柱串联法在凝胶过渡色谱中的应用一例

凝胶过滤色谱因其操作方法简单、重复性强等特点在大分子的分离化中被广泛使用,特别在基因工程蛋白质类药物的精细纯化中起着难以替代的作用。将Superdex75凝胶柱与SephacrylS-100凝胶柱串联在一起进行凝胶过滤,分离一种用普通凝胶过滤色谱难以分离的样品,成功地将分辨率（Rs）由0．71提高到1．70,得到了基线分离。     

蛋白质凝胶过滤色谱上样方法的改进

凝胶过滤色谱因其操作方法简单,重复性强等特点在生物大分子的分离纯化中被广泛使用。特别在基因工程蛋白质类药物的精细纯化中起着难以替代的作用。但由于蛋白质凝胶过滤色谱要求样品上样体积较小及洗脱流速较小时才能获得理想的分辨率,这使得凝胶过滤色谱经常成为蛋白质大规模纯化工艺中的限速步骤。本介绍一种改进的上样方法,在不降低分辨率的前提下,可将单位时间内凝胶过滤柱的产量提高两倍。     

高效凝胶色谱测定蛋白质分子量

自从1959年凝胶过滤色谱出现以来,很快就提出这种方法可做为一种测定蛋白质分子量的手段。但经典的凝胶过滤色谱流速慢、柱效低、检测灵敏度和操作的自动化程度也不高。因此,长期以来凝胶过滤主要还是作为一种分离的手段,并不经常用来测定分子量。近年来高效凝胶过滤色谱法的出现,使这项技术有了进一步的发展。一些新型的高效液相色谱柱也表现出在一定的分子量范围内分配系数(Kd)与分子量对数呈近似线性的关系,因此利用高效液相色谱的高效、高速、高     

凝胶柱层析分离虎杖中白藜芦醇的研究

本论文初步探讨了虎杖中白藜芦醇分离纯化的工艺条件,比较了不同溶剂、不同浓度、不同流速洗脱条件下白藜芦醇样品在LH-20凝胶层析柱上的分离效果,以及虎杖的乙醇提取液通过氯仿、乙酸乙酯萃取,凝胶柱层析分离后的成分变化,实验表明,当以甲醇为洗脱液,浓度为60%,流速为0.5 mL/min时,白藜芦醇样品的分离效果最好.采用中压液相色谱检测收集到的白藜芦醇纯度(以白藜芦醇峰面积占总峰面积计算)可达80.34%,回收率达86.16%.     

多维液相色谱分离技术在复杂蛋白质组学样品鉴定中的应用

目的：随着蛋白组学技术的发展,液相色谱-串联质谱的联用技术（液质联用）逐渐成为蛋白组学的主流技术。方法：通过结合各种不同原理的色谱分离类型,多维液相色谱分离技术能够极大的提高分离系统的峰容量,达到有效分离复杂程度很高的蛋白质组学样品的目的。结果：最广泛使用的多维液相色谱分离系统是离子交换色谱（IEX）和反相色谱（RP）的二维结合,近年来又发展出了分离能力更强的三维液相色谱分离系统,并且已经在蛋白质组学研究中得到了应用。结论：本文综述了多种多维液相色谱分离方法,在这些方法中,不同的分离原理的色谱类型被用于肽段或蛋白混合物的预分离中,有效促进了样品的充分分离,极大地提高了复杂样品的蛋白组学鉴定能力。     

蛋白质的印迹法

所谓印迹法就是生物样品(如核酸、蛋白质等)先经过凝胶(琼脂、聚丙烯酰胺等)电泳后,载有样品区带或点子的凝胶通过压片扩散或电泳迁移,把凝胶中分离的样品转移到硝酸纤维素滤纸上,并用一定的探针进行检测的方法。     

马氏钳蝎毒素中多肽BmK4112的分离纯化和一级结？…

对马氏钳蝎粗毒中多肽进行分离纯人级鉴定。应用凝胶过滤、离子交换和ＨＰＬＣ的反相色谱方法分离纯化样品。应用二疏基苏醇（ＤＴＴ）还原,碘乙酸保护法对纯化样品进行修饰,修饰样品经酶解后应用Ｅｄｒｎａｎ降解法,并结合ＥＳＩ－ＭＳ法和串联质谱法（ＭＳ－ＭＳ）分析肽的序列。比较修饰前后的质谱,测定分子中的二硫链数目。分离纯化工获得多肽ＢｍＫ４１１２,其一级结构为ＴＰＹＰＶ ＮＣＫＴＤ ＲＤＣＶＭ ＣＧＬＧＩ     

湛江红树林可培养内生真菌多样性及Stemphyliums sp. SCSIO 40436次生代谢产物分离与鉴定

【背景】红树林生态系统位于陆地和海洋的交汇地带,具有巨大的生态价值和经济效益。红树林内生真菌种类丰富,次生代谢产物结构多样、活性优异,是小分子天然产物和药物研发的重要来源。【目的】从湛江红树林植物样品分离、鉴定和筛选内生真菌,分离筛选菌株Stemphyliums sp. SCSIO 40436次生代谢产物并进行活性筛选。【方法】基于ITS序列鉴定种属研究内生真菌多样性;通过高效液相色谱和滤纸片扩散法筛选大米和燕麦固体培养基培养菌株的化学多样性及抑菌活性。应用硅胶、凝胶和反相色谱等色谱学方法分离纯化;应用高分辨质谱、核磁、X射线单晶衍射、圆二色谱等波谱手段确定化合物的平面结构与立体构型;采用微量肉汤稀释法测定分离化合物的最小抑菌浓度。【结果】从湛江高桥红树林植物样品分离纯化获得52株内生真菌,通过ITS序列比对归属于29个属。筛选到菌株Stemphylium sp. SCSIO 40436,从其发酵粗提物中分离得到5个聚酮化合物stemphol (1)、macrosporin (2)、altersolanol A (3)、alterporriol E (4)和alterporriol D...     

高效液相色谱法对农业样品中氨基酸含量的测定

介绍了采用一种新型的国产氨基酸色谱柱ＹＷＧＡ—Ａ柱,对与农业有关的多种样品进行氨基酸测定的方法。这种色谱柱可使全部氨基酸得到完全的分离,且柱效高,柱压低,价格便宜。农业样品的品种多,比较复杂,文中还对不同样品的前处理做了简要叙述。氨基酸的分析方法采用的是柱前衍生ＯＰＡ法,还对此方法测定中的一些问题进行了讨论。     

绿豆非特异性脂转移蛋白结构与功能的关系分析

利用硫酸铵沉降、弱阳离子色谱、强阳离子交换色谱、高效液相离子交换色谱和凝胶色谱等方法从绿豆中分离纯化非特异性脂转移蛋白nsLTP,并培养出绿豆nsLTP的晶体。对绿豆非特异性脂转移蛋白结构与功能关系作了分析报道。     

在氢氧化铝凝胶灭活寨卡病毒疫苗中甲醛残留量的测定方法

<正>建立了一种简便测定氢氧化铝凝胶配制的灭活寨卡病毒疫苗中甲醛残留量的方法,以用于药品质量评价。甲醛与2,4-二硝基苯肼(DNPH)反应,衍生产物用高效液相色谱检测,检测波长为360 nm。衍生化反应可在高效液相色谱中2 mL样品管进行样品直接分析。该方法已根据国际药品注册协调会议Q2指南得到充分验证。氢氧化铝凝胶质量浓度达     

不经染色直接从SDS-PAGE制备凝胶中准确切下所需蛋白条带的方法

蛋白样品的垂直板SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)不但是一种最常用的蛋白分析方法,也经常用于蛋白质的制备。从电泳凝胶上纯化蛋白,一般都要先用考马斯亮蓝染色,然后切下所需的蛋白条带。这里介绍一种可以不染色,直接从SDS-PAGE制备凝胶上准确切割所需蛋白条带的方法。与染色后切胶的方法相比,这种方法简单、省时,分离到的蛋白容易从胶中洗脱回收,并可明显提高回收率,而且省去了令人烦怖的从回收的蛋白中脱去染色时结合的染料的问题。作者曾用此方法分离过多种蛋白,屡试不爽。这种方法与一般的SDS-PAGE制备电泳的差别主要在电泳结束后对凝胶的处理上。     

介绍一种制备管状梯度凝胶的装置

梯度凝胶电泳分离生物大分子具有分辨力高、区带清晰的特点,特别适于分离γ-谷氨酰转肽酶一类膜结合蛋白。此外还可利用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量。目前这种方法多是用垂直平板凝胶。本文介绍一套自制管状梯度凝胶的装置和制备凝胶的方法。用这种方法,既节省试剂     

柠檬果皮中各种降压组分的分离精制及其结构

前言本文以柠檬果皮中各个降压组分的分离、精制及确定其结构为目的而进行的研究。以前,在柠檬果皮中具有降压作用的某些活性物质的分离、精制是采用热水抽提,凝胶过滤,高效液相色谱等方法进行。但出现的问题是:在液相色谱图中有其它杂质峰。因此,改用热水抽提,凝胶过滤后,做TLC法,虽然能取得较为满意的结果,但获得的量太少,后     

一种提高固定pH梯度（IPG）凝胶双向电泳的重复性、分辨率和通量的方法

在蛋白质组学研究中 ,双向聚丙烯酰胺凝胶电泳是现行蛋白质分离的最重要的方法之一。实验发展了一种提高固定pH梯度 (IPG)凝胶双向电泳的重复性、分辨率和通量的方法 :在一块SDS 聚丙烯酰胺凝胶上同时进行多块固定pH梯度(IPG)凝胶 (Multi stripsononeSDSgel,MSOG)电泳。用此方法比较了人肝癌细胞、不同生长状态的人肝癌细胞、3T3细胞的蛋白质以及同一个样品在不同大小的第二向凝胶系统 (大型和中型凝胶 )的双向电泳图谱。结果表明 ,同一样品在 13cmIPGStrip双向电泳可分离 2 0 0 0以上蛋白质点且图谱蛋白质点的匹配率可超过 95 %以上。同时又可以最大程度地降低凝胶背景对蛋白质点比较分析的干扰 ,从而提高了双向电泳分离蛋白质的分辨率和通量。这些优点都有助于差异蛋白质组学特别是细胞器差异蛋白质组学研究的自动化。     

人血清白蛋白纯化技术研究进展

本文综述了国内外关于血浆人血清白蛋白（pHSA）和基因重组人血清白蛋白（rHSA）分离纯化的进展和发展趋势。以冷乙醇沉淀为主的pHSA分离方法仍是目前多数工业采用的工艺,但近年来发展的离子交换色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等多种色谱分离技术具有自动化程度高、生产周期短、更符合GMP等特点,正在逐步取代传统的冷乙醇沉淀法。当前用基因工程技术表达的人血清白蛋白对分离纯化提出了新的挑战。为获得高纯度、安全、稳定的产品,各种色谱分离技术得到更多的应用,其中扩张床离子交换色谱可以省去离心、过滤等传统固液分离操作。尽管rHSA的纯化技术已有一定的发展,但纯化过程仍需进一步优化以提高产品纯度及收率。     

双向凝胶电泳技术进展

双向聚丙烯酰胺凝胶电泳按等电点和分子量对蛋白质进行分离,具有很高的分辨率,已经成为蛋白质组研究中的核心技术之一。目前的方法还难以满足真核生物蛋白质组研究的要求。自1975年O'Farrell提出该方法以来,针对应用中常见的一些问题,如样品的增溶及加载,样品的预分级分离,阴极漂移和凝胶上蛋白质的回收等,对这种技术进行了不断的改进。     

一株南海红树林底泥抗真菌放线菌(No.H74-18)的化学成分研究

对我国南海红树林底泥中分离的一株放线菌(No.H74-18)的发酵菌丝体采用95%乙醇提取,并对具有抗真菌活性的乙酸乙酯部位进行研究,通过硅胶开放柱色谱分离得到了一个结晶样品。通过制备型反相高效液相色谱分离,从此结晶样品中分离纯化出3个化合物,经NMR、MS等光谱学方法分别鉴定为抗霉素A1(1)、抗霉素A2a(2)、抗霉素A3(3),这些化合物都是抗霉素类化合物。采用LC-MS联用技术分析了此结晶样品中存在的抗霉素类的可能组份。     

介绍一种蛋白、配体快速分离的方法——离心柱法

在我们的实验工作中,将生物大分子与配体分离或除去盐份,改变蛋白的缓冲体系的工作,可以说是每天都离不开。透析和分子筛层析等是常用的好方法。但透析方法的缺点是需要时间较长,对于不够稳定的样品也不适用。用分子筛柱可以较快分离,但普通柱层析方法往往导致样品的稀释而不可避免地造成损失。这里介绍一种快速、回收率高且不稀释样品的凝胶柱分离方法。由于这个方法首先由美国纽约城公共     

春砂仁内生真菌Letendraea helminthicola A696的次级代谢产物研究

研究春砂仁内生真菌Letendraea helminthicola A696的次级代谢产物,采用硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱、凝胶柱色谱及高效液相色谱等方法从该菌株的发酵液中分离得到8个化合物,通过理化性质及谱学数据分析,分别鉴定为11-hydroxyl tricinonoic acid(1)、3-(3,5-二叔丁基-...