人感染钩体菌群与免疫血清群及交叉凝集关系研究

为了解人间自然感染各群钩端螺旋体（钩体）后产生的免疫抗体血清群、交叉凝集（交凝）、效价及相互关系,作者对病原学阳性并做过双份血清ＭＡＴ的６４份资料作了综合分析,结果表明：６４株钩体属于１２个群,其中１３株菌的感染者血清呈阴性反应,占２０．３１％;５１例呈阳性,占７９．６９％,有１４个血清群,效价１∶１００～１∶６４００;１２个菌群感染者的血清交凝反应较为普遍,效价１∶１００～１∶３２００;效价高低及交凝群数,因感染菌群而异。较为特殊的是１１个菌群感染者的血清中均不见与流感伤寒群钩体的交凝现象。本文对人间分离钩体菌群与免疫血清群构成比例互不吻合的问题作了解释,为钩体病的免疫及血清流行病学补充了新论据     

一个新的钩端螺旋体血清群——曼耗群

本文介绍了致病性钩端螺旋体的一个新的血清群——曼耗(Manhao)群的分群结果。曼耗群钩端螺旋体与Javanica,Celledoni Canicola,Cynopte ri,AutumnMis,Australi~,P小mona,Grippotyphosa,Hebdomadis,Bataviae,farassovi．Shetmaai,Panama等群各型没有阳性交叉反应。仅与Pyrogencs群中的alexl型I-IS 616株有共同的抗原因子联系,与P'crogenes群内pyrogenes型等其他型没有交叉反应;另外还与[cterohaemorrhagiae,Ballum群个别型有低度的,不稳定的交叉反应。因此确定曼耗群是钩端螺旋体的一个新血清群。到目前为止,本群各型地方株中除一株是由猪肾分离的外,其余菌株均获自钩端螺旋体桶患者。尚未从其它常见的宿主动物l扣获得过本群钩端螺旋体。     

秋季群钩端螺旋体的一个新血清型

1962年7月1日自云南省西双版纳州勐腊县钩端螺旋体病患者的血培养物中分离出钩端螺旋体A6株。经交叉显凝试验和交叉凝集索吸收试验,证明它是秋季群钩端螺旋体的一个新血清型。建议命名为致病性钩端螺旋体南腊血清型(Leptospina inteirogans serovar nanla),A6株为参考株。     

七日热群钩端螺旋体的一个新血清型

A23株钩端螺旋体系1962年8月3日分离富云南省勐腊县钩端螺旋体病患者血液。经交叉凝集试验、交又凝集素吸收试验和园子血清凝集试验证明是七日热群保林卡那亚群钩端螺旋体的一个新血清型。建议命名为致病性钩端螺旋体曼I芏血清型(Leptospira interrogansserovar manzhucng)。此型感染在勐腊已发现6例。     

钩端螺旋体四个新血清型的鉴定

本文报告从云南省的病人和动物分离出的钩端螺旋体地方株中{个新血清型的鉴定结果。检定L82株及S590株为爪哇群,分别命名镇康型(Zhenkang)、勐马型(Mongma);S621株为致热群盂连型(Manglian);L100株为塔拉索夫群云县型(Yunxian)钩端螺旋体。     

钩端螺旋体(三宝垄群巴托型)耐热、耐碱性红血球致敏物质用于血凝试验的研究

我们从钩端螺旋体(三宝垄群巴托型)中提出一种耐热性、耐碱性红血球致敏物质(Fss),并进行了血凝试验的研究。初步发现这种物质可使绵羊红血球致敏。致敏后的红血球能与相应的免疫血清发生血凝反应。三宝垄群巴托型钩端螺旋体血清与其它型红血球致敏物质抗原的血凝试验,具有较高的敏感性和一定的型特异性,除与钩端螺旋体的独立群独立型和澳洲群巴力科型有一定的凝集价外,与其它8个群钩端螺旋体代表型均不产生凝集。由此提供了用这种抗原物质作钩端螺旋体抗原型鉴定的可能性。钩端螺旋体红血球致敏物质血凝试验受温度、红血球浓度及红血球致敏时间等因素的影响而使血凝增强或减弱。     

七日热群钩端螺旋体的两个新血清型

本文报告七日热群钩端螺旋体的两个新血清型。A10株钩端螺旋体系I 962年自勐腊县钩端螺旋体病患者分离,命名为云南型钩端螺旋体(Leptospira interrogans serovar yunnan)H27株钩端螺旋体系1964年自河口县钩端螺旋体病患者分离,命名为河口型钩端螺旋体(Le-ptospira interrogans serovar hekou)。     

云南省首次发现怀特康型钩端螺旋体

云南省首次发现怀特康型钩端螺旋体陈明华杨文映杨向东张青庞敬文（云南省流行病防治研究所,大理６２７１０００）分类号Ｒ５１４．４我所１９９２年１１月６日在云南盈江县采取钩体病患者张县的血样,通过分群和凝集素交叉吸收试验,进行钩端螺旋体血清群型鉴定。方法分...     

采用小白鼠分纯钩端螺旋体菌株

近年来,随着钩端螺旋体病的调查研究工作的广泛开展,在实验诊断方面,除进行大量血清学试验外,对钩端螺旋体菌株(以下简称钩体菌株)进行培养,作好菌群鉴定,对生物制品和制订防治措施提供参考。但往往由于在采集标本及实验操作过程中无菌操作不严格,而使分离出的钩体菌株发生污染。用常规方法     

波摩那血清群钩端螺旋体限制性内切酶分析

应用EcoRI和HhaI内切酶．对波摩那血清群钩端螺旋体各型标准株的DNA作限制性内切酶分析RestrIction Endonuclease Analysis简称REA)。证明所获的各型标准株(Pomona,MCzdOk．Proechimys．Tropica)的酶切图谱均不相同。与以前经显微镜凝集试验(MAT)定为波摩那血清群的27个猪肾标本分离株的酶切图谱比较,所有分离株均可判定为波摩那血清型钩端螺旋体。     

问号钩端螺旋体中一个新的OmpA家族蛋白抗原性及保守性研究

目的克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体(L.interrogans)黄疸出血群赖型赖株中一个新的外膜蛋白(Omp)A家族基因LA0301,研究LA0301编码蛋白的抗原性和在15个钩端螺旋体(简称钩体)血清群代表株中的保守性,探讨其在疫苗研究中的意义。方法生物信息学软件分析预测LA0301的特征。构建原核表达重组体pQE31-LA0301,经IPTG诱导后用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法(Western blot)鉴定表达情况。用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,Western印迹检测其免疫反应性和在不同血清型钩体中的保守性。酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western印迹检测兔抗钩体全菌血清中的LA0301编码蛋白的抗体。结果生物信息学预测结果显示,LA0301具有OmpA家族的结构域。克隆表达了重组质粒pQE31-LA0301,重组蛋白能刺激BALB/c小鼠产生特异性抗体,效价为1:32000。在兔抗钩体全菌血清中检测到特异的LA0301蛋白抗体,并在15个血清群的代表株钩体中均可检测到LA0301蛋白。结论LA0301蛋白是问号钩体中一个新的OmpA家族蛋白,具有良好的抗原性和保守性,并且能在钩体感染的过程中刺激机体产生相应的抗体。为进一步研究钩体新型疫苗候选基因奠定了基础。     

问号钩端螺旋体疫苗候选基因LB061的抗原性和保守性研究

目的 克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株中疫苗候选基因LB061,研究LB061的免疫原性和在不同血清型钩端螺旋体菌中的保守性。方法 生物信息学软件分析预测LB061的特征。构建原核表达质粒pQE31-LB061,经IPTG诱导后用SDS-PAGE及Western印迹法鉴定表达情况。用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,Western印迹法检测其抗原性和在不同血清型钩端螺旋体中的保守性。Western印迹法检测钩端螺旋体全菌兔抗血清中的LB061抗体。结果 生物信息学预测结果显示,LB061含有DUF839家族结构域。成功克隆了重组质粒pQE31-LB061,表达的重组蛋白能刺激BALB/c小鼠产生抗体(效价为1∶32000),并能与相应抗体反应,具有良好的抗原性。在16株不同血清型的钩端螺旋体中均可检测到LB061蛋白的表达,并在钩端螺旋体赖株全菌兔抗血清中检测到其抗体。结论 LB061蛋白可以作为外膜蛋白刺激宿主免疫系统产生抗体,具有良好的抗原性和保守性。本研究为其作为疫苗候选基因的研究奠定了基础。     

钩端螺旋体LA_1100蛋白膜定位研究

目的 研究LA_1100蛋白在钩端螺旋体中的膜定位并分析其在中国流行血清群中的保守性.方法 利用生物信息学软件对LA_1100的二级及三级结构进行分析,以Triton X-114抽提分离钩体细胞的各个组分,Westernblot及FACS方法验证LA_1100在钩端螺旋体中的膜定位.Western Blot和PCR在蛋白水平及核酸水平检测了其在13个中国流行血清群代表株中的保守性.结果 LA_1100的二级结构显示具有α-螺旋及β-折叠结构,进一步分析表明,此蛋白具有跨膜区.LA_1100单体结构具有典型的TolC结构域,三级结构模拟显示三聚体可形成孔状结构.膜定位显示,该蛋白定位于外膜.该基因的保守性分析结果表明,在中国13个流行代表株中有12株均检出该基因或该蛋白的特征性条带.结论 LA_1100为具有TolC结构域可以形成孔状结构的钩端螺旋体外膜蛋白,在中国流行株钩端螺旋体中保守.由于TolC蛋白与病原菌分泌致病因子密切相关,推测此蛋白可能与钩体感染宿主时粘附及致病相关,进一步对此蛋白进行研究有利于揭示钩体的致病机制.     

钩端螺旋体外膜疫苗的流行病学效果评价

为了评价国产钩端螺旋体外膜疫苗的流行病学效果。于1998年6－10月,用队列研究和病例对照研究等方法在钩体病流行区5－60岁农业人口 ,观察比较接种组和对照组钩体发病情况。队列研究显示,钩体外膜疫苗对同血清群钩体的保护率为75．17％,效果指烽为4．03。1：2配对调查的疫苗保护率为81．25％,1：3配对结果为73．33％。用筛选法估计的疫苗效果为755。不同研究方法的结果相近,均一致说明,该疫苗的流行病学效果较理想。研究结果还显示,该疫苗对异血清群钩体也有一定的保护作用。     

波摩那群昆明型钩端螺旋体的鉴定

K5株钩端螺旋体系1960年自昆明市郊高山姬鼠(Apodemus chevrieri)肾分离获得,经多次鉴定均属波摩那群新型,建议命名为昆明型钩端螺旋体(Leptospira interrogans serovarkuming)。     

重组钩端螺旋体外膜蛋白酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的建立

目的建立以重组外膜蛋白为基础的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。方法以基因重组技术获取重组钩端螺旋体外膜蛋白LipL32,以该蛋白为抗原,特异的钩体抗血清进行ELISA方阵滴定、交叉性试验、阻断试验,并对北京地区的70份犬血清使用建立的ELISA方法以及德国Virion公司的全菌体钩端螺旋体ELISA试剂盒进行相互验证。结果方阵滴定试验确立以100ng/孔为抗原包被浓度,1∶160为血清稀释度。交叉性试验具有广泛性、阻断试验标明该方法特异性强、灵敏度高。两种方法数据经χ2检验,两者检出率之间差异不显著。结论重组LipL32蛋白具有结合活性。初步建立了以重组LipL32蛋白为抗原的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。     

钩端螺旋体的新血清型——蛮耗4型

从1973年我省分离的689株钩端螺旋体中,分离到一株“黎川130”,经检定属于我国新发现的血清群——蛮耗群。这个血清群是世界卫生组织(1967)公布的18个群124型以外的一个独立的血清群。蛮耗群过去有3个型别,即蛮耗1—3型。“黎川130”株经用凝集素吸收方法检定为新型,建议命名为蛮耗4型。     

中国钩端螺旋体参考菌株的建立与应用

本文简要介绍了中国钩端螺旋体（钩体）参考菌株的建立与应用。该参考菌株从无到有,目前已有１８个血清群７５个血清型,其中曼耗新菌群和赖等２６个新菌型已被国际确认为国际新菌群与国际新菌型。该参考菌株已在中国钩体病研究、预防、临床实验诊断、流行病学调查、医学教育和动物检疫等方面得到广泛的应用,取得了丰硕的成果     

间接FLISA法检测钩端螺旋体特异性IgM方法的探讨

为研制钩端螺旋体（钩体）特异性IgM检测试剂,并用于早期诊断钩体病,以钩体外膜蛋白为抗原,探索间接ELISA法检测钩体特异性IgM的各项实验条件,并对钩体病患者血清标本进行检测,结果,１０５份健康人血ＩgM阴性,钩体IgM阳性血清可被特异性阻断,２－巯基乙醇破坏试验阳性,试剂存放４℃和３７℃4天的检测结果基本一致,检测临床钩体病人112份血清,IgM阳性83份,阳性率74．11％,与常规TAT法基本一致,0－7病日的阳性率明显高于MAT法,说明该法检测钩体病IgM具有特异,敏感,快速,稳定,简便等优点,对钩体病早期诊断有一定的价值。     

亚历山大钩端螺旋体L60株的历史与现状

我们于1964年从曼耗周边山林中感染的病人分离得一株称为L60株的钩端螺旋体,现已被国际上列为新基因种亚历山大钩端螺旋体(L.alexanderi)的型株(Type strain)。但它的血清变种名称国内外不一致(国内称曼耗、国外称曼耗3),国外还认为其来源不明。因此,撰写本文以解决这些问题。本文详细描述了L60株的发现、筛选过程。从其分类学研究历史,阐明其命名不一致的原因。鉴于史籍已载有曼耗血清变种(Serovar manhao,reference stran Manhao),L60不应再名为曼耗,而且曼耗3这一名称不符合国际规定,故有必要再予重新命名。我们建议将L60株重新命名为廷祚血清变种(Serovar Ting-zuo),用以纪念陈廷祚氏对我国钩端螺旋体和钩端螺旋体病研究的贡献。