九州虫草菌丝体多糖Ck1-A的纯化及其性质研究*

九州虫草Cordyceps kyushuensis 菌丝体粗多糖经酶法结合Sevag法除蛋白、H₂O₂法脱色、透析、乙醇分部沉淀得到Ck₁,Ck₁经DE-23柱层析得到多糖Ck₁-A。经紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳、Sepharose 4B柱层析等方法检测确定Ck₁-A为均一组分。苯酚-硫酸法测得Ck₁-A的含糖量为86.1%,硫酸-咔唑法测得Ck₁-A含有微量的葡萄糖醛酸。Sepharose 4B柱层析测得Ck₁-A的分子量为927 kDa。红外光谱和核磁共振氢谱的结果均显示Ck₁-A含有α-型糖苷键。体内实验表明Ck₁-A对小鼠肉瘤S180有明显的抑制作用。     

简便快速纯化人血清α1-酸性糖蛋白的方法

本文采用(NH₄)₂SO₄和CCl₃COOH沉淀,及Cibacron blue F3G-A-SephadexG-100凝胶柱层析,经二步提纯了人血清α₁-酸性糖蛋白。PAGE鉴定,在阳极端仅显示一条蛋白带。Schiff氏试剂染色阳性,证实为糖蛋白。SDS-PAGE测得其分子量为45000。免疫电泳结果表明,纯化的α₁-酸性糖蛋白与兔抗人全血清及免抗人α₁-酸性糖蛋白均呈现单一沉淀弧。氨基酸组成测定亦与文献报告的结果基本一致。本方法简便、省时。     

人白三烯A4水解酶的提取和纯化

人白细胞匀浆中的LTA₄H经硫酸铵分段盐析,DEAE-纤维素柱层析,Sephadex柱层析和HpLCmono-Q阳离子交挟柱层析,再经羟基磷灰石柱纯化,得到其纯度可达90—95％的产物。酶活性为212LTB₂nmol·mg^-1·min^-1。较纯化前活性提高350倍。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示酶的分子量为68000—70000的单体蛋白质。与以前报道人红细胞LTA₄H不同。     

ELISA法分析抗血清中链霉素抗体抗原结合部位的特异性

用链霉素抗血清对链霉素的亲和力(K_SM)和链霉素抗血清对二链霉胺的亲和力(K_B)之比(K_SM/K_B)为指标,表征链霉素抗血清抗原结合部位的特异性;建立了快速分析该指标的ELISA(酶联免疫吸附法)法;并对链霉素抗体抗原结合部位的特异性进行了分类。     

人脑神经元特异性烯醇化酶的纯化方法

采用改良的Grace层析方法,经一次DEAE-Sephadex A50柱层析即从人脑中纯化了神经元特异性烯醇化酶,比活力为92.1U/mg,纯化倍数为59.4.该酶纯化后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一蛋白质谱带.此外,还测定了其部分理化性质,其亚单位分子量为45000,等电点pI为4.7,氨基酸组成分析表明其为一种酸性蛋白质;对2-磷酸甘油酸的K_m值为5.6×10^-4mol/L.     

人肌型特异烯醇化酶放免分析法及初步应用

建立了人肌型特异烯醇化酶(hMSE)的放免分析法,抗血清的亲和常数为5.1×10⁹L/mol,采用改良的BHR法制备了 ¹²⁵I-hMSE,后者非特异结合率为3%,与抗血清(1∶10³)结合率达50.16%;批内和批间CV分别为8.6%和13%.回收率为95%-105%.标准曲线范围为5-320μg/L.最小检出率为5μg/L.最佳反应条件:0.1mol/LpH7.4PBS(含5mmol/L MgSO₄,0.1%吐温-20,0.1%NaN₃);反应温度和时间:37℃反应0.5h和4℃,0.5h,作为快速测定;或选用4℃反应24h.65例健康人血清hMSE浓度为23.9±10.9μg/L(x±s).hMSE超过57μg/L(x+3s).为阳性值.测定了AMI和肌病患者,血清hMSE明显升高.     

老年慢性心力衰竭患者甲状腺激素水平与认知功能、心功能及心血管事件的关系研究

摘要 目的：探讨老年慢性心力衰竭（CHF）患者甲状腺激素（TH）水平与认知功能、心功能及心血管事件的关系。方法：将我院2018年6月～2020年6月收治的140例老年CHF患者纳入研究,检测患者TH指标[血清三碘甲状腺原氨酸（T₃）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT₃）、甲状腺素（T₄）、游离甲状腺素（FT₄）、促甲状腺激素（TSH）]水平。按蒙特利尔认知评估量表（MoCA）评分将患者分为认知障碍组（MoCA评分＜26分）、非认知障碍组（MoCA评分≥26分）,比较两组各TH指标与MoCA评分。比较不同纽约心脏病协会（NYHA）分级患者的TH指标与心功能指标[左室射血分数（LVEF）、左室舒张末期内径（LVEDD）、左室收缩末期内径（LVESD）]。根据患者住院期间是否发生心血管事件分为心血管事件组和非心血管事件组,比较两组各TH指标。经Pearson线性相关分析TH指标与MoCA评分、心功能指标的相关性。结果：认知障碍组血清T₃、FT₃水平及MoCA评分较非认知障碍组明显降低（P＜0.05）。Ⅲ级、Ⅳ级组的血清T₃、FT₃水平及LVEF较Ⅰ级、Ⅱ级组显著降低,其中Ⅳ级组低于Ⅲ级组（P＜0.05）。Ⅲ级、Ⅳ级组的LVEDD、LVESD较Ⅰ级、Ⅱ级组明显升高,且Ⅳ级组高于Ⅲ级组（P＜0.05）。心血管事件组血清T₃、FT₃水平较非心血管事件组显著降低（P＜0.05）。Pearson线性相关分析显示：血清T₃、FT₃水平与MoCA评分、LVEF呈正相关（均P＜0.05）,与LVEDD、LVESD呈负相关（均P＜0.05）。结论：老年CHF患者血清T₃、FT₃水平下调与其认知功能、心功能降低及心血管事件的发生密切相关,通过检测其血清T₃、FT₃水平,有利于进一步了解其病情变化。     

人β2-微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

β₂-微球蛋白(β₂m)是主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子的轻链部分, 为制备MHC-Ⅰ类分子四聚体的必要成分。 根据已报道的序列设计特异引物, 利用RT-PCR方法从人白细胞中克隆了β₂m基因, 并构建了成熟β₂m的原核表达载体, 在大肠杆菌中得到高效表达。 表达的β₂m大部分在包涵体中,经洗涤、变性和复性,并以强阴离子交换柱层析纯化,获得SDS-PAGE纯的人重组β₂m,Western印迹法分析表明该蛋白具有与抗人天然β₂m抗体反应的特性。此工作为制备MHC-Ⅰ类分子四聚体奠定基础。     

碱提水溶性安络小皮伞多糖的研究——B1与B2的分离纯化及结构研究

从曾用水提取过水溶性多糖的安络小皮伞残渣中用稀碱液提取了二种水溶多糖B₁和B₂。它们分别给Sepharoe 4B柱,2B柱层析,超离心分析,醋酸纤维薄膜电泳鉴定,表明B₁和B₂均为纯多糖。采用气相色谱,红外光谱,淀粉酶解,甲基化分析等方法确定了它的基本结构。     

转化蔗髓P2菌株的鉴定及其产酶条件

从蔗髓纸浆中分离筛选出一株霉菌,经鉴定,定名为康氏木霉(Trichoderma koningii)P2菌株。在蔗髓70g、麸皮30g、(NH₄)₂SO₄1.2g、(NH₂0.8g、MgSO₄·7H₂O 0.05g、KH₂PO₄0.1g、MnSO₄ 3.2mg、葡萄糖母液2g、水300ml,pH5,     

醇醛脱氢酶的分离纯化及其基因文库的构建和筛选

在维生素C的发酵生产过程中,普通生酮基古龙酸菌S₂（Ketogulonigenium vulgare)能产生醇醛脱氢酶,将L-山梨糖转化为VC的前体2-酮基-L-古龙酸（2-KLG）。通过超声波破碎菌体、硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析,Q Sepharose High Performance柱层析等过程,从普通生酮基古龙酸菌S₂发酵液中分离纯化了醇醛脱氢酶,并用该纯化酶免疫新西兰兔制备出了合格抗血清。同时,普通生酮基古龙酸菌S₂基因组DNA经Sau3AⅠ部分酶切后,与黏粒载体pKC505连接,用包装蛋白进行包装,转染大肠杆菌DH5ɑ,构建了基因组文库。最后应用免疫酶斑点技术（Dot-ELISA）从12 000个克隆子中筛选得到一个阳性克隆K719^#。通过检测该基因工程菌的活性,表明K719^#具有使L-山梨糖转化为2-KLG的功能,从而使醇醛脱氢酶在大肠杆菌中获得了高效表达,这为简化VC的生产工艺奠定了基础。     

里氏木霉纤维素酶产生条件的研究

通过对培养基、水份含量、氮源、培养时间、培养基的起始PH以及培养温度的研究,测定TrichodermareeseiGAB纤维素酶的C₁酶和Cx酶的酶活,找到了一个最佳的条件,即：稻草粉：花生壳=4：1,物料：水份=2：3,以NH₄Cl、（NH₄）₂SO₄、NH₄H₂PO₄为氮源,起始pH为自然pH（约5．8）,在28℃     

嗜热脂肪芽孢杆菌耐热木糖异构酶的特性

嗜热脂肪芽抱杆菌在木糖或木聚糖诱导下产生木糖异构酶。从破碎细胞中分离到该酶。经硫酸铵沉淀,热处理及SephadexG-200柱层析等步骤获得纯化了19倍的酶制备物。该酶反应的最适pH值为7.5,在pH6．2～8．0范围内稳定,最适反应温度为80℃,低于此温度时酶有很好稳定性。该酶对底物木糖的Km值为6．67mmol／L,Mg₂₊、Co₂₊和Mn₂₊对该酶有激活作用,而Zn₂₊、Cu₂₊和Fe相似文献   

金针菇在淀粉废水中发酵的营养条件研究

用摇瓶试验对金针菇菌丝体在淀粉废水中培养的营养条件进行了研究。结果表明,利用淀粉废水进行金针菇液体发酵的最适营养条件为：经液化处理的淀粉废水,加KH₂PO₄0.25 g/100 mL,MgSO₄·7H₂O0.05g/100mL,V_B1150μg/L,V_B250μg/L,pH5.40。测定了该营养条件下菌体的生长曲线及发酵过程中培养基残糖的变化。发酵周期为7d,发酵终点生物量达2.08 g/100 mL,COD去除率为70.8%。     

蜜环菌胞外漆酶的合成、纯化及性质研究

研究了蜜环菌胞外漆酶合成条件和酶学性质。实验表明,培养基初始pH5.5、培养温度25℃有利于菌株产酶;与麦芽糖、山梨糖和半乳糖相比,纤维二糖和棉子糖作为碳源时漆酶产量更高;有机氮源比无机氮源有利于漆酶合成。泥炭提取液可显著诱导漆酶生成,当其含量为50%时,菌株漆酶最高产量是对照组的7倍。在蜜环菌发酵上清液中检测到3个漆酶同功酶组分,其主要活性（约占75%）组份漆酶A经 (NH₄)₂SO₄沉淀、制备级PAGE电泳和阴离子交换柱层析被分离纯化至电泳均一,SDSPAGE法测得酶亚基分子量59kD,凝胶过滤色谱法测定活性酶分子量58kD。纯化的漆酶A等电点pI为4.0,氧化愈创木酚的最适反应pH为5.6,最适温度为60℃,在60℃和65℃时半衰期分别为45min和36.8min,在pH5.2～7.2范围内稳定性较好。100mmol/L Cl^-对该酶有显著抑制作用,1mmol/L SO^2-₄ 对漆酶有激活作用,1mmol/L NaN₃可完全抑制酶活性,10 mmol/L EDTA对漆酶活没有明显影响,1mmol/L Cu²⁺对漆酶有激活作用。以愈创木酚为底物时,测得酶的K_m=1.026mmol/L,V_max=5μmol/(min·mg);以ABTS为底物时,测得其K_m=0.22mmol/L,V_max=69μmol/(min·mg)。     

抗组织型纤溶酶原激活剂(tPA)单克隆抗体的制备和鉴定

用从人黑色素瘤细胞培液中提纯的tPA为抗原,通过杂交瘤技术获得TA₁,TA₂、TA₃和TA₄ 4株阳性杂交瘤细胞。经葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析纯化抗tPA单克隆抗体(tPA．McAb)。固相酶联免疫吸附测定(ELISA)诱生含McAb的小鼠腹水,其效价达I：1O⁵。这些tPA McAb均属IgG₁亚型,特异地作用于tPA(包括基因工程生产的rtPA),与尿激酶(uK)无反应。用底物显色法测定表明所有tPA McAb均可抑制tPA的活性。     

葡萄糖异构酶产生菌筛选培养基和测定方法的比较试验

在本实验室条件下,经试验证明:2%玉米浆,1%玉米粉,0.1%K₂HPO₄,0.1%。MgSO₄.7H₂0是筛选产葡萄糖异构酶(EC 5,3,1.5)放线菌较适宜的培养基。酶反应时使用顾丁烯二酸钠缓冲溶液较好。显色法是测定葡萄糖异构酶比较简便准确的方法。     

三碘甲状腺原氨酸(T3)和甲状腺素(T4)固相放射免疫联合测定法

三碘甲状腺原氨酸(T₃)、甲状腺素(T₄)固相放射免疫联合测定法,是将₃抗体涂布在塑料小球上,将T₄抗体涂布在塑料管上。这种联合测定主要解决了T₃抗体对T₄的交叉反应。本法能在同一试管内进行,只需50μl血清样品,90分钟反应,可同时精确地测出两种激素水平,它比以往单独测定T₃或T₄的PEG双抗法更精确、快速和简便。     

血管生成素样蛋白4和Ⅱ型肺泡细胞表面抗原-6与急性呼吸窘迫综合征严重程度的关系及对预后的评估效能研究

摘要 目的：分析血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)和Ⅱ型肺泡细胞表面抗原-6(KL-6)与急性呼吸窘迫综合征严重程度的关系及对预后的评估效能。方法：选择我院自2020年1月至2022年12月收治的120例急性呼吸窘迫综合征患者作为研究对象（观察组）,根据氧合指数（PaO₂/FiO₂）分为轻度组、中度组和重度组;另选120例非急性呼吸窘迫综合征患者作为对照组。检测所有患者血清ANGPTL4和KL-6的表达水平,分析血清ANGPTL4和KL-6与APACHE Ⅱ评分、PaO₂/FiO₂的关系,使用受试者工作特征曲线（ROC）下面积（AUC）评价血清ANGPTL4联合KL-6对急性呼吸窘迫综合征预后的评估效能。结果：对比对照组,观察组血清ANGPTL4、KL-6的表达水平均明显升高（P＜0.05）;血清ANGPTL4、KL-6的表达水平在轻度组、中度组和重度组中差异有统计学意义,且急性呼吸窘迫综合征越严重,升高越明显（P＜0.05）;经Pearson相关性分析,急性呼吸窘迫综合征患者血清ANGPTL4、KL-6的表达水平与PaO₂/FiO₂呈负相关,与APACHE Ⅱ评分呈正相关（P＜0.05）;经ROC曲线分析,血清ANGPTL4联合KL-6预测急性呼吸窘迫综合征患者入院28d内死亡的敏感度为90.14%、特异度为65.74%,AUC为0.900。结论：血清ANGPTL4、KL-6表达水平升高与急性呼吸窘迫综合征严重程度增大密切相关,两者联合在患者预后评估中具有一定价值,可作为判断病情及预后的辅助指标。     

高温放线菌V4菌株热稳定β-淀粉酶的产生及其性质的研究

高温放线菌V₄菌株(Thermoactinomyces sp.V₄)产生的β－淀粉酶最适反应温度为70℃,最适pH为6,酶的热稳定性良好,50℃(4h)不失去酶活力,55℃(2h)保持最初活力的92％,酶对可溶性淀粉的水解率达77％,纸层析结果显示水解产物主要为麦芽糖,经旋光测定,水解产物具有β－构型。巯基抑制剂对此β－淀粉酶无抑制作用。V₄菌株同时产生异淀粉酶及少量的－菌一淀粉酶。