw4,ayr,adw2,adw2,adw4,adrq+和adrq- 9种不同的血清学亚型,1988年Okamoto[2]等根据HBV基因组核苷酸的差异又提出了HBV基因型的概念,并以全基因组核苷酸差异≥8%,定为基因型分型标准.     

RtH238：一个与耐药无关的基因型依赖位点

目的：探讨乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）序列rt238 位点的氨基酸多态性与抗病毒治疗、耐药突变及基因型等的关 系。方法：采用P 区测序法对76 例阿德福韦（adefovir,ADV）基因耐药患者、52 例拉米夫定（Lamivudine,LAM）基因耐药患者和50 例未经抗病毒治疗的慢乙肝患者的血清病毒进行P区测序。结果：在76 例ADV基因耐药患者中,rt238 的三种不同类型氨基酸 在HBV基因型中的分布差异显著（x2=40.196,P=0.000）。RtH238 主要出现在基因型B 患者中,rtN238 主要出现在基因型C 患者 中,而rtT238的HBV 序列全部为基因型C。控制HBV基因型,rt238 氨基酸类型与rt181、rt236位点突变无明显相关。rtT238 只出 现在ADV和LAM基因耐药组。Rt238 位点的氨基酸在不同治疗组中的分布无统计学意义(P=0.127)。结论:Rt238位点的氨基酸多 态性与HBV 基因型显著相关,是一个基因型依赖位点,rtT238可能是基因型C 相关的潜在耐药突变。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV基因分型

为了解长春市慢性乙型肝炎患者血清中的乙型肝炎病毒(HBV)基因型情况及其与临床特点的相关性,应用型特异性引物进行巢式PCR方法对长春市69例慢性乙型肝炎患者血清HBV进行基因分型检测。在69例血清标本中,B型10例(占14.5%);C型41例(占59.4%);B C混合型8例(占11.6%);未分型的患者共10例(占14.5%)。C基因型患者的HBV-DNA定量、HBeAg阳性率明显高于B基因型患者(HBV-DNA:P<0.01;HBeAg:χ2=3.98,P<0.05),C基因型患者肝功检查指标谷丙转氨酶(ALT)和总胆红素(TB IL)均较B基因型患者高(P<0.01)。长春地区存在HBV B基因型、C基因型、B C混合基因型及未分型,C基因型为优势基因,引起的肝脏活动性炎症较B基因型明显。