乙酰胆碱协同剂对蚕豆保卫细胞原生质体内向钾电流的调节作用

用膜片钳全细胞记录方式研究了乙酰胆碱对蚕豆保卫细胞原生质体内向钾电流的作用与机理。发现乙酰胆碱的协同剂———烟碱和毒蕈碱分别促进内向钾电流 30 %～ 40 %。EGTA处理能有效减弱毒蕈碱对内向钾电流的促进效应 ,但不影响烟碱对内向电流的促进效应。这些结果提示 ,乙酰胆碱促进气孔开放的作用可能是通过受体直接或间接调节内向钾电流实现的     

乙酰胆碱及其拮抗剂对蚕豆保卫细胞内向钾电流的调节作用

用膜片钳全细胞记录方式记录蚕豆保卫细胞原生质体内向钾电流,结果发现,低浓度乙酰胆碱处理促进内向钾电流,高浓度乙酰胆碱处理则抑制内向钾电流.乙酰胆碱受体的拮抗剂d-管箭毒和阿托品分别抑制的内向钾电流约30%;同时使用d-管箭毒和阿托品则抑制60%～75%的内向钾电流,四乙铵离子处理不影响乙酰胆碱调节的内向钾电流.以上结果表明,乙酰胆碱及其受体可能是通过调节保卫细胞质膜上的内向钾通道参与对气孔运动的调节.     

鸡视网膜甘氨酸受体、乙酰胆碱受体及离子通道在两栖类卵母细胞中的表达和初步研究

利用两栖类卵母细胞表达鸡视网膜ｍＲＮＡ,借助电压箝方法研究鸡视网膜中的神经递质受体和离子通道、结果表明,鸡视网膜中存在甘氨酸受体和Ｎ型的乙酰胆碱受体。但天冬氨酸和５－ＨＴ、多巴胺未能诱导电流反应。此外还检测到电压依赖性的离子流,主要为延迟整流型的外向钾电流和快速的内向钠电流。     

鸡视网膜甘氨酸受体,乙酰胆碱受体及离子通道在两栖类卵母细胞中的表达和

利用两栖类卵母细胞表达鸡视网膜ｍＲＮＡ,借助电压箝方法研究鸡视网膜中的神经递质受体和离子通道。结果表明,鸡视网中存在甘氨酸受体和Ｎ型的乙酰胆碱受体。但天冬氨酸和５－ＨＴ、多巴胺未能诱导电流反应,此外还检测到电压依赖性的离子流、主要为延迟整流的外向钾电流和快速的内向钠电流。     

大鼠上丘到外膝体P—物质投射的机能

已知大鼠外膝体内有中脑上丘来的含Ｐ－物质的神经末梢,其机能不明,在离体的大鼠外膝体脑片上用单电极电压箝位的方法研究了Ｐ－物质对外膝体神经元电压依赖性离子通道的作用。结果表明,Ｐ－物质可以使静息膜去极化,并降低膜电导。这提示Ｐ－物质抑制了线性钾漏电流。此外,Ｐ－物质还抑制去极化激活的慢失活的钾电流。低阈值钙电流和超极化激活的内向整流（Ｈ或Ｑ）电流。Ｐ－物质还可能抑制早钾（Ａ）电流。因此,Ｐ－物质在外     

大鼠颈上神经节烟碱电流的整流及失敏

在培养的新生大鼠颈上神经节交感神经元标本上,用全细胞膜片钳技术研究了烟碱型乙酰胆碱受体（ｎＡＣｈＲ）通道的整流及失敏现象。烟碱激动剂引起的全细胞电流在膜电位为负值时随膜电位呈线性改变,而在膜电位达＋６０ｍＶ时仍不出现外向电流,表现出强烈的内向整流。ｎＡＣｈＲ通道电流存在失敏现象,即持续恒压喷射激动剂所引起的全细胞电流随时间呈指数衰减,不能保持在峰值水平,失敏随激剂浓度呈量效关系,膜电位的超极化也加     

柯萨奇B3病毒对心肌细胞离子通道电流的影响

目的 :探讨柯萨奇B3病毒 (coxsackievirusB3,CVB3)对大鼠心肌细胞离子通道的影响 ,以了解病毒感染导致细胞电生理活动异常的机理。方法 :酶消化法获得单个心肌细胞后利用膜片钳全细胞电流记录技术观察CVB3对L型钙通道电流、钠通道电流、外向钾电流和内向整流性钾电流的影响。结果 :CVB3感染使L型钙通道电流、外向钾电流增加 ,内向整流性钾电流减小 ,对钠通道电流无明显影响。结论 :CVB3对L型钙通道电流、外向钾电流和内向整流性钾电流的影响可能是病毒感染后细胞损伤和产生异常电活动的原因。     

大鼠上丘到外膝体P－物质投射的机能

已知大鼠外膝体内有中脑上丘来的含Ｐ－物质的神经末梢,其机能不明。在离休的大鼠外膝体脑片上用单电极电压箝位的方法研究了Ｐ－物质对外膝体神经元电压依赖性离子通道的作用。结果表明,Ｐ－物质可以使静息膜去极化,并降低膜电导。这提示Ｐ－物质抑制了线性钾漏电流。此外,Ｐ－物质还抑制去极化激活的慢失活的钾电流、低阈值钙电流和超极化激活的内向整流（Ｈ或Ｑ）电流。Ｐ－物质还可能抑制早钾（Ａ）电流。因此,Ｐ－物质在外膝体视觉信号传递中的作用是使外膝体神经元从爆发反应方式或振荡状态转化为中继反应方式,易化突触传递,使视网膜的视觉信号忠实地传递到大脑皮层。     

d-尼古丁对血管平滑肌细胞迁移的影响

为了在分子水平上揭示吸烟导致动脉粥样硬化的机制,探讨了烟草致病的主要成分d-尼古丁对豚鼠大脑基底动脉血管平滑肌细胞GbaSM-4迁移作用的影响。应用Boyden小室实验发现,d-尼古丁具有促进GbaSM-4细胞迁移的作用。免疫荧光染色显示,在d-尼古丁作用下有GbaSM-4细胞伪足内肌动蛋白表达和分布增加的现象。为了进一步阐明d-尼古丁促进平滑肌细胞迁移作用的分子机制,应用RT-PCR方法检测到在GbaSM-4细胞内有α7型烟碱乙酰胆碱受体的表达。应用烟碱乙酰胆碱受体的特异性抑制剂甲基牛扁碱和肌肉收缩的关键酶——肌球蛋白轻链激酶（myosin light chain kinase,MLCK）抑制剂ML-9作用GbaSM-4细胞后,发现d-尼古丁对GbaSM-4细胞的诱导迁移作用被明显的抑制。采用RNA干扰技术,成功地使GbaSM-4细胞内MLCK的表达水平下调,观察到d-尼古丁对GbaSM-4细胞的诱导迁移作用也被明显的抑制。上述研究结果表明,d-尼古丁以趋化因子的作用促进血管平滑肌细胞迁移,其分子机制可能与α7型烟碱乙酰胆碱受体和MLCK等因素有关,这一发现为揭示吸烟导致动脉粥样硬化提供了实验依据。     

乙酰胆碱减小猫外膝体中继细胞低阈值T—型钙电导

在离体猫丘脑脑片上观察了乙酰胆碱对外膝体中继神经元膜的低阈值Ｔ－型钙电导的影响。电流箝位和电压箝位实验结果都显示：将膜电位箝制到给药前的对照水平,排除了乙酰胆碱的去极化作用后,大多数（８２％）外膝外神经元的低阈值钙电导仍然被乙酰胆碱所抑制。说明这种抑制作用独立于乙酰胆碱引起的膜电位变化,而是对低阈值Ｔ－型钙通道的直接作用。     

番茄碱对乙酰胆碱酯酶活性影响的研究

通过电化学方法分析了番茄碱对乙酰胆碱酯酶活性的影响.结果表明:(1)乙酰胆碱酯酶经盐析、凝胶过滤层析分离纯化,酶比活力达到685.3 U/mg,提纯倍数达到229.5倍;(2)低浓度(1 mmol/L)番茄碱对乙酰胆碱酯酶有明显的激活作用,阳极化扫描的氧化峰电流由1.4 μA升至2.8 μA;高浓度(10 mmol/L)番茄碱对乙酰胆碱酯酶有明显的抑制作用,阳极化扫描的氧化峰电流由1.4 μA降至0.5 μA.说明采用循环伏安法、线形扫描电化学手段,对碘化胆碱的电化学行为可分析番茄碱对乙酰胆碱酯酶的活性影响,此项研究为探讨番茄碱的作用机理奠定基础,为研制性能优良的生物传感器提供理论依据.     

蚕豆保卫细胞质膜上一种高通导性的阳离子通道

利用膜片钳技术研究蚕豆保卫细胞质膜上钾离子通道时发现,在一部分保卫细胞的质膜上存在有高通导性的阳离子通道。无论在全细胞记录还是在单离子通道记录水平都得到了类似结果。全细胞记录表明这些高通导性的阳离子通道为钾离子通道。在膜电位为－１８０ｍＶ时,通过具有高通导性阳离子通道的保卫细胞整个质膜的内向钾电流约为１．５～２．５ｎＡ,而通过一般保卫细胞整个质膜的内向钾电流约为０．３～０．５ｎＡ。单离子通道记录显示,一些分离膜片上存在有高通导性的内向阳离子通道。当膜电位为－１１８ｍＶ时,该内向阳离于通道的通导性约为一般内向钾离子通道通导性的５倍。这些具有高通导性阳离子通道的特殊保卫细胞的存在可能与逆境条件下气孔的快速效应机制有关。     

多不饱和脂肪酸对成年雪貂心肌钾通道的作用

本研究是在成年雪貂的心肌上研究多不饱和脂肪酸（PUFA）对电压门控钾通道的效应。我们观察到,n-3 PUFA能抑制短时性外向钾电流（Ito)和延迟整流钾电流（IK),而对内向整流钾电流（IK1）则没有明显影响。二十二碳六烯酸（DHA）对Ito和Ik能产生浓度依赖性的抑制作用,其IC50分别为7.5和20μmol/L,但不影响IK1。二十碳五烯酸（EPA）对这三种钾通道的作用与DHA相似。花生四烯酸（5或10μmol/L)先引起IK的抑制,然后引起IK,AA的激活;用环氧合酶抑制剂消炎痛可以阻断花生四烯酸激活IK,AA的作用。不具有抗心律失常作用的单不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸都不明显影响这些钾通道的活性。上述实验结果证明,n-3 PUFA能抑制心肌细胞的Ito和IK,但和我们以前报道的PUFA对心肌钠电流和钙电流的作用相比,其对Ito和IK抑制作用的效能较低。n-3 PUFA的抗心律失常效应可能与它们抑制心肌钠、钙、钾通道的作用有关。     

急性低氧对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

应用常规膜片箝全细胞记录技术,研究心肌细胞的内向钙离子流时,钙通道的″ＲｕｎＤｏｗｎ″现象使记录时间较短,难以进行适当的实验分析。在分离的豚鼠心室肌细胞上应用制霉菌素全细胞记录技术,可减少″ＲｕｎＤｏｗｎ″现象,内向Ｌ－型钙电流可保持稳定达１００ｍｉｎ以上,显示内源性钙离子缓冲机制保持稳定。应用制霉菌素全细胞记录技术,急性低氧１０ｍｉｎ（Ｐｏ２４±０．７ｋＰａ）,Ｌ－型钙电流被抑制（钙电流峰值降低）,电压－电流曲线上移。复氧１０ｍｉｎ后,内向钙电流不能恢复,峰值低于对照水平。结果提示：急性低氧引起的心肌动作电位时程（ＡＰＤ）缩短时,不仅外向钾电流增加,而且也伴有内向钙电流的抑制过程,这些现象可能与心肌细胞的Ｌ－型钙通道的磷酸化在低氧时的部分抑制有关。     

烟碱型乙酰胆碱受体参与乙酰胆碱调控的气孔运动

动物细胞中 ,乙酰胆碱功能的发挥要求乙酰胆碱受体的参与 ,烟碱型受体的激活剂可以直接影响膜对离子的通透性 .在乙酰胆碱诱导的气孔开放过程中 ,可能同样涉及到烟碱型受体的作用 ,药理学的证据表明烟碱型乙酰胆碱受体参与乙酰胆碱调控的气孔运动 ,而且烟碱型乙酰胆碱受体介导的气孔开放与介质中的离子组成密切相关 ,只有在含K⁺的介质中烟碱才可以诱导气孔开放而在含Ca^{2 +}的介质中没有作用 ;同样 ,烟碱型乙酰胆碱受体的抑制剂只有在含K⁺的介质中才能抑制乙酰胆碱诱导的气孔开放 .进一步利用荧光定位技术证明烟碱型受体存在于蚕豆气孔保卫细胞中 ,而且主要分布在保卫细胞原生质体的表面 .免疫印迹实验初步证明在保卫细胞原生质体的微粒体中存在着能与动物烟碱型乙酰胆碱受体的α和β亚基发生免疫交叉反应的蛋白条带 .以上结果表明烟碱型乙酰胆碱受体存在于保卫细胞中 ,而且介导了乙酰胆碱诱导的气孔在含K+介质中的开放 .     

神经生长因子分化后的PC12 细胞对乙酰胆碱的敏感性及其特性

目的和方法：采用全细胞膜片钳技术观察神经生长因子（NGF）分化后的PC12细胞对乙酰胆碱（ACh)的敏感性,并对ACh诱发电流（IACh)的特性进行分析。结果：NGF处理后的PC12乐仅形态上向交感神经元分化,而且具有电学兴奋性,它对ACh敏感性比未分化前显著提高。药理学鉴定表明PC12上的IACh是由烟碱受体（nAChR)引起的,具有明显的失敏特性。宏观IACh呈内向整流和浓度依赖性。结论：PC12细胞培养方便,同源性好,加入NGF后向交感神经元分化,且其具有神经元烟碱受体,可以作为交感神经元烟碱受体研究的很好的模型系统。     

烟碱抗阿尔茨海默病作用研究进展

烟碱是存在于烟草植物中的主要生物碱,是代表性的乙酰胆碱激动剂类药物,对中枢神经系统以及乙酰胆碱受体均有一定作用。文章针对烟碱对烟碱抗阿尔茨海默病的作用机制进行综述,并对阿尔茨海默病的治疗作用展开讨论。如:调节胆碱能、减轻氧化应激、抑制Aβ生成及聚合以及神经保护作用。为抗阿尔茨海默病的药物筛选提供了一条极具潜力的研发途径。     

钙依赖型蛋白激酶调节保卫细胞膜内向钾离子通道的实验证据

保卫细胞内钙离子浓度的变化对气孔保卫细胞质膜上的内向钾离子通道活性有显著调节作用,而钾离子通道活性的变化可导致细胞渗透压的改变,进而调节气孔的开闭运动。然而,钙离子通过何种机制实现对钾离子通道的调节尚不清楚。作者利用膜片钳全细胞记录方法探讨了钙依赖型蛋白激酶（ＣＤＰＫ）是否参与了钙离子调节保卫细胞钾离子通道的信号转导过程。当胞内钙离子浓度为１．５μｍｏｌ／Ｌ时,保卫细胞全细胞内向钾电流被抑制约６０％;同时加入ＣＤＰＫ的底物组蛋白ⅢＳ或ＣＤＰＫ的底物竞争性抑制剂鱼精蛋白可完全逆转钙离子的作用;但在胞内同时加入纯化的ＣＤＰＫ蛋白则可进一步促进钙离子对保卫细胞内向钾电流的抑制。研究结果初步证明,ＣＤＰＫ介导了钙离子调节保卫细胞内向钾离子通道的信号转导过程     

氮磷钾配施对填充型烤烟烟碱含量的影响

以东北填充型烤烟品种"龙江911"为试验材料,通过正交回归田间试验,建立了氮、磷、钾肥与烤烟上部叶片烟碱含量的回归效应模型,并对各因子和交互作用进行了分析,模拟计算得出以降低上部叶片烟碱含量为目标的优化施肥方案.对模型解析表明,随施氮量增加,上部叶片烟碱含量呈先上升后下降趋势;随施磷量增加,烟碱含量呈上升趋势;随施钾量增加,烟碱含量呈急剧下降趋势.双因素效应大小依次为:氮钾＞磷钾＞氮磷,在一定范围内,氮磷、磷钾与烟碱含量表现为负相关,存在拮抗作用;而氮钾则相反,存在促进作用.对氮、磷、钾肥与烤烟上部叶片烟碱含量模型的综合分析得出:在植烟土壤为河淤土的生产区,烟田的基础施肥量建议为:氮肥33.5～47.8kg·hm-2,磷肥40.2～63.6 kg·hm-2,钾肥78.0～119.6kg·hm-2.     

葛根素对大鼠心室肌细胞动作电位及钾通道电流的影响

目的:观察葛根素对大鼠心室肌细胞动作电位及钾通道电流的影响。方法:用常规微电极方法记录大鼠心室肌细胞动作电位,用全细胞膜片钳技术记录游离心室肌细胞钾离子流。结果:不同浓度的葛根素均能延长大鼠心室肌细胞动作电位时程(APD)及抑制内向整流钾电流,具有明显的浓度依赖关系。结论:葛根素延长APD,抑制内向整流钾电流,可能是其抗心律失常的机制。